發(fā)布時(shí)間：2018-04-14 16:09

  本文選題：卵巢上皮性癌 + 腫瘤干細(xì)胞��； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：卵巢癌是所有婦科惡性腫瘤中最主要的致死原因,僅僅在美國(guó),每年就能造成大概14,030例死亡病例,同時(shí)還有22,240新發(fā)卵巢癌病例。卵巢上皮性癌(Epithelial ovarian cancer,EOC)能夠占到卵巢癌的90%,其死亡率高達(dá)60%以上。在過(guò)去的25年中,EOC總體死亡率只有一小部分得到改善。EOC極高的死亡率一方面歸因于該病治療研究方面缺乏有效的進(jìn)展,另一方面,很大程度上歸因于卵巢癌往往一經(jīng)診斷就已經(jīng)達(dá)到疾病的晚期階段,同時(shí)會(huì)不可避免的出現(xiàn)化療耐藥問(wèn)題。Hamburger和Salmon首次將卵巢癌描述為一種干細(xì)胞疾病,腫瘤干細(xì)胞(Cancer Stem Cells,CSCs)是造成復(fù)發(fā)的主要因素。CSC理論提出,在腫瘤中僅有一小部分腫瘤細(xì)胞可以導(dǎo)致腫瘤發(fā)生,這些被定義為“CSC”細(xì)胞具有干細(xì)胞樣特性,如自我復(fù)制更新能力(self-renewal,SR),分化能力和致瘤能力(潛在惡性)。因?yàn)镋OC能夠占到卵巢癌的90%以上,其發(fā)病原因往往被認(rèn)為起源于卵巢表面上皮干細(xì)胞和輸卵管上皮,因此多數(shù)的卵巢癌干細(xì)胞研究焦點(diǎn)則是EOC的研究。卵巢癌干細(xì)胞研究起步較晚,由Bapat et al等人首次在腹水中分離出來(lái),目前常見(jiàn)的分離卵巢癌方法有側(cè)群細(xì)胞的分離,卵巢癌干細(xì)胞標(biāo)記蛋白如ALDH1+、CD133+、CD24+、CD44和CD117等。最新研究表明,Lgr5是卵巢表面上皮的一個(gè)細(xì)胞子集(上皮干細(xì)胞)的標(biāo)志物,可能在未來(lái)有助于作為卵巢癌標(biāo)記物早期檢測(cè)卵該病。但是迄今為止,現(xiàn)有標(biāo)記物都不能成功的作為卵巢癌干細(xì)胞的標(biāo)記物,因此卵巢癌缺乏公認(rèn)的干細(xì)胞標(biāo)記物。近年來(lái),研究人員更傾向于多數(shù)惡性腫瘤中,包括卵巢癌在內(nèi),存在一種CSC模式,部分文獻(xiàn)也稱(chēng)之為CSC層級(jí)制度,在這個(gè)層級(jí)制度中,只有一小部分的腫瘤細(xì)胞存在腫瘤干細(xì)胞的特性,這一小部分沉默(靜止)狀態(tài)的腫瘤細(xì)胞位于層級(jí)制度的頂端。傳統(tǒng)的化療模式,最大耐受劑量化療(maximum tolerated dose chemotherapy,MTD)無(wú)法有效的針對(duì)這一小部分干性最強(qiáng)的卵巢癌干細(xì)胞做出強(qiáng)有力的殺傷,反而更能富集具有干性特征的卵巢癌干細(xì)胞,從而造成干細(xì)胞增殖活躍,形成新的腫塊,造成復(fù)發(fā)。本研究第一部分我們通過(guò)采用免疫組化檢測(cè)卵巢上皮性癌患者中Lgr5和ALDH1蛋白表達(dá)水平,探討二者之間的相關(guān)性,評(píng)估其與EOC患者年齡、腫瘤分期,病理分級(jí)淋巴轉(zhuǎn)移及對(duì)EOC患者預(yù)后的影響;第二部分通過(guò)卵巢癌細(xì)胞系SKOV3建立裸鼠腹腔移植瘤模型,分別給予順鉑低劑量節(jié)拍化療模式和最大可耐受劑量化療模式,觀察不同化療模式對(duì)荷人卵巢癌細(xì)胞SKOV3裸鼠生存狀態(tài)及裸鼠移植瘤的影響,以給予順鉑化療后實(shí)體瘤研磨形成的細(xì)胞懸液為研究對(duì)象,利用流式細(xì)胞儀分選出的假設(shè)具有干細(xì)胞屬性的CD133+、ALDH1+和ALDH1+CD133+雙陽(yáng)性細(xì)胞,探討MTD法是否能富集卵巢癌干性細(xì)胞,;最后部分我們通過(guò)Western-Blot方法檢測(cè)分選后細(xì)胞中Lgr5,BCRP,Lef1蛋白含量。通過(guò)細(xì)胞平板克隆實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)致瘤實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證分選細(xì)胞的干細(xì)胞特性。