本文選題：食管鱗狀細(xì)胞癌(ESCC) + PAX2��； 參考：《蘇州大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：第一部分:食管鱗癌組織中PAX2因子的表達(dá)及其臨床意義目的 研究配對基因盒2(PAX2)在食管鱗癌(ESCC)組織、癌旁組織及正常食管上皮組織中的表達(dá)。方法 通過免疫組織化學(xué)熒光染色方法檢測15例正常食管組織、52例食管鱗癌癌旁組織和120例食管鱗癌組織中PAX2的蛋白表達(dá)水平,并觀察其與食管鱗癌患者年齡、性別、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期及淋巴管浸潤的關(guān)系。結(jié)果 在人食管鱗癌組織中PAX2蛋白表達(dá)水平顯著高于對應(yīng)癌旁組織及正常食管組織(P=0.003和P=0.002)。PAX2蛋白表達(dá)水平與TNM分期相關(guān)(P=0.001),PAX2表達(dá)水平在37例TNM III和IV期患者中明顯高于67例I和II期患者,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(1.353±0.088和1.933±0.133,P0.0001);同樣,PAX2的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.019)和淋巴管浸潤(P=0.005)相關(guān),差異有統(tǒng)計學(xué)意義。而PAX2的表達(dá)與患者年齡、性別、生物學(xué)分級無明顯相關(guān)性。結(jié)論 PAX2在食管鱗癌組織中的表達(dá)明顯高于對應(yīng)癌旁組織及正常食管組織,且與TNM分期、淋巴結(jié)或轉(zhuǎn)移及淋巴管浸潤具有顯著相關(guān)性。第二部分:PAX2在食管癌中的生物學(xué)功能研究目的 研究配對基因盒2(PAX2)在食管鱗癌細(xì)胞株TE-1和Eca-109細(xì)胞中的生物學(xué)功能。方法 構(gòu)建PAX2過表達(dá)載體并驗(yàn)證上述載體和靶向PAX2的si RNA。通過MTT與克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測PAX2對食管癌細(xì)胞生長增殖的影響;通過Transwell小室模型檢測PAX2對食管癌細(xì)胞侵襲能力的影響;通過克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測PAX2對放射敏感性的影響;通過Western blot檢測相關(guān)蛋白MMP-2、MMP-9的表達(dá)。結(jié)果 食管癌TE-1和Eca-109細(xì)胞轉(zhuǎn)染PAX2過表達(dá)載體后,細(xì)胞中PAX2蛋白水平明顯提高;細(xì)胞轉(zhuǎn)染靶向PAX2的si RNA后,PAX2的水平顯著低于對照組。細(xì)胞存活實(shí)驗(yàn)表明:PAX2過表達(dá)會抑制細(xì)胞的生長及克隆形成;而敲低PAX2的表達(dá)則能加速細(xì)胞的生長與克隆形成。Transwell實(shí)驗(yàn)表明,PAX2過表達(dá)促進(jìn)食管癌細(xì)胞的侵襲,敲低PAX2水平則抑制細(xì)胞的侵襲。PAX2過表達(dá)能誘導(dǎo)MMP2和MMP9的表達(dá)水平。抑制PAX2的表達(dá)可提高食管癌細(xì)胞的放射敏感性。結(jié)論 PAX2具有抑制食管癌增殖、促進(jìn)食管癌侵襲及放射抗拒性的功能。第三部分:PAX2在食管癌中的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制研究目的 研究配對基因盒2(PAX2)在食管癌細(xì)胞株中的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)及下游靶基因,全面揭示PAX2的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。方法 TE-1細(xì)胞過表達(dá)PAX2后采用表達(dá)譜芯片檢測與轉(zhuǎn)染對照載體的細(xì)胞m RNA表達(dá)譜的變化�？寺〔煌L度的白介素5(IL-5)基因的啟動子到p GL3-Basic報告基因載體上。采用熒光素酶實(shí)驗(yàn)檢測PAX2對IL-5啟動子轉(zhuǎn)錄活性的影響。采用RT-PCR檢測PAX2對內(nèi)源性IL-5的轉(zhuǎn)錄激活作用。采用染色質(zhì)免疫共沉淀(Ch IP)檢測PAX2與IL-5啟動子DNA的直接結(jié)合。在組織樣品中檢測PAX2與IL-5 m RNA的相關(guān)性。結(jié)果 食管癌TE-1細(xì)胞轉(zhuǎn)染PAX2過表達(dá)載體后有數(shù)百個基因的表達(dá)發(fā)生明顯變化(變化倍數(shù)大于等于2倍)。生物信息學(xué)表明,上調(diào)變化倍數(shù)較大IL-5基因的啟動子上游-110到-1100bp處存在兩個PAX2結(jié)合位點(diǎn),提示PAX2可能直接調(diào)控IL-5的表達(dá)。熒光素酶報告基因?qū)嶒?yàn)表明IL-5啟動子缺失PAX2的結(jié)合位點(diǎn)后熒光素酶活性顯著下降;PAX2過表達(dá)能提高IL-5報告基因的活性。Ch IP實(shí)驗(yàn)表明PAX2蛋白與IL-5啟動子存在直接結(jié)合。在食管鱗癌組織樣品中PAX2和IL-5的表達(dá)顯著相關(guān)。結(jié)論 PAX2能直接或間接調(diào)控食管癌細(xì)胞中多個下游基因;PAX2可通過調(diào)控IL-5促進(jìn)食管癌侵襲。
[Abstract]:The expression of PAX2 in esophageal squamous cell carcinoma ( ESCC ) was significantly higher than that in normal esophageal tissues ( P = 0.003 and P = 0.002 ) . The expression of PAX2 and IL - 5 promoter was detected by RT - PCR . The expression of PAX2 and IL - 5 promoter was detected by RT - PCR . Results showed that PAX2 could regulate the expression of IL - 5 directly or indirectly . Conclusion PAX2 could regulate the expression of IL - 5 directly or indirectly .

【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.1

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本文編號：1771803