本文選題：RNA結(jié)合蛋白 + RNPC1　； 參考：《南京醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：目的：研究乳腺癌中RNA結(jié)合蛋白R(shí)NPC1通過(guò)調(diào)節(jié)mRNA穩(wěn)定性進(jìn)而調(diào)節(jié)PR的具體機(jī)制,并研究RNPC1對(duì)于PR功能的影響。材料與方法：在乳腺癌組織中運(yùn)用免疫組化方法檢測(cè)RNPC1和PR的表達(dá)情況,并在乳腺癌細(xì)胞中用免疫熒光檢測(cè)RNPC1和PR的表達(dá)定位。通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染,在乳腺癌細(xì)胞株MCF7, BT474, SUM1315, MDA-MB-231中構(gòu)建RNPC1和PR的過(guò)表達(dá)及干擾的細(xì)胞模型。實(shí)時(shí)熒光定量PCR (qRT-PCR)及Western-blot分別用來(lái)檢測(cè)相關(guān)PR及其下游靶基因mRNA和蛋白的表達(dá)水平。同時(shí)鑒于ER對(duì)于PR也有調(diào)節(jié)作用,首先通過(guò)轉(zhuǎn)染ER干擾慢病毒,進(jìn)行ER敲除,進(jìn)而進(jìn)行RNPC1過(guò)表達(dá)及干擾細(xì)胞系構(gòu)建,并檢測(cè)PR的mRNA和蛋白的表達(dá)水平。放線菌素D用以處理RNPC1(RNPC1)過(guò)表達(dá)及其對(duì)照(NC)細(xì)胞株,RNPC1干擾(shRNPC1)及其相應(yīng)對(duì)照(SCR)細(xì)胞株,并分別于不同時(shí)間點(diǎn)用qRT-PCR檢測(cè)PR的mRNA水平。RNA免疫共沉淀(RIP)用以驗(yàn)證RNPC1蛋白與PR mRNA的結(jié)合反應(yīng)。RNA電泳遷移率(REMSA)實(shí)驗(yàn)用以檢測(cè)RNPC1蛋白與PR具體結(jié)合位點(diǎn)。雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)用以進(jìn)一步證實(shí)RNPC1蛋白與PR結(jié)合的位點(diǎn)并驗(yàn)證其功能。CCK8和平板克隆實(shí)驗(yàn)用以檢測(cè)RNPC1過(guò)表達(dá)及敲除后的細(xì)胞株對(duì)孕激素處理的功能變化。通過(guò)RNPC1及ER的雙敲除細(xì)胞株中PR的檢測(cè)以確定ER在RNPC1調(diào)節(jié)PR過(guò)程中的作用。通過(guò)在NOD-SCID小鼠體內(nèi)構(gòu)建人源性乳腺移植模型,提高乳腺癌細(xì)胞成瘤效率,并通過(guò)皮下包埋孕激素緩釋片檢測(cè)過(guò)表達(dá)RNPC1對(duì)于孕激素處理的體內(nèi)成瘤效果的影響。結(jié)果：在乳腺癌組織中RNPC1與PR表達(dá)具有正相關(guān)性(P0.05)。RNPC1在乳腺癌細(xì)胞中的定位是在細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)中,PR主要定位于細(xì)胞核。乳腺癌細(xì)胞MCF-7級(jí)BT474細(xì)胞中,過(guò)表達(dá)RNPC1, PR表達(dá)上調(diào),敲除RNPC1, PR表達(dá)降低,同時(shí)檢測(cè)PR下游靶基因Wnt4和β-catemin均受到RNPC1調(diào)節(jié)。而在敲除ER的細(xì)胞系中,RNPC1對(duì)于PR仍有調(diào)節(jié)作用,說(shuō)明RNPC1對(duì)于PR的調(diào)節(jié)是獨(dú)立的過(guò)程。過(guò)表達(dá)RNPC1后,PR的mRNA穩(wěn)定性增強(qiáng),而敲除RNPC1則降低PR的mRNA穩(wěn)定性。RNPC1可以和PR的3’非翻譯區(qū)的AU-富含元件結(jié)合進(jìn)而增強(qiáng)其穩(wěn)定性。功能實(shí)驗(yàn)也表明,RNPC1可以增強(qiáng)通過(guò)PR而發(fā)揮促進(jìn)增殖作用的孕激素的功能。結(jié)論：乳腺癌中RNPC1與PR具有相關(guān)性,過(guò)表達(dá)RNPC1可以促進(jìn)PR表達(dá),干擾RNPC1降低PR表達(dá)。RNPC1可以和PR的mRNA 3'非翻譯區(qū)結(jié)合,增強(qiáng)mRNA穩(wěn)定性。RNPC1可以增強(qiáng)通過(guò)PR發(fā)揮作用的孕激素的促增殖作用。
[Abstract]:Aim: to study the mechanism of RNA binding protein RNPC1 regulating PR by regulating the stability of mRNA in breast cancer and the effect of RNPC1 on PR function. Materials and methods: immunohistochemical method was used to detect the expression of RNPC1 and PR in breast cancer, and immunofluorescence was used to detect the expression of RNPC1 and PR in breast cancer cells. The overexpression and interference of RNPC1 and PR in breast cancer cell lines MCF7, BT474, SUM1315, MDA-MB-231 were established by lentivirus transfection. Real-time quantitative PCR qRT-PCR and Western-blot were used to detect the expression level of mRNA and protein in PR and its downstream target genes, respectively. At the same time, ER can also regulate PR. Firstly, ER interferes with lentivirus, carries out ER knockout, then overexpresses RNPC1 and interferes cell line construction, and detects the expression level of mRNA and protein of PR. Actinomycin D was used to treat the overexpression of RNPC1 / RNPC1 and its control cell line (RNPC1), which interfered with shRNPC1) and its corresponding control cell line (SCR). At different time points, qRT-PCR was used to detect the mRNA level of PR. The RIPs were used to verify the binding reaction between RNPC1 protein and PR mRNA. The RMSAs were used to detect the specific binding sites of RNPC1 protein to PR. Double luciferase assay was used to further confirm the binding site of RNPC1 protein to PR, and to verify its function. CCK8 and plate cloning assay were used to detect the changes of progesterone treatment in RNPC1 overexpression and knockout cell lines. The role of ER in the regulation of PR by RNPC1 was determined by the detection of PR in RNPC1 and ER double knockout cell lines. Human mammary gland transplantation model was established in NOD-SCID mice to improve the tumorigenic efficiency of breast cancer cells. The effect of overexpression of RNPC1 on the tumorigenesis of breast cancer cells treated with progesterone was detected by subcutaneous embedding of progesterone sustained-release tablets. Results: there was a positive correlation between the expression of RNPC1 and PR in breast cancer cells. The localization of RNPC1 in breast cancer cells was mainly located in the nucleus and cytoplasm. Overexpression of RNPC1, up-regulation of PR expression, down-regulation of knockout RNPC1 and decrease of PR expression were observed in BT474 cells of MCF-7 grade. Wnt4 and 尾 -catemin, the downstream target genes of PR, were all regulated by RNPC1. However, RNPC1 still regulates PR in the cell line that knockout ER, indicating that the regulation of PR by RNPC1 is an independent process. The mRNA stability of PR was enhanced after overexpression of RNPC1, while knockout RNPC1 decreased the mRNA stability of PR. RNPC1 could bind to AU-rich elements in 3'untranslated region of PR and enhance its stability. Functional experiments also showed that RNPC1 could enhance the progesterone function which promoted proliferation through PR. Conclusion: there is a correlation between RNPC1 and PR in breast cancer. Overexpression of RNPC1 can promote the expression of PR and interfere with the decrease of PR expression. RNPC1 can bind to the mRNA 3 'untranslated region of PR. Enhancing the stability of mRNA. RNPC1 could enhance the proliferation of progesterone acting through PR.
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.9

