發(fā)布時(shí)間：2018-04-14 17:18

  本文選題：骨肉瘤 + 芒柄花黃素��； 參考：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：研究背景骨肉瘤,是骨腫瘤中最為常見的一種惡性腫瘤。主要發(fā)病于10-25歲的青少年患者,男性多于女性。其好發(fā)年齡為青春期,此時(shí)期體內(nèi)性激素水平最為活躍,人體生長(zhǎng)最為旺盛,這提示該疾病可能與人體內(nèi)雌激素水平及相應(yīng)受體表達(dá)異常有密切關(guān)系[l]。傳統(tǒng)的治療方法為單純的截肢手術(shù),治療效果極差,致殘率高,5年生存率低。骨肉瘤極早期即發(fā)生血行轉(zhuǎn)移,肺部轉(zhuǎn)移是骨肉瘤患者最主要的致死原因。目前控制骨肉瘤肺部轉(zhuǎn)移最關(guān)鍵的臨床治療手段是化療。然而,化療過程中經(jīng)常出現(xiàn)的嚴(yán)重毒副反應(yīng),嚴(yán)重影響化療的進(jìn)行,因此使用傳統(tǒng)的化療等治療方案也很難達(dá)到令人滿意的臨床效果。雌激素由卵泡和胎盤產(chǎn)生,腎上腺及雄性的睪丸也可以產(chǎn)生少量雌激素,促進(jìn)女性生殖系統(tǒng)發(fā)育,是人體內(nèi)一種重要的性激素。雌激素受體(Estrogen Receptor, ER)是一類由配體激活的轉(zhuǎn)錄因子,是核受體超家族成員之一。雌激素通過與靶器官的雌激素受體結(jié)合而發(fā)揮其功能。大量的臨床及實(shí)驗(yàn)研究表明,雌激素受體在骨肉瘤病例中存在表達(dá),包括ERa及ERβ受體,提示骨肉瘤可能是激素依賴性腫瘤。內(nèi)分泌治療是近年興起的治療腫瘤的綜合手段之一。內(nèi)分泌治療通過抑制相應(yīng)的激素合成、降低激素釋放水平、降低激素及其受體活性、阻斷激素與其相應(yīng)受體的結(jié)合等多種途徑,達(dá)到抑制激素依賴性腫瘤的發(fā)生及腫瘤細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡,減弱腫瘤細(xì)胞侵襲力及轉(zhuǎn)移,從而達(dá)到治療腫瘤的目的。因激素本身是體內(nèi)存在的正常成分,因此內(nèi)分泌治療的最大優(yōu)點(diǎn)在于毒副作用小、效應(yīng)持久且作用于全身,對(duì)有腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者同樣有很好的療效。本研究通過對(duì)植物雌激素芒柄花黃素對(duì)骨肉瘤這一激素依賴性腫瘤的作用效果的觀察,初步探討雌激素在骨肉瘤中可能扮演的作用,為骨肉瘤的的內(nèi)分泌治療及預(yù)后判斷提供一定的參考依據(jù)。目的1.通過體外實(shí)驗(yàn),研究植物雌激素芒柄花黃素對(duì)骨肉瘤U20S細(xì)胞增殖凋亡的作用；2.通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn),研究芒柄花黃素對(duì)裸鼠骨肉瘤移植瘤的抑制作用及藥物對(duì)裸鼠的毒副作用；3.明確可能參與芒柄花黃素對(duì)骨肉瘤抗腫瘤效應(yīng)的作用機(jī)制。方法1.選用人骨肉瘤U20S細(xì)胞株,用不同濃度的芒柄花黃素(0,20,40及80μM)干預(yù)細(xì)胞,采用MTT法、流式細(xì)胞術(shù)等方法,檢測(cè)芒柄花黃素對(duì)骨肉瘤U20S細(xì)胞抑制增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡方面的影響；在流式細(xì)胞儀(FACSCalibur)上分析熒光強(qiáng)度,定量檢測(cè)細(xì)胞周期中G0-G1、S、和G2-M期所占百分比。Hoechst 33258染色法觀察細(xì)胞形態(tài)。