本文選題：姜黃素 + 乳腺癌�。� 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：背景和目的:乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤,其發(fā)病率約占女性所有惡性腫瘤的30%,致死率居女性惡性腫瘤第二位。姜黃素是一種新型的抗腫瘤藥物,近年來研究發(fā)現(xiàn)它對乳腺癌等許多惡性腫瘤均有抑制作用。有研究表明,膜型基質(zhì)金屬蛋白酶-1(membrane type-1 matrix metalloproteinase,MT1-MMP)與乳腺癌腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān),而姜黃素與MT1-MMP的關(guān)系鮮有報道。因此,本研究選擇MCF-7細(xì)胞株構(gòu)建過表達(dá)MT1-MMP的乳腺癌細(xì)胞模型,研究姜黃素對乳腺癌MCF-7細(xì)胞MT1-MMP表達(dá)及淋巴管生成作用的影響,為其應(yīng)用于乳腺癌的治療提供理論依據(jù)。方法1.淋巴內(nèi)皮細(xì)胞收集和培養(yǎng)收集常規(guī)包皮環(huán)切術(shù)的包皮組織,分離消化后在內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基(EBM)培養(yǎng),用Dil-ac-LDL標(biāo)記淋巴內(nèi)皮細(xì)胞,加入磁珠包被人源性LYVE-1抗體和免疫磁珠,利用磁珠收集器進(jìn)行收集,用DNA酶消化后使淋巴內(nèi)皮細(xì)胞與磁珠分離,淋巴內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)于基質(zhì)膠包被的培養(yǎng)皿的內(nèi)皮培基中,放入C02培養(yǎng)箱培養(yǎng)。2.表達(dá)MT1-MMP的MCF-7細(xì)胞株的建立將MT1-MMP基因克隆至真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1,經(jīng)測序鑒定后,用LipofectamineTM2000脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染入乳腺癌細(xì)胞MCF-7,轉(zhuǎn)染2天后,改用含G418的培養(yǎng)基篩選出能夠穩(wěn)定表達(dá)MT1-MMP的MCF-7細(xì)胞。試驗分以下三個組:未轉(zhuǎn)染組、空白質(zhì)粒組、轉(zhuǎn)染組。即①MCF-7對照組;②MCF-7+pcDNA3.1空白質(zhì)粒組;③MCF-7/MT1-MMP轉(zhuǎn)染組,試驗時加入不同濃度姜黃素處理。3.Western Blot檢測試驗組和對照組乳腺癌MCF-7細(xì)胞中MT1-MMP蛋白的水平;4.分別用CCK8和Transwell測定不同濃度姜黃素對乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖和侵襲能力的影響;5.乳腺癌MCF-7細(xì)胞株和淋巴內(nèi)皮細(xì)胞聯(lián)合三維培養(yǎng)將淋巴內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)于基質(zhì)膠(Matrigel)包被的培養(yǎng)皿,待細(xì)胞生長至3/4融合后,覆蓋一層M199培養(yǎng)基配制的無細(xì)胞Matrigel;膠原聚合后,在其上覆蓋一層乳腺癌細(xì)胞株Matrigel。最表面再覆蓋一層內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基。在三維培養(yǎng)過程中,待細(xì)胞生長至對數(shù)生長期加入姜黃素處理。統(tǒng)計學(xué)處理統(tǒng)計學(xué)處理用SPSS 21.0軟件完成,計量資料以χ±s表示,多組數(shù)據(jù)參數(shù)間比較采用單因素方差分析,組內(nèi)兩兩比較采用兩樣本SNK檢驗分析。P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1.MT1-MMP蛋白在乳腺癌MCF-7細(xì)胞中的表達(dá)Western Blot實驗結(jié)果顯示,在未轉(zhuǎn)染組及空白質(zhì)粒組未見明顯蛋白表達(dá)條帶,而在轉(zhuǎn)染組均出現(xiàn)MT1-MMP蛋白表達(dá)條帶,加入姜黃素后蛋白表達(dá)條帶變低。2.姜黃素抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖和侵襲作用CCK-8法和Transwell法實驗結(jié)果顯示:與未轉(zhuǎn)染組及空白質(zhì)粒組比較,轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞增值的能力增加且細(xì)胞侵襲數(shù)目增加,即表達(dá)MT1-MMP蛋白的MCF-7細(xì)胞增殖和侵襲能力明顯增強,而在經(jīng)姜黃素處理后其細(xì)胞增值能力降低且侵襲數(shù)目減少,表明其增殖和侵襲能力受到抑制,且這種抑制作用呈劑量依賴方式。3.姜黃素抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞誘導(dǎo)的淋巴內(nèi)皮細(xì)胞增生與淋巴管生成作用熒光倒置顯微鏡觀察三維培養(yǎng)中各組淋巴內(nèi)皮細(xì)胞在基質(zhì)中生長情況結(jié)果顯示:各組乳腺癌細(xì)胞都能誘導(dǎo)淋巴內(nèi)皮細(xì)胞增生并形成淋巴管狀結(jié)構(gòu),并且轉(zhuǎn)染了 MT1-MMP的誘導(dǎo)能力更強,而經(jīng)姜黃素處理后,各組誘導(dǎo)能力均減弱。結(jié)論1.過表達(dá)MT1-MMP的乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖侵襲能力增加,而姜黃素可以抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞的增殖侵襲能力,機制可能與抑制MT1-MMP有關(guān)。2.姜黃素可以抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞誘導(dǎo)的淋巴內(nèi)皮細(xì)胞增生并形成淋巴管狀結(jié)構(gòu)的作用。
[Abstract]:BACKGROUND & OBJECTIVE : Breast cancer is the most common malignant tumor in women . Its incidence accounts for 30 % of all malignant tumors of breast cancer . The effect of curcumin on the proliferation and invasion ability of breast cancer MCF - 7 cells is studied . The results showed that the proliferation and invasion ability of breast cancer MCF - 7 cells transfected with curcumin inhibited the proliferation and invasion ability of breast cancer MCF - 7 cells .

【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1765997