探討不同化療模式對(duì)卵巢癌干細(xì)胞層級(jí)制度產(chǎn)生調(diào)控的機(jī)制。第一部分卵巢上皮性癌中Lgr5和ALDH1蛋白的表達(dá)及其與臨床預(yù)后目的:通過(guò)免疫組化檢測(cè)卵巢上皮性癌患者中Lgr5和ALDH1蛋白表達(dá)水平,探討二者之間的相關(guān)性,評(píng)估其與EOC患者年齡、腫瘤分期,病理分級(jí)淋巴轉(zhuǎn)移及對(duì)EOC患者預(yù)后的影響。方法:以100例石蠟包埋的人體卵巢癌組織標(biāo)本為研究對(duì)象,卵巢良性腫瘤(ovary benign tumors)20例及正常卵巢組織30例作為對(duì)照組,通過(guò)免疫組化檢測(cè)卵巢上皮性癌患者中二者蛋白表達(dá)水平,探討Lgr5和ALDH1二者之間的相關(guān)性,評(píng)估其與EOC患者年齡、腫瘤分期,病理分級(jí)淋巴轉(zhuǎn)移及對(duì)EOC患者預(yù)后的影響。應(yīng)用Kaplan-Meier法繪制生存曲線。結(jié)果：1臨床病理特點(diǎn)本研究包括卵巢上皮性癌病人共計(jì)100例,50歲以下的女性患者共計(jì)34例,50歲以上的女性患者共計(jì)66例。67%的患者被診斷出患有淋巴轉(zhuǎn)移。大多數(shù)患者(59%)在位于FIGO分期的Ⅲ、Ⅳ期,高分化占到58%,中分化27%。漿液性癌組織學(xué)是最常見(jiàn)的EOC,50%,粘液性癌最不常見(jiàn),占10%。患者的生存期從9個(gè)月到79個(gè)月不等,中位生存期為36.89個(gè)月。2正常組織、卵巢良性腫瘤及卵巢上皮性癌組織中Lgr5蛋白和ALDH1蛋白的表達(dá)免疫組織化學(xué)染色法觀察發(fā)現(xiàn),Lgr5蛋白主要在卵巢上皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi),呈棕色或黃棕色顆粒。100例EOC組織中,93例EOC組織中能檢測(cè)到Lgr5,其中55例EOC組織強(qiáng)陽(yáng)性染色,相比較,30例良性卵巢腫瘤組織Lgr5弱陽(yáng)性表達(dá)20/30,占66.7%,正常卵巢組織Lgr5弱陽(yáng)性表達(dá)5/20,占25%。ALDH1蛋白主要在卵巢上皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi),呈棕色或黃棕色顆粒。100例EPC組織中,90例EOC組織中能檢測(cè)到ALDH1,71例EOC組織中高表達(dá)ALDH1,相比較,30例良性卵巢腫瘤組織ALDH1弱陽(yáng)性表達(dá)17/30,占56.7%,正常卵巢組織ALDH1弱陽(yáng)性表達(dá)3/20,占15%。46例EOC組織共同高表達(dá)Lgr5蛋白和ALDH1蛋白,20例低表達(dá)Lgr5蛋白和ALDH1蛋白。EOC卵巢組織Lgr5蛋白和ALDH1蛋白的表達(dá)與卵巢良性腫瘤和正常卵巢組織中二者的表達(dá)相比,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05)。3 Lgr5和ALDH1的表達(dá)與臨床病理相關(guān)性根據(jù)FIGO分期,Lgr5或ALDH1蛋白的表達(dá)隨著FIGO分期的升高而升高(P=0.009,P=0.029),;根據(jù)分化程度,分化程度越低,Lgr5蛋白的表達(dá)越高(P=0.034,P=0.005).;Lgr5、ALDH1蛋白的表達(dá)與年齡、淋巴轉(zhuǎn)移、組織學(xué)類(lèi)型無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。4 EOC中Lgr5和ALDH1蛋白表達(dá)的相關(guān)性Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示,在EOC組織中,Lgr5的蛋白表達(dá)同ALDH1的蛋白表達(dá)呈正相關(guān),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(r=0.385,P0.001)結(jié)果見(jiàn)Fig.3)。