本文選題：RNA干擾 + CD��； 參考：《免疫學雜志》2017年01期

【摘要】：目的運用RNAi慢病毒沉默CD59的表達,觀察其對急性T淋巴細胞白血病Jurkat細胞株增殖、凋亡的影響。方法構(gòu)建CD59 RNAi-EGFP融合蛋白慢病毒載體,轉(zhuǎn)染急性T系白血病Jurkat細胞株,篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞系,空病毒組為陰性對照,未處理的Jurkat細胞系作為空白對照;熒光顯微鏡和流式細胞儀觀察各組的細胞轉(zhuǎn)染效率;ELISA檢測各組細胞CD59的表達情況;RT-PCR檢測各組CD59基因以及凋亡相關(guān)基因Bcl-2/Bax m RNA的表達;CCK8表達檢測細胞增殖效率的改變;流式細胞術(shù)檢測各組細胞凋亡情況。結(jié)果熒光顯微鏡和FCM觀察轉(zhuǎn)染效率在90%以上;ELISA結(jié)果顯示實驗組細胞CD59蛋白表達降低;RT-PCR結(jié)果顯示實驗組CD59、Bcl-2 m RNA表達水平降低(P0.05),Bax m RNA表達水平升高(P0.05);CCK8結(jié)果顯示實驗組細胞增殖效率明顯降低(P0.05);流式細胞儀結(jié)果顯示沉默CD59的表達能夠促進細胞凋亡(P0.05)。結(jié)論沉默D59基因表達可抑制急性T系白血病Jurkat細胞株的增殖能力并誘導細胞凋亡,為臨床急性T系白血病的治療提供了新靶標、新思路。
[Abstract]:Objective to observe the effect of RNAi lentivirus on the proliferation and apoptosis of Jurkat cell line of acute T lymphocyte leukemia (AML) by silencing the expression of CD59. Methods CD59 RNAi-EGFP fusion protein lentivirus vector was constructed and transfected into Jurkat cell line of acute T-lineage leukemia. Stable transfected cell lines were selected. The empty virus group was negative control and the untreated Jurkat cell line was used as blank control. Fluorescence microscope and flow cytometry were used to observe the efficiency of cell transfection and Elisa to detect the expression of CD59 in each group. RT-PCR was used to detect the expression of CD59 gene and the expression of apoptosis-related gene Bcl-2/Bax m RNA. Apoptosis was detected by flow cytometry. Results fluorescence microscope and FCM showed that the transfection efficiency was more than 90%. The results of Elisa showed that the expression of CD59 protein in the experimental group was decreased. The result of RT-PCR showed that the expression of CD59 Bcl 2 m RNA decreased in the experimental group. The expression level of Bax m RNA in the experimental group was increased. The results showed that the expression level of CD59 protein in the experimental group was higher than that in the experimental group. The results of flow cytometry showed that silencing the expression of CD59 could promote cell apoptosis. Conclusion silencing the expression of D59 gene can inhibit the proliferation ability and induce apoptosis of Jurkat cell line of acute T-lineage leukemia, which provides a new target and new idea for clinical treatment of acute T-lineage leukemia.
【作者單位】： 青島大學醫(yī)學院;山東農(nóng)業(yè)大學生命科學院;
【基金】：國家自然科學基金(81273206)
【分類號】：R733.71

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