本文選題：肝細(xì)胞肝癌 + miR-126　； 參考：《浙江大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：背景肝細(xì)胞肝癌(Hepatocellular carcinoma, HCC)是世界上最常見的癌癥之一,特別是在中國(guó)。盡管以手術(shù)為主的綜合治療的進(jìn)步,但是HCC的死亡率依然很高�；钴S的轉(zhuǎn)移和血管生成是HCC的兩大特征,嚴(yán)重影響肝癌患者的預(yù)后。然而,其機(jī)制仍然不甚清楚。MicroRNAs (miRNA)是一類高度保守的小RNA。它們通過結(jié)合于靶基因的3'UTR區(qū)域來參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的各種生物學(xué)行為。越來越多的文獻(xiàn)報(bào)道,miRNAs在肝癌的發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的作用,包括凋亡,增殖,自噬和EMT等。到目前為止,在肝癌中同時(shí)調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)移和血管生成的miRNAs報(bào)道尚少。MiR-126已經(jīng)被報(bào)道在腫瘤發(fā)展過程中有重要的作用。但是其對(duì)于肝癌轉(zhuǎn)移和血管生成的作用仍然不清楚。所以探索miR-126和肝癌轉(zhuǎn)移和血管生成的關(guān)系可能是肝癌治療研究的一個(gè)不錯(cuò)的策略。目的本次研究的目的在于探索miR-126在肝癌組織和細(xì)胞中的表達(dá)水平,并統(tǒng)計(jì)其與肝癌標(biāo)本臨床病理資料之間的相關(guān)性。我們進(jìn)一步研究了miR-126與肝癌轉(zhuǎn)移和血管生成之間的關(guān)系,尋找其發(fā)揮作用的靶基因及相關(guān)機(jī)制。方法1. 通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR的辦法來研究miR-126在肝癌組織和細(xì)胞系中的表達(dá)。2. 用miR-126 mimics和inhibitors來過表達(dá)或抑制其在肝癌細(xì)胞中的水平,3. 運(yùn)用Transwell實(shí)驗(yàn)和成血管實(shí)驗(yàn)來研究轉(zhuǎn)移和血管生成能力。4. 利用裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn),進(jìn)行miR-126的體內(nèi)功能研究。5. 用生物信息學(xué)網(wǎng)站和熒光雙報(bào)告實(shí)驗(yàn)來預(yù)測(cè)和驗(yàn)證miR-126的靶基因。6. 用免疫組化檢測(cè)CD34的表達(dá)水平,來反應(yīng)體內(nèi)血管生成的水平。結(jié)果1. 在70對(duì)肝癌病例中,我們發(fā)現(xiàn)肝癌組織中miR-126的表達(dá)量明顯降低。但是沒有發(fā)現(xiàn)miR-126表達(dá)量與臨床病理資料有相關(guān)性。相對(duì)于正常肝永生化細(xì)胞L02和Changliver細(xì)胞,7株肝癌細(xì)胞系中,有6株的miR-126的表達(dá)降低。2. 在體外功能研究中,我們發(fā)現(xiàn)miR-126過表達(dá)之后,可以抑制肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和血管生成的能力,而miR-126表達(dá)抑制之后,肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和血管生成能力明顯上升了。3. 裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),miR-126穩(wěn)定過表達(dá)組的瘤體體積明顯小于對(duì)照組。4. 我們應(yīng)用生物信息學(xué)網(wǎng)站(miRanda, TargetScan)預(yù)測(cè)出LRP6和PIK3R2是miR-126的靶基因,并且通過熒光雙報(bào)告實(shí)驗(yàn)和Western blot實(shí)驗(yàn)得到了驗(yàn)證。并且,在70例肝癌病例中LRP6和PIK3R2與miR-126的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)的關(guān)系。5.在肝癌細(xì)胞中分別抑制了LRP6和PIK3R2的表達(dá)之后,肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力和血管生成能力分別下降了。靶基因“補(bǔ)救實(shí)驗(yàn)”證明,LRP6和miR-126的共轉(zhuǎn)染可以減弱miR.-126對(duì)轉(zhuǎn)移的作用,而PIK3R2和miR-126共轉(zhuǎn)染可以減弱miR-126對(duì)血管生成能力的作用。6. 在70例臨床標(biāo)本中CD34的表達(dá)量與miR-126的水平呈負(fù)相關(guān),并且miR-126穩(wěn)定高表達(dá)組的裸鼠瘤體中的CD34表達(dá)量比對(duì)照組低。結(jié)論1. 相比較于肝癌旁組織和正常肝細(xì)胞,miR-126在肝癌組織和肝癌細(xì)胞中的表達(dá)量明顯降低。2. MiR-126抑制肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和血管生成,并且抑制裸鼠瘤體的生長(zhǎng)速度。3.LRP6和PIK3R2被證明是miR-126的靶基因,并且在肝癌中介導(dǎo)miR-126對(duì)肝癌轉(zhuǎn)移和血管生成的作用。
[Abstract]:Hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most common cancers in the world, especially in China. Despite the progress of surgery based comprehensive treatment, the death rate of HCC is still high. Active metastasis and angiogenesis are the two major features of HCC. Severe weight affects the prognosis of liver cancer patients. However, the mechanism is still not. It is clear that.MicroRNAs (miRNA) is a highly conserved small RNA. that participates in the regulation of various biological behavior of cells by combining the 3'UTR region of the target gene. More and more literature reports that miRNAs plays an important role in the development of liver cancer, including apoptosis, proliferation, autophagy and EMT. So far, in liver cancer MiRNAs reports that regulate metastasis and angiogenesis have been reported to play an important role in the development of cancer. However, the role of.MiR-126 is