5 Lgr5蛋白表達(dá)與ALDH1蛋白表達(dá)與EOC患者生存結(jié)果分析Kaplan-Meier分析結(jié)果顯示,在EOC中,隨著Lgr5蛋白和ALDH1蛋白表達(dá)的增加,患者存活期縮短。高表達(dá)Lgr5蛋白和ALDH1蛋白的患者平均或中位生存期明顯小于低表達(dá)Lgr5蛋白和ALDH1蛋白的患者生存期。其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001)。結(jié)論：1 Lgr5和ALDH1蛋白在卵巢癌腫瘤樣本中高度表達(dá);2高表達(dá)Lgr5和ALDH1不僅與FIGO分期相關(guān),還同病理分級(jí)相關(guān)。高表達(dá)的ALDH1和LGR5同卵巢癌患者的預(yù)后相關(guān)。因此,Lgr5和ALDH1對(duì)于早期診斷和預(yù)測(cè)EOC病人的預(yù)后有及其重要的意義,后續(xù)試驗(yàn)對(duì)其可能作為卵巢癌干細(xì)胞的標(biāo)記物進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證。第二部分不同化療模式對(duì)荷人卵巢癌裸鼠移植瘤中干細(xì)胞特性的影響目的:建立裸鼠腹腔移植瘤模型,探討不同化療模式對(duì)荷人卵巢癌細(xì)胞SKOV3裸鼠生存狀態(tài)及裸鼠移植瘤的影響;分選出假設(shè)具有干細(xì)胞屬性的CD133+,ALDH1+,ALDH1+CD133+雙陽(yáng)性細(xì)胞,探討不同化療模式對(duì)卵巢上皮性癌CSC樣細(xì)胞的富集作用,為后續(xù)對(duì)假定卵巢癌干細(xì)胞的鑒定做準(zhǔn)備。方法:通過(guò)人卵巢癌細(xì)胞系SKOV3建立裸鼠腹腔移植瘤模型,分別給予順鉑LDM化療模式和MTD化療模式,觀察不同化療模式對(duì)荷人卵巢癌細(xì)胞SKOV3裸鼠生存狀態(tài)、化療副反應(yīng)和對(duì)裸鼠移植瘤的影響。通過(guò)對(duì)順鉑化療后實(shí)體瘤研磨形成的細(xì)胞懸液為研究對(duì)象,通過(guò)流式細(xì)胞分選儀分選出ALDH1+和CD133+,ALDH1+CD133+的,即假設(shè)具有干細(xì)胞屬性的細(xì)胞,進(jìn)一步探討MTD化療模式對(duì)卵巢癌CSC的富集作用,從而為卵巢癌臨床治療策略提供新的思路。結(jié)果:1荷人卵巢癌裸鼠腹腔移植模型建立裸鼠成瘤率:1×107個(gè)SKOV3細(xì)胞接種于雌性裸鼠腹腔,2周后移植瘤形成;化療結(jié)束后3-5天處死后計(jì)算成瘤率為100%。2裸鼠一般狀況及化療副反應(yīng)評(píng)估2.1裸鼠進(jìn)食量變化裸鼠隨機(jī)分為三組:即對(duì)照組、MTD-DDP組、LDM-DDP組。自化療開(kāi)始至化療結(jié)束,共計(jì)18天,無(wú)裸鼠自然死亡,各組裸鼠一般情況良好,無(wú)明顯活動(dòng)減少或動(dòng)作遲緩;與對(duì)照組比較,MTD-DDP組、LDM-DDP組裸鼠進(jìn)食量減少。化療第9天,MTD-DDP組、LDM-DDP組裸鼠進(jìn)食量均低于對(duì)照組(P=0.000,P=0.000),MTD-DDP組裸鼠進(jìn)食量與LDM-DDP比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.877);化療第18天,MTD-DDP組、LDM-DDP組裸鼠進(jìn)食量均低于對(duì)照組(P=0.000,P=0.000);結(jié)論:MTD-DDP組裸鼠進(jìn)食量與LDM-DDP比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.740)。2.2裸鼠體重變化自化療第1日至18日,MTD-DDP組和LDM-DDP組裸鼠體重都出現(xiàn)了不同程度下降�；煹�9天,MTD-DDP組、LDM-DDP組裸鼠體重均低于對(duì)照組(P=0.001,P=0.000),而LDM-DDP組裸鼠體重與MTD-DDP組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.458)。