發(fā)布時(shí)間：2018-05-02 19:50

  本文選題：腫瘤干細(xì)胞 + 循環(huán)腫瘤細(xì)胞��； 參考：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：背景:腫瘤干細(xì)胞(tumor stem cells,TSC)學(xué)說提示腫瘤組織中存在極少部分腫瘤干細(xì)胞,其主要特點(diǎn)是自我更新、無限增殖的潛能和強(qiáng)致瘤性,腫瘤干細(xì)胞與腫瘤的發(fā)生、耐藥、復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移的惡性生物學(xué)行為密切相關(guān)。肺癌是目前中國發(fā)病率最高的惡性腫瘤,其中肺腺癌占肺癌總數(shù)的30%-40%,是肺癌最常見的組織類型之一。有研究者發(fā)現(xiàn)肺腺癌起源于氣道干細(xì)胞,氣道干細(xì)胞屬于氣道末段細(xì)支氣管肺泡導(dǎo)管連接處的細(xì)支氣管肺泡干細(xì)胞,肺腺癌被認(rèn)為是一種干細(xì)胞疾病,研究者認(rèn)為靶向殺滅肺癌干細(xì)胞才可能是根治肺癌的有效治療手段。尤其是近10余年的研究發(fā)現(xiàn),腫瘤干細(xì)胞可以扮演轉(zhuǎn)移灶的“種子”細(xì)胞角色,研究者認(rèn)為“轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞=腫瘤干細(xì)胞”。目前從血液循環(huán)中檢測出腫瘤細(xì)胞已經(jīng)是被認(rèn)可的臨床技術(shù),并且可從中分離培養(yǎng)出腫瘤干細(xì)胞。雖然該技術(shù)可檢測與分離出循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cells,CTCs),但費(fèi)用昂貴,這限制了其在科研和臨床的應(yīng)用與推廣,目前尚缺乏簡單便宜的分離培養(yǎng)方法,而且也缺乏后續(xù)干細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)的技術(shù)。由于肺腺癌的腫瘤干細(xì)胞起源于正常組織的干細(xì)胞,兩者生物學(xué)特性有許多相似之處,因此,本研究嘗試采用人造血干細(xì)胞甲基纖維素半固體培養(yǎng)基對肺腺癌患者外周血單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行集落培養(yǎng),并嘗試進(jìn)行集落細(xì)胞的體外培養(yǎng),為明確腫瘤干細(xì)胞特點(diǎn)提供前期實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。目的:本研究采用人造血干細(xì)胞甲基纖維素半固體培養(yǎng)基營造干細(xì)胞集落生長環(huán)境,對肺腺癌患者外周血單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行集落培養(yǎng)及采用DMEM培養(yǎng)基對集落細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng),以求達(dá)到以下目的:(1)探索肺腺癌患者外周血非造血干細(xì)胞存在的可能性;(2)探索采用人造血干細(xì)胞甲基纖維素培養(yǎng)基培養(yǎng)出非造血干細(xì)胞集落的可能性及集落培養(yǎng)的情況;(3)探索采用dmem液體培養(yǎng)基對肺腺癌患者外周血非造血干細(xì)胞集落細(xì)胞的體外培養(yǎng)情況。方法:選取肺腺癌患者10例,患者病情的臨床tnm分期為t2n1m1a-t4n3m1c。對各例患者均抽取外周血10ml,利用ficoll-paquetmplus分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞,用甲基纖維素半固體培養(yǎng)基(含重組人干細(xì)胞因子等適合干細(xì)胞的生長因子)對其進(jìn)行培養(yǎng),動(dòng)態(tài)觀察細(xì)胞、集落的生長情況,描述集落生長形態(tài)和生長曲線,辨析出非造血干細(xì)胞克隆類型,并挑選非造血干細(xì)胞集落進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測,檢測指標(biāo)為cd34與cd44,挑取非造血干細(xì)胞集落,機(jī)械分離后,在體外完全培養(yǎng)基條件下進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng),并觀察其體外培養(yǎng)情況。結(jié)果:本研究共進(jìn)行10例肺腺癌患者外周血單個(gè)核細(xì)胞集落培養(yǎng)研究,每一份培養(yǎng)物加入細(xì)胞量為(2.2±0.149)×105個(gè)細(xì)胞,經(jīng)過2周左右培養(yǎng),每一份培養(yǎng)物的細(xì)胞集落平均為120.70±27.893個(gè),細(xì)胞集落生長曲線顯示:在培養(yǎng)第5-7天細(xì)胞開始聚集成團(tuán)狀,第8-10天小型、初步細(xì)胞集落形成,第14-16天細(xì)胞集落形成,集落類型主要為bfu-e樣、cfu-g樣和cfu-gemm樣集落,其中,bfu-e樣與cfu-gemm樣集落周邊出現(xiàn)“鋪路石”狀細(xì)胞集落,呈密集片狀,細(xì)胞間界限不清,挑取該細(xì)胞集落進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)cd34與cd44雙標(biāo)檢測,發(fā)現(xiàn)該細(xì)胞群體是cd34lowcd44high特點(diǎn)的細(xì)胞群體。進(jìn)一步挑取上述不同類型集落進(jìn)行體外完全培養(yǎng)基的培養(yǎng),并連續(xù)8周觀察,均未發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞的生成與增殖。結(jié)論:(1)在肺腺癌患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中,非造血干細(xì)胞存在的可能性是有的;(2)采用人造血干細(xì)胞甲基纖維素培養(yǎng)基培養(yǎng)出非造血干細(xì)胞集落的可能性非常大,可能是源于“循環(huán)腫瘤細(xì)胞”;(3)很可能存在的非造血干細(xì)胞的體外培養(yǎng)需要進(jìn)一步在培養(yǎng)基成分調(diào)整、實(shí)驗(yàn)技術(shù)提高的情況下進(jìn)行。
[Abstract]:Background : The tumor stem cells ( CTCs ) are the most common malignant tumor in China . The colony formation and proliferation of non - hematopoietic stem cells in peripheral blood mononuclear cells of 10 patients with adenocarcinoma of lung were studied .

【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R734.2

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本文編號(hào)：1835247