發(fā)布時間：2018-04-15 15:07

  本文選題：肺腺癌 + 免疫組化��； 參考：《南昌大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：第一章:TROP2在肺腺癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系目的:探討TROP2在人肺腺癌細(xì)胞系、人肺腺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義。方法:免疫組織化學(xué)方法檢測68例肺腺癌組織其中包含有20例癌旁組織的TR OP2的表達(dá),用統(tǒng)計學(xué)方法分析其與臨床病理特征的相關(guān)性;RT-q PCR檢測標(biāo)本:38例肺腺癌組織及其癌旁組織和肺腺癌細(xì)胞系H1299、SPCA-1、PC-9、A549及正常人支氣管上皮細(xì)胞株HBE中TROP2 m RNA的表達(dá)情況,Western Blot檢查肺腺癌細(xì)胞株中TROP2蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果:1、TROP2在癌旁組織未見或少見表達(dá),支氣管黏膜、肺泡壁是其表達(dá)的主要部位,其陽性表達(dá)率為15%(3/20)。TROP2在肺腺癌組織中表達(dá)于腫瘤細(xì)胞的胞漿和胞膜,為大小不等的棕黃顆粒,細(xì)胞核不著色;TROP2的陽性表達(dá)率為54.4%(38/68);肺腺癌組TROP2陽性表達(dá)率高于癌旁組織組(P=0.0002)。在肺腺癌組中,TROP2的表達(dá)與腫瘤的分化程度(P=0.013)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.038)及TNM分期(P=0.012)表現(xiàn)出正相關(guān)性,而與年齡、性別、腫瘤大小及腫瘤T分期呈現(xiàn)出無相關(guān)性(P=0.584,0.112,0.685,0.414);2、癌旁組織中TROP2m RNA的相對表達(dá)量為(0.159±0.009),而TROP2 m RNA在肺腺癌組織中相對表達(dá)量為(1.153±0.077),明顯高于癌旁組織中的表達(dá)量(P0.005)。3、RT-q PCR檢測肺腺癌細(xì)胞系中TROP2 m RNA表達(dá),結(jié)果顯示:TROP2的表達(dá)量由高到低依次為:PC-9SPCA-1H1299A549HBE。Western Blot檢測TROP2蛋白表達(dá),結(jié)果顯示:TROP2的表達(dá)量由高到低依次為PC-9SPCA-1H1299A549HBE。結(jié)論:1、TROP2在肺腺癌組織中高表達(dá),與癌旁組織中的表達(dá)比較存在統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.0002);2、TROP2的表達(dá)與腫瘤的分化程度(P=0.013)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.038)及TNM分期(P=0.012)表現(xiàn)出正相關(guān)性,而與年齡、性別、腫瘤大小及腫瘤T分期呈現(xiàn)出無相關(guān)性;3、TROP2在肺腺癌細(xì)胞系中高表達(dá),在PC-9細(xì)胞中更高。第二章:TROP2基因表達(dá)質(zhì)粒和TROP2-shRNA質(zhì)粒構(gòu)建及肺腺癌細(xì)胞株的篩選目的:為了進(jìn)一步研究肺腺癌中TROP2的作用機制,我們構(gòu)建TROP2基因表達(dá)質(zhì)粒pc DNA3.1-TROP2和干擾質(zhì)粒sh RNA-TROP2質(zhì)粒,并構(gòu)建TROP2高/低表達(dá)肺腺癌細(xì)胞模型。方法:1、通過基因克隆技術(shù)獲得人TROP2基因cDNA序列,然后將該cDNA序列經(jīng)克隆,酶切,并連接到載體pc DNA3.1上,構(gòu)建TROP2基因表達(dá)質(zhì)粒pc DNA3.1-TROP2,并構(gòu)建過表達(dá)TROP2的肺腺癌A549穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系,利用RT-q PCR及免疫印跡法鑒定表達(dá)產(chǎn)物;2、針對人TROP2基因設(shè)計三條sh RNA后,應(yīng)用PLKO.1載體構(gòu)建TROP2-sh RNA干擾質(zhì)粒,用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)轉(zhuǎn)染PC-9細(xì)胞并進(jìn)行RT-q PCR及免疫印跡法鑒定表達(dá)產(chǎn)物,篩選出干擾效果最佳的sh R NA。