化療第18天,MTD-DDP組、LDM-DDP組裸鼠體重均低于對(duì)照組(P=0.000,P=0.000);但LDM-DDP組與MTD-DDP組比較,裸鼠體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.581)。2.3裸鼠腹圍變化及腹水形成自化療開(kāi)始至化療結(jié)束,共計(jì)18天,僅有2只裸鼠有少量腹水形成,均出現(xiàn)在MTD組,MTD-DDP組和LDM-DDP組裸鼠腹圍都出現(xiàn)了不同程度升高。化療第12天,對(duì)照組裸鼠腹圍均高于LDM-DDP組,比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.025),MTD-DDP組裸鼠腹圍與LDM-DDP組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.246);化療第15天,MTD-DDP組、LDM-DDP組裸鼠腹圍均低于對(duì)照組(P=0.017,P=0.000);MTD-DDP組裸鼠腹圍同LDM-DDP組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.148)�；�18天,MTD-DDP組、LDM-DDP組裸鼠腹圍均低于對(duì)照組(P=0.000,P=0.000);MTD-DDP組裸鼠腹圍大于LDM-DDP組,比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.037);2.4裸鼠白細(xì)胞變化自化療開(kāi)始至化療結(jié)束,MTD-DDP組裸鼠白細(xì)胞呈現(xiàn)持續(xù)下降趨勢(shì)。化療第6日,對(duì)照組、MTD-DDP組、LDM-DDP組裸鼠白細(xì)胞差異不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.194,P=0.824)。化療第12日,MTD-DDP組裸鼠白細(xì)胞低于對(duì)照組(P=0.018),LDM-DDP組白細(xì)胞與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.099),MTD-DDP組、LDM-DDP組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.450);化療18天,LDM-DDP裸鼠白細(xì)胞與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.050),MTD-DDP組白細(xì)胞低于對(duì)照組和LDM-DDP組,比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000,P=0.036);3腹腔移植瘤生長(zhǎng)監(jiān)測(cè)3.1化療結(jié)束后處死裸鼠,對(duì)照組移植瘤總重為1.83±0.12g,MTD-DDP組裸鼠移植瘤總重為:1.53±0.20g,LDM-DDP組裸鼠移植瘤最大直徑為1.02±0.10g,對(duì)照組、MTD-DDP組、LDM-DDP組裸鼠移植瘤總重存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=32.274,P=0.000)3.2對(duì)照組移植瘤最大直徑為:1.75±0.24cm,MTD-DDP組裸鼠移植瘤最大直徑為:1.60±0.23cm,LDM-DDP組裸鼠移植瘤最大直徑為1.33±0.16cm,對(duì)照組、MTD-DDP組、LDM-DDP組裸鼠移植瘤最大直徑存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=20.195,P=0.000)4流式細(xì)胞分選術(shù)檢測(cè)對(duì)照組、MTD-DDP組、LDM-DDP組裸鼠移植瘤原代細(xì)胞中CD133+細(xì)胞的表達(dá)情況流式細(xì)胞分選術(shù)檢測(cè)CD133+細(xì)胞在LDM-DDP組裸鼠移植瘤原代細(xì)胞中所占比率(0.77%±0.01%),明顯低于對(duì)照組(1.10%±0.13%,P=0.020);CD133+細(xì)胞在MTD-DDP組裸鼠移植瘤原代細(xì)胞中所占比率(3.17%±0.16%),較對(duì)照組顯著升高(P=0.000)。