本文選題：白血病 + ATO��； 參考：《河北醫(yī)科大學》2015年碩士論文

【摘要】：目的:本研究以慢性髓細胞白血病細胞株K562細胞為實驗對象,觀察三氧化二砷(ATO)作用于K562細胞前后CD44、β-catenin及Cyclin D1的表達情況,旨在從分子水平研究ATO抑制K562細胞增殖的機制,探索慢性髓細胞白血病治療的新靶點。方法:體外培養(yǎng)人CML細胞株K562細胞,設(shè)空白組(不加細胞和藥物的培養(yǎng)基)、對照組(只加細胞不加藥物的細胞液)、實驗組(1、2、2.5、5、10μmol/L ATO)。實驗組分別加入不同濃度的ATO,培養(yǎng)24h、48h、72h收集細胞。通過光學顯微鏡觀察細胞形態(tài)。MTT法檢測細胞增殖狀況。流式細胞術(shù)(Flow Cytometry,FCM)檢測K562細胞表面分子CD44表達情況及K562細胞周期的變化。Annexin V-FITC/PI雙標法檢測細胞凋亡;逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)分析K562細胞Cyclin D1和β-catenin基因的表達改變。結(jié)果:1 ATO對K562細胞增殖的影響:MTT結(jié)果顯示,5個劑量組處理K562細胞24-72h,繪制生長曲線顯示,2μmol/LATO處理的細胞即出現(xiàn)顯著的細胞增殖抑制效應(yīng),且抑制率呈時間和劑量依賴性。統(tǒng)計學分析顯示,同一濃度各個時間點之間比較,除1μmol/L組各時間點之間無統(tǒng)計學差異(P0.05)外,其他劑量組時間點間的差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),且抑制率均隨時間的延長而增加;同一時間點各劑量組之間比較,24h的1、2、2.5μmol/L組之間無統(tǒng)計學差異(P0.05),其他劑量組之間有統(tǒng)計學差異(P0.05),48h與72h各劑量組之間均有統(tǒng)計學差異(P=0.016),且抑制率隨濃度的增加而增加。2 ATO對K562細胞表面CD44分子表達的影響:對照組細胞生長24h、48h、72h后CD44的表達率分別為(83.47±1.28)%、(82.63±0.62)%、(82.32±0.86)%;不同藥物濃度ATO作用于K562細胞24、48、72h后,CD44表達的陽性率見Table 2。統(tǒng)計學分析顯示:同一濃度各時間點之間的比較,1μmol/L組各時間點之間無統(tǒng)計學差異(P0.05),其他各劑量組隨時間延長,CD44表達逐漸降低,各個時間點間差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);同一時間點,各劑量組間比較,除1、2μmol/L組在24h無統(tǒng)計學差異(P0.05)外,其余各組CD44表達的陽性率隨藥物濃度的增加而逐漸降低,差異有統(tǒng)計學意義(P=0.003)。3 ATO對K562細胞凋亡的影響:對照組與1、2、2.5、5、10μmol/LATO組作用48h后,細胞凋亡率分別為(2.09±1.42)%、(2.13±1.57)%、(2.41±1.48)%、(5.61±2.03)%、(11.84±2.69)%、(30.98±4.16)%;與對照組相比,1、2μmol/L ATO組差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);2.5、5、10μmol/L ATO作用于K562細胞后凋亡率較對照組明顯增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),且在一定范圍內(nèi)ATO以濃度依賴方式促進K562細胞凋亡,凋亡率隨藥物濃度增加而增加。4 ATO對K562細胞周期分布的影響:流式細胞術(shù)檢測細胞周期分布的結(jié)果顯示,對照組與1、2、2.5、5、10μmol/L ATO組作用48h后G0/G1期、S期、G2/M期的細胞比例(見Table 4)。不同濃度ATO作用48h后,K562細胞停滯在G0/G1期的細胞比例隨藥物濃度的增加逐漸增加,S期、G2/M期細胞比例逐漸減少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。5 ATO對K562細胞β-catenin表達水平的影響:RT-PCR檢測結(jié)果顯示,以對照組的RQ值為1,不同濃度ATO作用于K562細胞48h后β-catenin的RQ值(見Table 5);統(tǒng)計學分析顯示,不同濃度ATO對K562細胞β-catenin表達水平的影響存在明顯差異(P0.05),且隨著藥物濃度的增加β-catenin的表達水平呈下降趨勢。經(jīng)繪制散點圖并進行直線相關(guān)分析得出:同一時間點,隨著藥物濃度的變化,CD44和β-catenin的變化趨勢呈正相關(guān),做兩因素的相關(guān)分析得出,藥物作用48h時,兩者的相關(guān)系數(shù)為r=0.973(P0.001),有統(tǒng)計學意義。6 ATO對K562細胞Cyclin D1表達水平的影響:RT-PCR檢測結(jié)果顯示,以對照組的RQ值為1,不同濃度ATO作用于K562細胞48h后Cylin D1的RQ值(見Table 5);統(tǒng)計學分析顯示,不同濃度ATO對K562細胞Cyclin D1表達水平的影響存在明顯差異(P0.05),且隨著藥物濃度的增加Cylin D1的表達水平呈下降趨勢。結(jié)論:1在一定濃度范圍內(nèi),ATO處理的K562細胞出現(xiàn)明顯的細胞增殖抑制效應(yīng),這一效應(yīng)表現(xiàn)為劑量-效應(yīng)和時間-效應(yīng)關(guān)系,表明一定范圍內(nèi)ATO以濃度和時間依賴方式抑制K562細胞增殖。2 ATO能夠降低K562細胞表面分子CD44的表達,且隨著藥物濃度的增加及作用時間的延長CD44表達明顯下降。3 ATO下調(diào)CD44使K562細胞停滯在G0/G1期,這可能是K562細胞生長抑制的原因。4 ATO下調(diào)CD44使K562細胞Cyclin D1基因表達水平明顯下降,這可能是使K562細胞阻滯于G0/G1期的分子機制。5 CD44和β-catenin表達水平之間存在正相關(guān),CD44表達下降能夠引起β-catenin的表達下降,抑制Wnt/β-catenin信號通路激活,從而抑制K562細胞的增殖。
[Abstract]:Objective : To investigate the expression of CD44 , 尾 - catenin and Cyclin D1 in K562 cells with chronic myeloid leukemia cell line K562 cells . The effect of ATO on the proliferation of K562 cells was observed by MTT assay . The results showed that the expression of CD44 in K562 cells was significantly decreased after 24 h , 48 h and 72 h in the control group ( P = 0 . 05 ) . The effect of ATO on cell cycle distribution of K562 cells was observed by flow cytometry . The results of flow cytometry showed that the percentage of G0 / G1 phase , S phase , G2 / M phase in the control group and 1 , 2 , 2.5 , 5 , 10 渭mol / L ATO group were 48 hours later ( see Table 4 ) . The effect of ATO on the expression level of Cyclin D1 in K562 cells was significantly lower than that of the control group ( P0.05 ) .

【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R733.7

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前6條

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本文編號：1773066