本文選題：三陰性乳腺癌 + miR-664b-5p��； 參考：《南方醫(yī)科大學》2017年博士論文

【摘要】：背景:研究證據表明,在BRCA1突變的三陰乳腺癌患者中,在原有化療方案基礎上聯合PARP抑制劑獲得的臨床效應優(yōu)于未聯合PARP抑制劑的原方案。許多關于基于鉑類的化療方案的臨床試驗已經證實鉑類化合物對三陰性乳腺癌患者有重要臨床作用,特別是那些含有BRCAl/2突變的。miRNA通過結合到mRNA 3'端非編碼區(qū)轉錄后下調靶基因表達,并在許多重要的病理生理過程中發(fā)揮作用。據報道,miRNA的異常表達參與調節(jié)乳腺癌的化療敏感性。但是潛在機制還沒有完全闡明。方法:兩株BRCA1突變的三陰性乳腺癌細胞系,經卡鉑加吉西他濱聯合或未聯合PARP抑制劑奧拉帕尼處理后,用miRNA芯片篩選差異表達的miRNAs。經qRT-PCR驗證后,選擇miR-664b-5p進一步研究。體外研究,細胞經藥物處理或轉染后,通過MTT試驗檢測細胞生長,流式細胞術檢測細胞周期和凋亡,劃痕和transwell侵襲實驗檢測細胞遷移和侵襲能力,qRT-PCR、免疫印跡和免疫熒光檢測CCNE2的表達。以熒光素酶基因報告實驗評估m(xù)iR-664b-5p對CCNE2的作用。體內腫瘤生長用小鼠異種移植物腫瘤模型進行評估,經空載的或miR-664b-5p過表達的慢病毒表達載體轉染的HCC1937細胞在無菌條件下注射到六周大的雌性BALB/c裸鼠皮下形成腫瘤異種移植,并定期測量腫瘤體積。最后,在三陰性乳腺癌組織中,用免疫組化染色法測定細胞周期蛋白E2表達,熒光原位雜交測定miR-664b-5p表達,并分析他們之間的相關性。結果:我們發(fā)現,與對照組相比,在BRCA1突變的三陰性乳腺癌細胞MDA-MB-436和HCC1937中,卡鉑加吉西他濱聯合PARP抑制劑奧拉帕尼能夠上調miR-664b-5p表達,而在非BRCA1突變的三陰性乳腺癌細胞MDA-MB-231中則不能。功能實驗表明在BRCA1突變的三陰性乳腺癌細胞中,miR-664b-5p過表達抑制細胞增殖,阻斷細胞周期G1期向S期轉化,促進細胞凋亡,并抑制遷移和侵襲,而抑制miR-664b-5p則產生相反的效應。CCNE2被確認為miR-664b-5p的功能靶基因,miR-664b-5p過表達下調CCNE2蛋白和mRNA的表達。在BRCA1突變的三陰性乳腺癌細胞中,CCNE2敲除對細胞產生的效應與miR-664b-5p過表達類似。CCNE2敲除和miR-664b-5p過表達都顯著增加BRCA1突變的三陰性乳腺癌細胞對卡鉑加吉西他濱的化療敏感性,而抑制miR-664b-5p削弱卡鉑加吉西聯合PARP抑制劑奧拉帕尼引起的生長抑制作用。此外,小鼠移植瘤模型研究表明,與對照組相比miR-664b-5p能夠抑制體內腫瘤生長,且PCR和免疫組化結果顯示miR-664b-5p過表達腫瘤異種移植物中CCNE2 mRNA和蛋白表達更低。在90例三陰性乳腺癌臨床樣本中,54例(60.0%)高表達細胞周期蛋白E2,40例(44.4%)高表達miR-664b-5p。mmiR-664b-5p表達與CCNE2表達呈負相關。結論:miR-664b-5p作為腫瘤抑制因子,通過靶向抑制CCNE2在PARP抑制劑增加化療敏感性作用中發(fā)揮重要作用。這可能是PARP抑制劑增加BRCA1突變的三陰性乳腺癌對化療的敏感性的機制之一。
[Abstract]:The expression of miR - 664b - 5p and the expression of miR - 664b - 5p in three - negative breast cancer cells , including BRCAl / 2 mutation , were assessed by immunohistochemistry staining .

【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9

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本文編號：1844600