經(jīng)分析,CD133+細(xì)胞在對(duì)照組裸鼠移植瘤原代細(xì)胞中所占比率與其在MTD-DDP組和LDM-DDP組裸鼠移植瘤原代細(xì)胞中所占比率存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=94.441,P=0.000)。提示,MTD-DDP組富集CD133+標(biāo)記的腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞,而LDM-DDP組則減少CD133+標(biāo)記的腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞的表達(dá)。5流式細(xì)胞分選術(shù)檢測(cè)對(duì)照組、MTD-DDP組、LDM-DDP組裸鼠移植瘤原代細(xì)胞中ALDH1+細(xì)胞的表達(dá)情況流式細(xì)胞分選術(shù)檢測(cè)ALDH1+細(xì)胞在LDM-DDP組裸鼠移植瘤原代細(xì)胞中所占比率(1.83%±0.06%),明顯低于對(duì)照組(3.10%±0.45%,P=0.000);ALDH1+細(xì)胞在MTD-DDP組裸鼠移植瘤原代細(xì)胞中所占比率(4.03%±0.10%),較對(duì)照組顯著升高(P=0.000)。經(jīng)分析,ALDH1+細(xì)胞在對(duì)照組裸鼠移植瘤原代細(xì)胞中所占比率與其在MTD-DDP組和LDM-DDP組裸鼠移植瘤原代細(xì)胞中所占比率存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=736.691,P=0.000)。提示,MTD-DDP組富集ALDH1+標(biāo)記的腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞,而LDM-DDP組則減少腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞的表達(dá)。6流式細(xì)胞分選術(shù)檢測(cè)對(duì)照組、MTD-DDP組、LDM-DDP組裸鼠移植瘤原代細(xì)胞中雙標(biāo)陽(yáng)性細(xì)胞,即ALDH1+CD133+細(xì)胞的表達(dá)情況流式細(xì)胞分選術(shù)檢測(cè)ALDH1+CD133+細(xì)胞在LDM-DDP組裸鼠移植瘤原代細(xì)胞中所占比率(0.21%±0.03%),明顯低于對(duì)照組(0.44%±0.01%,P=0.016);ALDH1+CD133+細(xì)胞在MTD-DDP組裸鼠移植瘤原代細(xì)胞中所占比率(0.65%±0.07%),較對(duì)照組顯著升高(P=0.006)。經(jīng)分析,ALDH1+CD133+細(xì)胞細(xì)胞在對(duì)照組裸鼠移植瘤原代細(xì)胞中所占比率與其在MTD-DDP組和LDM-DDP組裸鼠移植瘤原代細(xì)胞中所占比率存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=28.543,P=0.001)。提示,MTD-DDP組富集腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞,而LDM-DDP組則減少腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞的表達(dá)。結(jié)論：1 LDP-DDP模式較傳統(tǒng)MTD-DDP模式骨髓抑制更輕。2 MTD模式化療能富集ALDH1+細(xì)胞、CD133+細(xì)胞及ALDH1+CD133+雙陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞,而LDM化療模式能夠降低腫瘤中三種陽(yáng)性細(xì)胞比率。相比較傳統(tǒng)的MTD化療模式,LDM化療模式下不易形成化療耐藥,復(fù)發(fā)幾率較低。第三部分裸鼠移植瘤原代瘤中干細(xì)胞的鑒定目的:分別鑒定流式細(xì)胞分選后的ALDH1+細(xì)胞的腫瘤干細(xì)胞樣特性,CD133+細(xì)胞和ALDH1+CD133+細(xì)胞的腫瘤干細(xì)胞樣特性。