本文選題：表皮生長因子受體2 + 胃癌�。� 參考：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：背景和目的HER2/ErbB2/P 185屬于人類表皮生長因子受體家族,對(duì)細(xì)胞的增殖、分化、遷移和凋亡等起著重要的調(diào)控作用,在胃癌及乳腺癌等腫瘤中均存在過表達(dá),目前,HER2已成為腫瘤靶向藥物研究的焦點(diǎn),其靶向藥物曲妥珠單抗(Trastuzumab)和帕妥珠單抗(Pertuzumab)已廣泛應(yīng)用于臨床,但仍存在藥物耐受和臨床有效率低等問題。因此,研制和開發(fā)新的HER2腫瘤靶向藥物并優(yōu)化腫瘤治療方案成為亟需解決的問題。本課題組前期開發(fā)了一株新型抗HER2人鼠嵌合抗體chA21,對(duì)卵巢癌細(xì)胞SKOV-3和人乳腺癌細(xì)胞BT-474裸鼠皮下移植瘤具有良好的抗腫瘤活性。本研究擬在新建立的人胃癌移植瘤模型及高表達(dá)HER2的自發(fā)轉(zhuǎn)移性乳腺癌小鼠移植瘤模型中探索抗HER2靶向藥物的抗腫瘤活性及其機(jī)制,并比較該抗體與Trastuzumab作用的異同點(diǎn)。材料與方法(1)建立荷人胃癌裸鼠移植瘤模型,使用抗HER2抗體進(jìn)行治療并測定腫瘤生長速率,評(píng)價(jià)抗HER2抗體的腫瘤抑制率(用T/C值表示,即給藥組相對(duì)腫瘤體積/PBS對(duì)照組相對(duì)腫瘤體積),并利用免疫組化及免疫印跡的方法檢測抗體處理后腫瘤細(xì)胞中HER2信號(hào)通路的變化情況。(2)將重組HER2全長基因轉(zhuǎn)染至攜帶熒光素酶基因的小鼠乳腺癌細(xì)胞4T1-Luc,利用G418加壓篩選、免疫印跡方法及流式細(xì)胞術(shù)等方法獲得穩(wěn)定表達(dá)HER2蛋白的4T1-Luc細(xì)胞的表達(dá),并建立裸鼠和BALB/c小鼠皮下移植瘤模型,測定腫瘤生長速率和抑制率,并采用小動(dòng)物活體成像儀監(jiān)測小鼠體內(nèi)腫瘤的轉(zhuǎn)移情況。結(jié)果(1)實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)時(shí),chA21、Trastuzumab和聯(lián)用組各組腫瘤體積T/C值分別為62%、39%和7.0%；腫瘤體積抑制率分別為38.88%、60.14%和92.73%；瘤重抑制率分別為39.58%、59.46%和91.89%。與PBS對(duì)照組相比,chA21組小鼠移植瘤中HER2的蛋白水平以及ERK、Akt信號(hào)通路的活性均有明顯下降,而Trastuzumab組均沒有明顯變化。HE染色及免疫組化(IHC)結(jié)果顯示,chA21給藥組腫瘤組織中的HER2染色水平明顯降低；微血管數(shù)量明顯減少,而凋亡細(xì)胞明顯增多；Trastuzumab給藥組無顯著變化。(2)經(jīng)過G418篩選得到多個(gè)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株克隆4T1-Luc/HER2,經(jīng)免疫印跡和流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果證實(shí),均存在HER2高表達(dá)。這些細(xì)胞克隆均具有良好的成瘤特性,接種1周之后即可見腫瘤呈穩(wěn)定生長趨勢(shì),2-3周后,即可以觀察到腫瘤轉(zhuǎn)移至小鼠面部、肺部、腹股溝等部位。在BALB/c小鼠中,chA21和Trastuzumab抗體聯(lián)合用藥組的抑瘤率高達(dá)43.3%,與對(duì)照組相比,差異具有顯著性(P0.05),明顯優(yōu)于抗體單用組的抑瘤率(chA21組11.1%,Trastuzumab組23%)。與此同時(shí),抗體聯(lián)合用藥組小鼠肺部的轉(zhuǎn)移灶熒光強(qiáng)度和數(shù)目與PBS對(duì)照組相比,也顯著降低。結(jié)論(1)在NCI-N87胃癌移植瘤模型中,chA21單用抗腫瘤效果稍弱于Trastuzumab,但與Trastuzumab聯(lián)用具有協(xié)同抗腫瘤活性。同時(shí),chA21具有顯著下調(diào)腫瘤細(xì)胞HER2受體表達(dá)的特點(diǎn),而Trastuzumab該作用不明顯,提示chA21的抗腫瘤作用機(jī)理與Trastuzumab有所不同。因此,我們的研究結(jié)果初步顯示了新型抗HER2抗體chA21用于臨床治療HER2陽性腫瘤的良好潛力。(2)成功構(gòu)建高表達(dá)HER2的4T1-Luc小鼠乳腺癌細(xì)胞系,并且建立具有自發(fā)離轉(zhuǎn)移特性的乳腺癌小鼠模型。初步研究結(jié)果表明,抗HER2靶向抗體藥物Trastuzumab與chA21聯(lián)用具有較好的抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的作用。
[Abstract]:BACKGROUND & OBJECTIVE : HER2 / erbB2 / P 185 belongs to human epidermal growth factor receptor family , plays an important role in the proliferation , differentiation , migration and apoptosis of human breast cancer cells .
The tumor volume inhibition rates were 38.88 % , 60.14 % and 92.73 % , respectively .
The tumor weight inhibition rate was 39.58 % , 59.46 % and 91.89 % , respectively . Compared with the PBS control group , the protein level of HER2 and ERK signal pathway in the ch21 group were significantly lower than those in the control group .
There was a significant decrease in the number of microvessels , while the number of apoptotic cells increased significantly .
In BALB / c mice , the rate of tumor inhibition was 43 . 3 % , which was significantly higher than that of control group ( P 0 . 05 ) . Conclusion ( 1 ) In the model of NCI - N87 gastric cancer , the anti - tumor effect is slightly weaker than that in the control group .

【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R73-36

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