發(fā)布時(shí)間：2018-04-21 22:33

  本文選題：核酸適體 + 磁珠��； 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)》2017年02期

【摘要】：目的基于核酸適體和磁珠,提出一種檢測腫瘤標(biāo)志物血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的比色方法。方法核酸適體與標(biāo)記脲酶的單鏈結(jié)合,通過生物素-親和素的特殊識別作用固定在鏈霉親和素修飾的磁珠上;待檢測的腫瘤VEGF標(biāo)志物與適體結(jié)合形成莖環(huán)結(jié)構(gòu),使標(biāo)記脲酶的單鏈脫落下來;經(jīng)磁分離,轉(zhuǎn)移上清液,加入到含一定量尿素和酚紅試劑的溶液中。利用上清液中的脲酶水解尿素產(chǎn)生氨,使得溶液的p H值升高,導(dǎo)致溶液的顏色變化,通過肉眼或紫外分光光度計(jì)分析顯色結(jié)果。結(jié)果該檢測體系在最佳條件下,檢測VEGF的線性范圍為0.1~10 pmol/L,檢測限達(dá)0.06 pmol/L。并利用此體系,檢測人肺癌患者血清中的VEGF濃度,其結(jié)果與ELISA方法檢測出的結(jié)果基本一致。將本方法與ELISA方法同步盲法測定10例血清樣本,結(jié)果顯示本方法的準(zhǔn)確率為90%,表明其具有較高的有效性和敏感性。結(jié)論該檢測方法操作簡單方便,同時(shí)具有較高的靈敏度和選擇性,在臨床VEGF檢測中具有潛在的應(yīng)用前景。
[Abstract]:Objective to develop a colorimetric method for the detection of vascular endothelial growth factor (VEGF), a tumor marker, based on aptamer and magnetic beads. Methods Nucleic acid aptamer combined with a single strand of urease labeled urease was immobilized on the magnetic beads modified by streptavidin through the special recognition of biotin-avidin, and the tumor VEGF markers to be detected combined with the aptamer to form the stem ring structure. After magnetic separation the supernatant was transferred and added to the solution containing a certain amount of urea and phenolic red reagent. Urea was hydrolyzed by urease in supernatant to produce ammonia. The pH value of the solution was increased and the color of the solution was changed. The result of color development was analyzed by naked eye or ultraviolet spectrophotometer. Results under the optimal conditions, the linear range of detection of VEGF was 0.1 渭 mol / L and the detection limit was 0.06 pmol / L. The concentration of VEGF in serum of human lung cancer patients was detected by this system, and the results were consistent with those detected by ELISA method. The results showed that the accuracy of the method was 90, which indicated that the method was effective and sensitive. Conclusion this method is easy to operate and has high sensitivity and selectivity. It has potential application prospect in clinical VEGF detection.
【作者單位】： 福州市第一醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合腫瘤科;福建醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(21375017) 福州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(2013-S-122-4) 福建省科技廳重點(diǎn)項(xiàng)目(2013Y0045) 福建省自然科學(xué)基金(2013J06003) 福建省高等學(xué)校新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計(jì)劃(JA13130)~~
【分類號】：R730.43

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