方法:本部分實(shí)驗(yàn)以第二部分流失細(xì)胞分選術(shù)分選得到的ALDH1+細(xì)胞,CD133+細(xì)胞,及ALDH1+CD133+雙陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞為研究對(duì)象,通過(guò)體外平板克隆形成實(shí)驗(yàn)和裸鼠體內(nèi)成瘤能力實(shí)驗(yàn)對(duì)其干性進(jìn)行驗(yàn)證。同時(shí)采用Western blot法進(jìn)一步測(cè)定分選陽(yáng)性細(xì)胞中相關(guān)干細(xì)胞標(biāo)志蛋白:Lrg5,LEF-1,BCRP蛋白表達(dá)。結(jié)果：1 CD133+細(xì)胞與CD133-細(xì)胞平板克隆形成能力CD133+細(xì)胞與CD133-細(xì)胞的克隆形成率分別為54.14%±1.95%,3.26%±0.71%,CD133+細(xì)胞與CD133-的克隆形成率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=73.500,P=0.000)。表明CD133+細(xì)胞具有較高的克隆形成能力,提示CD133+細(xì)胞具有腫瘤干細(xì)胞的特性,可以用于鑒定和分離CSC細(xì)胞;2 ALDH1+與ALDH1-細(xì)胞平板克隆形成能力ALDH1+細(xì)胞與ALDH1-細(xì)胞的克隆形成率分別為59.72%±2.16%,5.13%±0.91%,ALDH1+細(xì)胞與ALDH1-細(xì)胞的克隆形成率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=69.773,P=0.000)。表明ALDH1+細(xì)胞具有較高的克隆形成能力,提示ALDH1+細(xì)胞具有腫瘤干細(xì)胞的特性,可以用于鑒定和分離CSC細(xì)胞;3 CD133+細(xì)胞與CD133-細(xì)胞體內(nèi)成瘤能力將5,000個(gè)CD133+細(xì)胞和CD133-細(xì)胞分別接種裸鼠大腿皮下,6周后CD133+細(xì)胞的成瘤率為50%(3/6),CD133-細(xì)胞未成瘤(0/6)。將10,000個(gè)CD133+細(xì)胞和CD133-細(xì)胞分別接種裸鼠大腿皮下,6周后CD133+細(xì)胞的成瘤率為66.7%(4/6),CD133-細(xì)胞未成瘤(0/6)。結(jié)果顯示,CD133+細(xì)胞具有體內(nèi)成瘤能力,而CD133-細(xì)胞不具有體內(nèi)成瘤能力。因此,進(jìn)一步顯示了CD133+具有腫瘤干細(xì)胞的部分特性。4 ALDH1+細(xì)胞與ALDH1-細(xì)胞體內(nèi)成瘤能力將5,000個(gè)ALDH1+細(xì)胞和ALDH1-細(xì)胞分別接種裸鼠大腿皮下,6周后ALDH1+細(xì)胞的成瘤率為66.7%(4/6),ALDH1-細(xì)胞未成瘤(0/6)。將10,000個(gè)ALDH1+細(xì)胞和ALDH1-細(xì)胞分別接種裸鼠大腿皮下,6周后ALDH1+細(xì)胞的成瘤率為83.3%(5/6),ALDH1-細(xì)胞未成瘤(0/6)。結(jié)果顯示,ALDH1+細(xì)胞具有體內(nèi)成瘤能力,而ALDH1-細(xì)胞不具有體內(nèi)成瘤能力。因此,進(jìn)一步顯示了ALDH1+具有腫瘤干細(xì)胞的部分特性。5 ALDH1+CD133+細(xì)胞與ALDH1-CD133-細(xì)胞體內(nèi)成瘤能力將5000個(gè)ALDH1+CD133+細(xì)胞和ALDH1-CD133-細(xì)胞分別接種裸鼠大腿皮下,6周后ALDH1+CD133+細(xì)胞的成瘤率為66.7%(4/6),ALDH1-CD133-細(xì)胞未成瘤(0/6)。將10000個(gè)ALDH1+CD133+細(xì)胞和ALDH1-CD133-細(xì)胞細(xì)胞分別接種裸鼠大腿皮下,6周后ALDH1+CD133+細(xì)胞的成瘤率為100%(6/6),ALDH1-CD133-細(xì)胞未成瘤(0/6)。結(jié)果顯示,ALDH1+CD133+雙陽(yáng)性分選細(xì)胞具有更強(qiáng)的致瘤能力,同樣具有腫瘤干細(xì)胞的部分特性。