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 黃嘯原;用“印度閱兵”形容乳腺癌合適嗎?[J];診斷病理學(xué)雜志;2001年02期

2 張嘉慶,王殊,喬新民;乳腺癌的現(xiàn)狀和遠(yuǎn)景[J];中華外科雜志;2002年03期

3 張維彬,汪波,石靈春;中醫(yī)藥在現(xiàn)代乳腺癌治療中的運(yùn)用[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合急救雜志;2002年01期

4 薛志勇;食物與乳腺癌[J];山東食品科技;2002年04期

5 王旬果,王建軍,鄭國(guó)華;乳腺癌相關(guān)標(biāo)志物的研究進(jìn)展[J];山東醫(yī)藥;2002年33期

6 陸尚聞;;男人也患乳腺癌[J];環(huán)境;2003年12期

7 ;新技術(shù)清晰拍攝早期乳腺癌細(xì)胞[J];上海生物醫(yī)學(xué)工程;2005年04期

8 田富國(guó);郭向陽(yáng);張華一;;乳腺癌診治研究新進(jìn)展[J];腫瘤研究與臨床;2005年S1期

9 馬濤,谷俊朝;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與乳腺癌的臨床研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(外科學(xué)分冊(cè));2005年01期

10 郭慶良,谷俊朝;乳腺癌和瘦素相關(guān)性研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊(cè);2005年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 于永利;;抗乳腺癌免疫治療融合蛋白[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)會(huì)議議程及論文摘要集[C];2002年

2 郭紅飛;;中醫(yī)治療乳腺癌的策略[A];江西省中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合腫瘤學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2012年