still unclear on the metastasis and angiogenesis of liver cancer. Therefore, the exploration of the relationship between miR-126 and the metastasis of liver cancer and angiogenesis may be a good strategy for the treatment of liver cancer. Objective the purpose of this study was to explore the expression level of miR-126 in the tissues and cells of liver cancer and to count the correlation between the clinical and pathological data of the liver cancer. We further studied the relationship between miR-126 and the metastasis of liver cancer and angiogenesis, and find the target gene and the related mechanism. Method 1. through the reality To study the expression of miR-126 in liver cancer tissue and cell lines by fluorescence quantitative PCR,.2. used miR-126 mimics and inhibitors to express or inhibit its level in the hepatoma cells. 3. the Transwell experiment and vascular experiment were used to study the metastasis and angiogenesis ability.4. using the nude mouse subcutaneous tumorigenesis experiment to perform miR-126 In vivo functional study.5. uses bioinformatics website and fluorescence double report experiment to predict and verify the target gene.6. of miR-126 to detect the level of CD34 expression by immunohistochemistry to reflect the level of angiogenesis in the body. Results 1. in 70 cases of liver cancer, we found that the expression of miR-126 in the liver cancer tissues was significantly reduced. The expression of miR-126 was correlated with the clinicopathological data. Compared with normal liver immortalized L02 and Changliver cells, 6 of the 7 hepatoma cell lines decreased the expression of.2. in the function study in vitro. We found that after miR-126 overexpression, we could inhibit the metastasis and angiogenesis of hepatoma cells and the expression of miR-126. After inhibition, the metastasis and angiogenesis of hepatoma cells increased obviously in.3. nude mice. The tumor volume of the miR-126 stable overexpression group was significantly smaller than that of the control group.4.. We used the bioinformatics website (miRanda, TargetScan) to predict that LRP6 and PIK3R2 were the target genes of miR-126, and the fluorescence double report was used. The test and Western blot test were verified. And the expression level of LRP6 and PIK3R2 was negatively correlated with the expression level of miR-126 in 70 cases of liver cancer. After the expression of LRP6 and PIK3R2 in the hepatoma cells, the metastasis ability and angiogenesis of hepatoma cells decreased respectively. The target gene "remedial experiment" proved that LRP6 and Co transfection of miR-126 could weaken the effect of miR.-126 on metastasis, while PIK3R2 and miR-126 co transfection could weaken the effect of miR-126 on angiogenesis..6. in 70 clinical specimens, the expression of CD34 was negatively correlated with the level of miR-126, and CD34 expression in the tumor body of the group of miR-126 stable high expression group was lower than that of the control group. Conclusion 1. Compared with para hepatoma and normal hepatocytes, the expression of miR-126 in HCC and HCC cells significantly reduced.2. MiR-126 to inhibit the metastasis and angiogenesis of hepatoma cells, and to inhibit the growth rate of nude mice,.3.LRP6 and PIK3R2 were proved to be the target genes of miR-126, and the metastasis of the liver cancer mediated miR-126 on the metastasis of liver cancer. And the role of angiogenesis.

【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7

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本文編號(hào)：1775703