6 Lgr5、BCRP和LEF-1在ALDH1+細(xì)胞與ALDH1-細(xì)胞中的表達(dá)情況通過(guò)Western blot方法檢測(cè)Lgr5在ALDH1+細(xì)胞中高表達(dá),而在ALDH1-細(xì)胞中低表達(dá),表達(dá)灰度分析MOD值為0.61±0.17,025±0.13(P=0.000);BCRP在ALDH1+細(xì)胞中高表達(dá),而在ALDH1-細(xì)胞中低表達(dá),表達(dá)灰度分析MOD值為0.57±0.17,0.23±0.11(P=0.000);LEF-1在ALDH1+細(xì)胞中高表達(dá),而在ALDH1-細(xì)胞中低表達(dá)。表達(dá)灰度分析MOD值為0.44±0.18,0.20±0.18(P=0.000)。7 Lgr5、BCRP和LEF-1在CD133+細(xì)胞與CD133-細(xì)胞中的表達(dá)情況通過(guò)Western blot方法檢測(cè)Lgr5在CD133+細(xì)胞中高表達(dá),而在CD133-細(xì)胞中低表達(dá),表達(dá)灰度分析MOD值為0.55±0.25,021±0.17(P=0.001);BCRP在CD133+細(xì)胞中高表達(dá),而在CD133-細(xì)胞中低表達(dá),表達(dá)灰度分析MOD值為0.48±0.21,0.20±0.11(P=0.000);LEF-1在CD133+細(xì)胞中高表達(dá),而在CD133-細(xì)胞中低表達(dá)。表達(dá)灰度分析MOD值為0.41±0.21,0.21±0.13(P=0.000)。8 Lgr5、BCRP和LEF-1在ALDH1+CD133+細(xì)胞與ALDH1-CD133-細(xì)胞中的表達(dá)情況通過(guò)Western blot方法檢測(cè)Lgr5在ALDH1+CD133+細(xì)胞中高表達(dá),而ALDH1-CD133-細(xì)胞中低表達(dá),表達(dá)灰度分析MOD值為0.61±0.28,014±0.01(P=0.000);BCRP在ALDH1+CD133+細(xì)胞中高表達(dá),而ALDH1-CD133-細(xì)胞中低表達(dá),表達(dá)灰度分析MOD值為0.60±0.18,0.11±0.12(P=0.000);LEF-1在ALDH1+CD133+細(xì)胞中高表達(dá),而在ALDH1-CD133-細(xì)胞中低表達(dá)。表達(dá)灰度分析MOD值為0.47±0.15,0.18±0.12(P=0.000)。9 Lgr5、BCRP和LEF-1在ALDH1+CD133+細(xì)胞與ALDH1-CD133-細(xì)胞中的表達(dá)情況通過(guò)Western blot方法檢測(cè)Lgr5在ALDH1+細(xì)胞和ALDH1+CD133+細(xì)胞表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.880);在CD133+細(xì)胞和ALDH1+CD133+細(xì)胞表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.140);BCRP在ALDH1+細(xì)胞和ALDH1+CD133+細(xì)胞表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.190);在CD133+細(xì)胞表達(dá)低于+CD133+細(xì)胞,表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.002);LEF-1在ALDH1+細(xì)胞和ALDH1+CD133+細(xì)胞表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.097);在CD133+細(xì)胞表達(dá)低于在ALDH1+CD133+細(xì)胞,表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.013)。結(jié)論：1經(jīng)流式細(xì)胞分選得到的裸鼠移植瘤原代細(xì)胞CD133+,ALDH1+ALDH1+CD133+細(xì)胞細(xì)胞確實(shí)具有腫瘤干細(xì)胞特性,符合腫瘤干細(xì)胞假說(shuō)。2 Western Blot結(jié)果顯示:Lgr5、LEF-1和BCRP在卵巢癌干細(xì)胞中均呈現(xiàn)高表達(dá)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R737.31