3 龐朋沙;伍會(huì)健;;乳腺癌治療靶標(biāo)的研究進(jìn)展[A];北方遺傳資源的保護(hù)與利用研討會(huì)論文匯編[C];2010年

4 陸勁松;邵志敏;吳炅;韓企夏;沈鎮(zhèn)宙;;新型維甲酸抑制乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)及誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制研究[A];2000全國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2000年

5 劉愛(ài)國(guó);胡冰;;乳腺癌臨床治療進(jìn)展[A];安徽省抗癌協(xié)會(huì)第四次代表大會(huì)暨乳腺癌、肺癌專業(yè)委員會(huì)成立會(huì)議、安徽省腫瘤防治進(jìn)展學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2001年

6 張嘉慶;王殊;喬新民;;乳腺癌的現(xiàn)狀和遠(yuǎn)景[A];第一屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合乳腺疾病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2002年

7 劉清俊;;乳腺癌綜合治療的新進(jìn)展[A];山西省抗癌協(xié)會(huì)第六屆腫瘤學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2003年

8 邵志敏;;21世紀(jì)乳腺癌治療的展望[A];第三屆中國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)教育論文集[C];2004年

9 陳松旺;張明;;乳腺癌治療的回顧與展望[A];西部地區(qū)腫瘤學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

10 白霞;傅建新;丁凱陽(yáng);王兆鉞;阮長(zhǎng)耿;;組織因子途徑抑制物-2在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)研究[A];第10屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2005年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 ;血檢有望揭示乳腺癌治療效果[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2004年

2 記者 鄭曉春;乳腺癌細(xì)胞擴(kuò)散基因被找到[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

3 中國(guó)軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤中心主任 宋三泰;乳腺癌有了新療法[N];中國(guó)婦女報(bào);2002年

4 王艷紅;抑制ＤＮＡ修補(bǔ)可消滅乳腺癌細(xì)胞[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

5 詹建;乳腺癌飲食 兩個(gè)時(shí)期不一樣[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2006年

6 辛君;乳腺癌擴(kuò)散基因“浮出水面”[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2009年

7 記者 毛黎;美發(fā)現(xiàn)有效抑制乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的分子[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

8 記者 吳春燕　通訊員 王麗霞;乳腺癌治療將有新途徑[N];光明日?qǐng)?bào);2011年

9 王樂(lè)　沈基飛;我科學(xué)家發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致乳腺癌耐藥的新標(biāo)志物[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

10 劉霞;一種天然分子能阻止乳腺癌惡化[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 柴紅燕;疾病狀態(tài)下CYP4Z1和4A的生物學(xué)行為及其藥物干預(yù)研究[D];武漢大學(xué);2012年

2 李凱;ID(inhibitor of DNA binding)家族蛋白調(diào)控乳腺細(xì)胞的分化并影響乳腺癌的預(yù)后[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 江一舟;乳腺癌新輔助化療前后基因變異檢測(cè)及其功能論證[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 馬邵;酪氨酸去磷酸化增強(qiáng)表皮生長(zhǎng)因子受體在乳腺癌治療中靶向性的研究[D];山東大學(xué);2015年

5 姚若斯;精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶PRMT7誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞發(fā)生表皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)換及轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制研究[D];東北師范大學(xué);2015年

6 侯培鋒;α-酮戊二酸二甲酯(DM-2KG)上調(diào)缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)誘發(fā)高致瘤性干細(xì)胞樣乳腺癌細(xì)胞機(jī)制研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2014年

7 李麗麗;分泌蛋白SHON調(diào)控乳腺癌細(xì)胞EMT的分子機(jī)制研究[D];東北師范大學(xué);2015年

8 陳麗艷;PI3K抑制劑聯(lián)合組蛋白去乙�；敢种苿⿲�(duì)乳腺癌協(xié)同殺傷作用的分子機(jī)制研究[D];延邊大學(xué);2015年

9 樸俊杰;乳腺癌差異基因篩選及PAIP1對(duì)其生物學(xué)行為的影響[D];延邊大學(xué);2015年

10 汪[?如;染色體6q25.1區(qū)域基因多態(tài)性與乳腺癌遺傳易感性的關(guān)聯(lián)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 杜文英;乳腺癌分子亞型的臨床與病理特點(diǎn)[D];鄭州大學(xué);2011年

2 賈曉菲;彩色多普勒超聲與乳腺癌病理及免疫組化指標(biāo)的相關(guān)性研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

3 靳文;乳腺癌全基因組DNA甲基化修飾的研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

4 吳坤琳;TLR4/MyD88信號(hào)通路對(duì)乳腺癌侵襲性影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

5 葛廣哲;樹，

本文編號(hào)：1831642