發(fā)布時間：2018-04-22 13:32

  本文選題：肝細胞癌 + HNF4α��； 參考：《華東理工大學》2015年碩士論文

【摘要】：肝細胞核因子4a (HNF4a)是核受體超家族成員之一,在肝細胞的分化和功能維持中起著重要的作用。細胞穿膜肽(Cell Penetrating Peptides, CPPs)是一類由少于30個氨基酸組成的多肽,可以有效地將目標分子包括蛋白、RNA、DNA等導入細胞。本課題利用細胞穿膜肽PEP-1介導重組肝細胞核因子4a (HNF4a)蛋白進入肝癌細胞,并明確外源融合蛋白P-HNF4a對肝癌細胞的作用。我們構(gòu)建了能夠表達P-HNF4a的表達質(zhì)粒pET28a-P-HNF4a,并優(yōu)化了P-HNF4a的表達與純化條件,經(jīng)濃縮、透析后獲得濃度為2.1μM、純度為81%的融合蛋白P-HNF4a;成功將P-HNF4a轉(zhuǎn)導進入肝癌細胞,利用Western blot檢測其穿膜效率,發(fā)現(xiàn)穿膜效率高達69.5%,顯示PEP-1可高效地攜帶HNF4a進入細胞；核漿分離和細胞免疫熒光檢測表明P-HNF4a進入細胞后定位在細胞核,熒光素酶報告基因?qū)嶒灠l(fā)現(xiàn)P-HNF4a可促進下游基因的表達,提示P-HNF4a具有轉(zhuǎn)錄因子的功能；P-HNF4a可促進Huh7細胞肝功能基因的表達,并抑制干細胞相關(guān)基因的表達；利用CCK-8法檢測肝癌細胞的增殖,細胞劃痕實驗、小室遷移實驗以及小室侵襲實驗檢測肝癌細胞轉(zhuǎn)移能力,結(jié)果顯示P-HNF4a顯著抑制肝癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力。以上結(jié)果提示P-HNF4a可誘導肝癌細胞向成熟肝細胞分化,抑制肝癌細胞的惡性生物學行為,表明利用P-HNF4a轉(zhuǎn)導肝癌細胞是誘導分化治療肝癌的潛在手段。
[Abstract]:HNF4a) is a member of the nuclear receptor superfamily and plays an important role in the differentiation and functional maintenance of hepatocytes. Cell Penetrating Peptides (CPPs) is a class of peptides consisting of less than 30 amino acids, which can effectively transfer target molecules, including protein RNA-DNA, into cells. In this study, recombinant hepatocyte nuclear factor 4a HNF4a (HNF4a) protein was transfected into hepatoma cells by transmembrane peptide PEP-1, and the effect of exogenous fusion protein P-HNF4a on hepatoma cells was clarified. We constructed the expression plasmid pET28a-P-HNF4aand optimized the expression and purification conditions of P-HNF4a. After dialysis, we obtained a fusion protein P-HNF4a with a concentration of 2.1 渭 M and a purity of 81%. P-HNF4a was successfully transduced into hepatoma cells. Using Western blot to detect the transmembrane efficiency, it was found that the transmembrane efficiency was as high as 69.5%, which showed that PEP-1 could efficiently carry HNF4a into the cells, and the nuclear and cytoplasmic separation and cellular immunofluorescence assay showed that P-HNF4a was located in the nucleus after entering the cell. Luciferase reporter gene experiment found that P-HNF4a could promote the expression of downstream genes, suggesting that P-HNF4a has the function of transcription factor, P-HNF4a can promote the expression of liver function genes in Huh7 cells, and inhibit the expression of stem cell related genes. CCK-8 assay was used to detect the proliferation of hepatoma cells, cell scratch assay, cell migration assay and compartment invasion assay. The results showed that P-HNF4a significantly inhibited the proliferation, migration and invasion of hepatoma cells. These results suggest that P-HNF4a can induce the differentiation of HCC cells into mature hepatocytes and inhibit the malignant biological behavior of HCC cells. It is suggested that P-HNF4a transduction of HCC cells is a potential means of inducing differentiation and treatment of HCC.
【學位授予單位】：華東理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7

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