采用蛋白免疫印跡、Real-time PCR等方法,檢測(cè)芒柄花黃素調(diào)控骨肉瘤U20S細(xì)胞Bcl-2、Bax及miR-375的表達(dá)情況。2.建立裸鼠荷人骨肉瘤U20S細(xì)胞移植瘤動(dòng)物模型,用不同濃度的芒柄花黃素(0,20,40及80μM)干預(yù)腫瘤生長(zhǎng),觀察芒柄花黃素對(duì)腫瘤體積、重量的抑制率,藥物的毒副作用；采用腫瘤組織切片HE染色及免疫組化法,觀察腫瘤組織中Bcl-2、Bax的表達(dá)情況；采用蛋白免疫印跡、Real-time PCR檢測(cè)芒柄花黃素調(diào)控腫瘤組織中Bcl-2、Bax及miR-375的表達(dá)情況。結(jié)果1.MTT結(jié)果顯示,芒柄花黃素對(duì)骨肉瘤U20S細(xì)胞增殖有明顯抑制作用,并呈劑量和時(shí)間依賴性(P0.05)。經(jīng)80μM的芒柄花黃素處理后72小時(shí)后,其生長(zhǎng)抑制率可達(dá)到71%。在細(xì)胞周期中,G0/G1期的分布比例較高,在G0/G1期的分布比例隨芒柄花黃素濃度的提高而逐漸增加。2.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,芒柄花黃素有著明顯誘導(dǎo)骨肉瘤U20S細(xì)胞凋亡的作用。經(jīng)40,80μM的芒柄花黃素處理后,其細(xì)胞凋亡率分別為23%,34%(P0.05)。效應(yīng)呈濃度和時(shí)間依賴性。3. Hoechst 33258染色顯示：隨著芒柄花黃素藥物濃度升高,其對(duì)U20S誘導(dǎo)凋亡的效果越明顯,細(xì)胞凋亡率越高,且呈濃度依賴性。4. Western blot及Real-time PCR結(jié)果顯示：芒柄花黃素可上調(diào)骨肉瘤U20S細(xì)胞Bax的表達(dá)及下調(diào)Bcl-2及miR-375的表達(dá),且呈濃度依賴效應(yīng)。5.芒柄花黃素對(duì)裸鼠移植瘤的有明顯的抑瘤作用,80μM的芒柄花黃素處理對(duì)腫瘤體積抑制率為41.12%,重量抑制率為39.53%。藥物對(duì)裸鼠的一般情況及肝腎功能未見明顯毒副作用。6.腫瘤組織切片及免疫組化法結(jié)果,Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)隨芒柄花黃素干預(yù)濃度增加而減弱；而Bax陽(yáng)性則隨芒柄花黃素干預(yù)濃度增加而增強(qiáng)。7. Western blot及Real-time PCR法檢測(cè)結(jié)果顯示,腫瘤組織中,隨著芒柄花黃素濃度由逐漸提高,Bcl-2及miR-375表達(dá)量進(jìn)行性減低,Bax的表達(dá)進(jìn)行性增高。結(jié)論1.芒柄花黃素對(duì)骨肉瘤U20S細(xì)胞增殖有明顯抑制作用,并呈濃度和時(shí)間依賴性,主要可能是通過促進(jìn)G0/G1期細(xì)胞阻滯實(shí)現(xiàn)的。2.芒柄花黃素對(duì)骨肉瘤U20S細(xì)胞有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用,并呈濃度和時(shí)間依賴性。隨著芒柄花黃素藥物濃度升高,U20S細(xì)胞凋亡率越明顯。3.芒柄花黃素對(duì)裸鼠移植瘤的體積、重量均有明顯的抑制作用,且呈濃度依賴效應(yīng)。4.芒柄花黃素對(duì)裸鼠的生長(zhǎng)及臟器未見明顯毒副作用。5.芒柄花黃素體內(nèi)體外抗骨肉瘤的機(jī)制可能是通過上調(diào)Bax的表達(dá)及下調(diào)Bcl-2、miR-375的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R738.1

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本文編號(hào)：1750294