本文選題：蛇毒 + SGC-7901細(xì)胞��； 參考：《皖南醫(yī)學(xué)院》2017年碩士論文

【摘要】：目的:探討皖南蝮蛇抑瘤組分Ⅰ(Agkistrodon Halys venom antitumor component-I,AHVAC-Ⅰ)誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞SGC-7901線粒體凋亡途徑的具體作用機(jī)制。方法:本實(shí)驗(yàn)選擇SGC-7901細(xì)胞作為研究的對(duì)象,體外條件下進(jìn)行常規(guī)傳代培養(yǎng)。選擇不同濃度的AHVAC-Ⅰ作用于SGC-7901并在顯微鏡下觀察其形態(tài)變化。結(jié)合MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定后續(xù)AHVAC-Ⅰ藥物濃度低、中、高組分別為3、10、20μg/ml。實(shí)驗(yàn)分組:正常對(duì)照組(配藥所用的培養(yǎng)基)、3μg/ml組、10μg/ml組、20μg/ml組、CsA+10組(CsA為線粒體轉(zhuǎn)運(yùn)孔關(guān)閉劑)。1、各組與SGC-7901細(xì)胞作用6h后JC-1檢測(cè)起線粒體膜電位(△Ψm)的改變。2、各組與SGC-7901細(xì)胞作用24h后采用流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率。3、收集正常對(duì)照組、3μg/ml組、10μg/ml組、20μg/ml組作用24h后的細(xì)胞檢測(cè)蛋白Caspase-3、Caspase-9的活性,利用細(xì)胞免疫組化法和蛋白印跡法檢測(cè)Cyt-c、Caspase-3、Caspase-9在蛋白水平的表達(dá)情況。結(jié)果:1、倒置顯微鏡下見(jiàn)正常對(duì)照組細(xì)胞貼壁生長(zhǎng),且貼壁較為緊密,形態(tài)為不規(guī)則多邊形,核分裂像較多。經(jīng)AHVAC-I處理24h后,隨AHVAC-I濃度增加細(xì)胞密度逐漸稀疏,細(xì)胞懸浮、固縮等凋亡現(xiàn)象逐漸增加。3μg/ml組的形態(tài)基本是多邊形,但可以看見(jiàn)細(xì)胞邊緣變亮,細(xì)胞的貼壁率有所下降,10μg/ml組可見(jiàn)細(xì)胞體積縮小,固縮變圓,細(xì)胞間隙變大,出現(xiàn)凋亡小體,而20μg/ml組可見(jiàn)細(xì)胞抱團(tuán)體呈現(xiàn)小、圓、亮的特征,可見(jiàn)較多的凋亡小體。2、MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示在24h時(shí)實(shí)驗(yàn)組隨AHVAC-Ⅰ濃度的增加(3~30μg/ml)細(xì)胞增殖抑制率呈上升趨勢(shì),(P0.05)。3、JC-1線粒體膜電位檢測(cè)結(jié)果提示與對(duì)照組比較AHVAC-I處理6h后蛇毒組的△Ψm均顯著降低而CsA+10μg/ml組與10μg/ml組比較線△Ψm下降程度較小。熒光顯微鏡觀察可見(jiàn)隨濃度得而增加紅光逐漸減弱而綠光逐漸增強(qiáng),20μg/ml組可見(jiàn)△Ψm照片基本全呈現(xiàn)綠色熒光,而CsA+10組與10μg/ml組比較綠色熒光較弱。4、隨AHVAC-Ⅰ濃度增加(3~20μg/ml)細(xì)胞凋亡率逐漸增加而CsA+10組與10μg/ml比較凋亡率較低(P0.05)。5、Caspase-3,Caspase-9活性檢測(cè)結(jié)果提示隨蛇毒作用濃度的增加(3~20μg/ml)Caspase-3,Caspase-9活性明顯增加(P0.05)。6、細(xì)胞免疫組化及western-blot結(jié)果均提示隨蛇毒作用濃度的增加(3~20μg/ml)胞漿里的Cyt-c蛋白水平表達(dá)為上升趨勢(shì)(P0.05),Caspase-3,Caspase-9的蛋白表達(dá)水平隨AHVAC-I濃度的增加(3~20μg/ml)而逐漸增加(P0.05)。結(jié)論:1、AHVAC-I能夠抑制人胃癌細(xì)胞SGC-7901的生長(zhǎng)增殖。2、AHVAC-I對(duì)人胃癌SGC-7901的作用途徑之一是誘導(dǎo)線粒體功能障礙引起的細(xì)胞凋亡,且此凋亡可以通過(guò)阻礙PTP孔開(kāi)放減少線粒體膜電位的降低而降低。3、AHVAC-I對(duì)人胃癌SGC-7901的作用與Cyt-c、Caspase-3、Caspase-9的含量有關(guān)。
[Abstract]:Aim: to investigate the mechanism of apoptosis pathway of SGC-7901 mitochondria induced by Agkistrodon Halys venom antitumor component-AHVAC- 鈪，

本文編號(hào)：1784418