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1 胡蓉;惠寧;歐俊;吳冬;;三種化療方案對(duì)晚期卵巢上皮性癌的療效比較[A];第四屆長(zhǎng)三角婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)論壇暨浙江省2009年婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

2 陳蘭芳;;中晚期卵巢上皮性癌的治療與預(yù)后影響因素[A];中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)婦科腫瘤專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第六次全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

3 溫宏武;姚曉玲;邵愛(ài)玲;;晚期卵巢上皮性癌近20年預(yù)后變化[A];中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)婦科腫瘤專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第七次全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2003年

4 薛金玲;;晚期卵巢上皮性癌生存率20年變化研究[A];第八次全國(guó)婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

5 何成章;浦紅;呂蓓;董若凡;邱旭軍;;復(fù)發(fā)性/難治性卵巢上皮性癌45例臨床分析[A];江蘇省抗癌協(xié)會(huì)婦科腫瘤專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第四次腫瘤學(xué)術(shù)研討會(huì)暨無(wú)錫市婦產(chǎn)科年會(huì)論文匯編[C];2005年

6 陳亦樂(lè);劉艷瓊;唐迪紅;褚超男;;晚期卵巢上皮性癌不同化療途徑臨床對(duì)比研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)婦科腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

7 王莉英;;35歲以下卵巢上皮性癌患者29例臨床分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)婦科腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

8 彭澎;沈鏗;楊佳欣;吳鳴;黃惠芳;潘凌亞;郎景和;;吉西他濱聯(lián)合化療在卵巢上皮性癌治療中的效應(yīng)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)婦科腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

9 余冬青;李力;;卵巢上皮性癌腹膜后淋巴結(jié)清掃的臨床價(jià)值[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)婦科腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

10 余冬青;李力;;卵巢上皮性癌腹膜后淋巴結(jié)清掃的臨床價(jià)值[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)婦科腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 楊波;循環(huán)無(wú)細(xì)胞DNA對(duì)卵巢上皮性癌患者的診斷、療效評(píng)價(jià)和病情監(jiān)測(cè)的價(jià)值[D];河北醫(yī)科大學(xué);2008年

2 姚洪文;新的卵巢上皮性癌蛋白標(biāo)志物的初步研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2009年

3 楊建華;水通道蛋白在卵巢上皮性癌中的作用及其調(diào)節(jié)機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2006年

4 趙素芬;破壁靈芝孢子粉提取物抑制人卵巢上皮性癌細(xì)胞生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移及逆轉(zhuǎn)順鉑耐藥的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

5 余立群;不良心理應(yīng)激對(duì)人卵巢上皮性癌發(fā)生、發(fā)展影響的實(shí)驗(yàn)和臨床研究[D];南昌大學(xué);2008年

6 呂訥男;Septin-9和Clusterin在卵巢上皮性癌患者外周血和腫瘤組織中的蛋白水平及其臨床意義[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

7 高軍;不良心理應(yīng)激對(duì)人卵巢上皮性癌荷瘤裸鼠腫瘤影響的蛋白組學(xué)研究[D];南昌大學(xué);2011年

8 孫亞楠;化療對(duì)于卵巢上皮性癌移植瘤中干細(xì)胞層級(jí)的調(diào)控[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

9 楊潔;HIF-1α與卵巢上皮性癌血管生成及生物學(xué)行為的關(guān)系[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

10 閆曉娟;IGFBP-2及IGFBP-3對(duì)卵巢上皮性癌患者體內(nèi)IGF-Ⅱ的生物學(xué)功能調(diào)節(jié)及體外化療耐藥相關(guān)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 陳鳳;微衛(wèi)星不穩(wěn)定與卵巢上皮性癌易感性的臨床病例分析[D];吉林大學(xué);2009年

2 江瑜;卵巢上皮性癌93例臨床分析[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

3 王佩;卵巢上皮性癌患者術(shù)后生活質(zhì)量影響因素的調(diào)查分析[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

4 湯偉偉;miR-135a及17-β雌二醇在卵巢上皮性癌中作用的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2011年

5 謝華;多藥耐藥基因及谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶-π表達(dá)與卵巢上皮性癌化療敏感性關(guān)系的研究[D];延邊大學(xué);2004年

6 史麗;溶血磷脂酸對(duì)卵巢上皮性癌診斷及病情監(jiān)測(cè)價(jià)值的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2007年

7 汪麗;卵巢上皮性癌化療新進(jìn)展[D];蘭州大學(xué);2013年

8 袁彩霞;乙酰肝素酶在卵巢上皮性癌中的表達(dá)及促腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2008年

9 顧雙;卵巢上皮性癌組織中激肽釋放酶7及14的表達(dá)及臨床意義[D];山東大學(xué);2008年

10 何衛(wèi)華;粘著斑激酶及肝癌缺失基因-1在卵巢上皮性癌組織中的表達(dá)及其意義[D];鄭州大學(xué);2010年

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本文編號(hào)：1750047