并構(gòu)建低表達(dá)TROP2的肺腺癌細(xì)胞模型。結(jié)果:1、成功構(gòu)建pc DNA3.1-TROP2表達(dá)質(zhì)粒;2、以A549細(xì)胞為基礎(chǔ)成功構(gòu)建了穩(wěn)定過表達(dá)TROP2的肺腺癌細(xì)胞系模型;3、成功構(gòu)建TROP2干擾質(zhì)粒T ROP2-sh RNA,經(jīng)Western Blot及RT-q PCR鑒定顯示TROP2-sh RNA-2的干擾效果最好;4、將TROP2-sh RNA-2轉(zhuǎn)染到PC-9肺腺癌細(xì)胞中,成功構(gòu)建了低表達(dá)TROP2的肺腺癌癌細(xì)胞模型。結(jié)論:成功構(gòu)建pc DNA3.1-TROP2表達(dá)質(zhì)粒和TROP2-sh RNA干擾質(zhì)粒,并經(jīng)瞬時轉(zhuǎn)染后鑒定出干擾效果最佳的sh RNA。并構(gòu)建TROP2基因過表達(dá)和低表達(dá)的肺腺癌細(xì)胞模型。第三章:TROP2對肺腺癌細(xì)胞體外生物學(xué)特性的影響目的:研究TROP2對肺腺癌癌細(xì)胞體外生物學(xué)特性的影響。方法:利用本研究第二章建立的TROP2表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-TROP2,構(gòu)建過表達(dá)TROP2的肺腺癌A549細(xì)胞模型及TROP2干擾質(zhì)粒TROP2-sh RNA,構(gòu)建低表達(dá)TROP2的肺腺癌癌細(xì)胞模型。采用CCK-8法檢測、劃痕實驗、細(xì)胞侵襲實驗及細(xì)胞凋亡實驗,體外觀察TROP2表達(dá)改變后,對肺腺癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及凋亡等生物學(xué)特性的影響。結(jié)果:CCK-8法檢測證實過表達(dá)TROP2促進(jìn)A549細(xì)胞的增殖,抑制TROP2表達(dá)后能夠抑制肺腺癌細(xì)胞PC-9的增殖;劃痕實驗證實過表達(dá)TROP2能夠加快A549細(xì)胞的遷移能力,抑制TROP2表達(dá)后能夠減弱PC-9細(xì)胞的遷移能力;細(xì)胞侵襲實驗(Transwell小室)表明TROP2過表達(dá)后能有效促進(jìn)A549細(xì)胞的侵襲能力,干擾TROP2表達(dá)后能有效抑制PC-9細(xì)胞的侵襲能力;凋亡實驗結(jié)果:TROP2過表達(dá)后能有效抑制A549細(xì)胞的細(xì)胞凋亡,干擾TROP2表達(dá)后能有效促進(jìn)PC-9細(xì)胞的細(xì)胞凋亡;結(jié)論:TROP2具有促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的作用,并有效地抑制了肺腺癌細(xì)胞的凋亡。
[Abstract]:The expression of TROP2 mRNA in lung adenocarcinoma cell line was detected by Western Blot . The expression of TROP2 in lung adenocarcinoma was higher than that in adjacent tissues ( P = 0 . 584 , 0 . 112 , 0 . 685 , 0 . 414 ) . In order to study the mechanism of TROP2 gene expression plasmid pcDNA 3.1 - TROP2 and to construct a cell model of lung adenocarcinoma cell line with low expression TROP2 , we constructed a model of TROP2 gene expression plasmid pcDNA 3.1 - TROP2 and constructed a cell model of lung adenocarcinoma cell line with low expression TROP2 . The effects of TROP2 on cell proliferation , migration , invasion and apoptosis of lung adenocarcinoma cells were studied by means of CCK - 8 assay .

【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2

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本文編號：1754626