本文選題：乳腺癌干細胞 + NMI��； 參考：《大連醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：目的:乳腺癌是全球癌癥中導致女性死亡的主要因素之一。目前主要的治療方法包括手術、放療以及化療。然而,即使通過治療,乳腺癌也存在一定的可能性復發(fā),而造成這種可能的主要原因之一,便是由于乳腺癌干細胞的存在。研究表明,乳腺癌組織中存在一群CD44+CD24-的腫瘤細胞,它們具有極強的復制及自我更新能力,將此細胞群稱為乳腺癌干細胞。它們數(shù)量極少,但對于常規(guī)的放化療不敏感,因此靶向乳腺癌干細胞是目前治療乳腺癌的重要方向。NMI是一種能與多種轉錄因子結合的蛋白,它通過與其它轉錄因子的結合,參與多種細胞活動,如DNA損傷、細胞周期及上皮-間質轉化等,并且在乳腺癌細胞中,主要發(fā)揮抑癌作用。然而,NMI對于乳腺癌干細胞的影響目前知之甚少。因此,進一步研NMI在乳腺癌干細胞發(fā)生發(fā)展中的功能和具體的分子機制,從而為乳腺癌的診斷和治療提供新靶標具有重要意義。方法:1.通過成球實驗富集乳腺癌干細胞并利用流式細胞術檢測其CD44/CD24表達情況;利用Western blot及q RT-PCR檢測NMI及干性指標Nanog、Oct4及Sox2的表達情況;利用GEO數(shù)據(jù)庫GSE15192 m RNA表達數(shù)據(jù),分析在CD44+CD24-及CD44-CD24+細胞群體中,NMI、CD44及CD24的表達情況。2.敲低及過表達NMI后,通過Western blot,q RT-PCR,成球實驗及流式細胞術,檢測NMI對于乳腺癌干細胞干性特性的影響。3.通過檢測NMI敲低后,h TERT啟動子熒光素酶活性,檢測NMI是否能影響h TERT轉錄活性;通過檢測NMI敲低后進行Western blot,檢測NMI能否影響h TERT蛋白水平;通過敲低NMI同時敲低h TERT,或者過表達NMI同時過表達h TERT后進行Western blot、流式細胞術、成球實驗、transwell及免疫熒光,檢測NMI對于乳腺癌細胞干性特點的影響,是否是通過h TERT介導的。4.動物實驗,通過皮下注射腫瘤細胞,構建裸鼠荷瘤動物模型,檢測NMI穩(wěn)定敲低/過表達的細胞系及其對照細胞系成瘤能力變化情況,并同時引入h TERT,進行rescue實驗;通過尾靜脈注射NMI穩(wěn)定過表達細胞系及其對照細胞系,檢測NMI過表達后,對于乳腺癌細胞轉移能力的影響。5.利用GEO數(shù)據(jù)庫,分析NMI與h TERT表達的相關性;利用組織芯片,進行免疫組織化學染色,檢測NMI與h TERT表達的相關性;分析NMI,h TERT與臨床病理分期及預后的關系。6.利用免疫共沉淀及質譜,尋找與NMI共同作用于h TERT的轉錄因子,并進行Western blot驗證。結果:1.相比于乳腺癌細胞,NMI在乳腺癌干細胞中呈低表達;2.敲低NMI,能增強干性相關基因NANOG、OCT4及SOX2的表達,增強乳腺癌細胞成球能力及CD44+CD24-細胞群體比例;3.過表達NMI,能抑制干性相關基因NANOG、OCT4及SOX2的表達,抑制乳腺癌細胞成球能力及CD44+CD24-細胞群體比例;4.NMI通過抑制h TERT轉錄,從而影響乳腺癌細胞干性特征;5.NMI通過h TERT影響乳腺癌細胞上皮-間質轉化能力及裸鼠成瘤能力;6.在臨床樣本中,NMI與h TERT表達呈負相關;7.NMI通過與YY1相互作用下調h TERT。結論:在正常乳腺組織中NMI表達水平較癌組織高,且NMI與h TERT表達呈負相關。細胞水平實驗表明,NMI能抑制乳腺癌細胞干性特點,且該能力是由h TERT介導。NMI通過抑制h TERT轉錄,從而抑制乳腺癌細胞干性特點。
[Abstract]:Purpose : Breast cancer is one of the main factors leading to female death in cancer of breast cancer . The main reasons for breast cancer stem cell are surgery , radiotherapy and chemotherapy . The expression of NMI , CD44 and CD24 in breast cancer stem cells is studied by Western blot and q RT - PCR . The expression of NMI in breast cancer cells was determined by subcutaneous injection of NMI . NMI can inhibit the dry character of breast cancer cells , and the ability is mediated by h . NMI can inhibit the transcription of hTERT , thus inhibiting the dry character of breast cancer cells .

【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9

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本文編號：1827933