本文選題：胃癌 + DDR1�。� 參考：《蘭州大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：目的觀察DDRl是否通過調(diào)控上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化影響胃癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移,并探討其可能的分子機(jī)制。方法(1)運(yùn)用免疫組化法篩選DDRl高表達(dá)及低表達(dá)胃癌細(xì)胞株。(2)構(gòu)建DDRl靶向siRNA,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染siRNA于DDR1高表達(dá)胃癌細(xì)胞,RT-PCR及Western Blot法檢測(cè)DDR1在轉(zhuǎn)染前后的表達(dá)情況。應(yīng)用MTT法、Transwell法及流式細(xì)胞法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后胃癌細(xì)胞的增殖、遷移侵襲能力、細(xì)胞周期及凋亡的變化。Western Blot法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后EMT相關(guān)蛋白E-cadherin及Vimentin的表達(dá)變化,并檢測(cè)EMT相關(guān)信號(hào)蛋白Snail的表達(dá)。(3)構(gòu)建DDRl重組慢病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染DDR1低表達(dá)胃癌細(xì)胞以過表達(dá)胃癌細(xì)胞DDR1, RT-PCI及Western Blot法檢測(cè)DDRl在轉(zhuǎn)染前后的表達(dá)情況。應(yīng)用MTT法、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、Transwell法以及流式細(xì)胞法分別檢測(cè)過表達(dá)DDR1對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和細(xì)胞周期及凋亡的影響。Western Blot法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后EMT相關(guān)蛋白E-cadherin及Vimentin的表達(dá)變化,并檢測(cè)EMT相關(guān)信號(hào)蛋白Snail的表達(dá)。(4)裸鼠背部皮下注射攜帶GFP的DDR1重組慢病毒穩(wěn)轉(zhuǎn)的BGC-823細(xì)胞構(gòu)建裸鼠移植瘤模型,2×106細(xì)胞裸鼠皮下接種,分別于7d、21d、5d、49d行小動(dòng)物活體成像以測(cè)定移植瘤大小,觀察DDRl過表達(dá)對(duì)裸鼠體內(nèi)胃癌移植瘤生長的影響,49d處死裸鼠,取瘤體觀察其組織細(xì)胞形態(tài)和血管生成相關(guān)蛋白CD34的表達(dá)情況。結(jié)果(1)對(duì)胃癌細(xì)胞MKN-45、BGC-823、SGC-7901及正常胃粘膜細(xì)胞GES-1免疫組織化學(xué)分析結(jié)果顯示：胃癌細(xì)胞DDRl表達(dá)均為陽性,而正常胃粘膜細(xì)胞GES-1表達(dá)呈陰性；DDR1在胃癌細(xì)胞MKN-45中表達(dá)最強(qiáng)而在BGC-823中表達(dá)最弱。(2) RT-PCR及Western Blot結(jié)果顯示DDR1-siRNA轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞MKN-45后,DDRl在該細(xì)胞的表達(dá)明顯下降(p0.05),而DDRl重組慢病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染BGC-823后,DDRl在BGC-823細(xì)胞的表達(dá)明顯增加(p0.01)。(3)MTT結(jié)果顯示,阻斷MKN-45 DDRl的表達(dá)明顯抑制了MKN-45的增殖(p0.05),而DDR1在BGC-823的過表達(dá)明顯增加了BGC-823的增殖(p0.01)；平板單克隆形成實(shí)驗(yàn)顯示,DDR1過表達(dá)后BGC-823細(xì)胞單克隆形成能力明顯增強(qiáng)(p0.05)。(4)流式細(xì)胞儀測(cè)定結(jié)果顯示,增加或抑制DDR1在胃癌細(xì)胞的表達(dá)不能導(dǎo)致細(xì)胞周期的改變(p0.05),對(duì)胃癌細(xì)胞凋亡也無影響(p0.05)。(5) Transwell小室遷移及侵襲實(shí)驗(yàn)證實(shí),MKN-45細(xì)胞在DDRl阻斷后穿過膜的細(xì)胞數(shù)目明顯減少(p0.01),而BGC-823細(xì)胞在DDR1過表達(dá)后穿膜的細(xì)胞數(shù)目明顯增加(p0.01)。(6)蛋白免疫印跡結(jié)果顯示,抑制DDR1在胃癌細(xì)胞MKN-45的表達(dá)導(dǎo)致上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白E-cadherin表達(dá)增加(p0.01)、Vimentin表達(dá)下降(p0.05),信號(hào)相關(guān)蛋白Snail表達(dá)下降(p0.05)；DDRl在胃癌細(xì)胞的過表達(dá)則導(dǎo)致相反的結(jié)果。(7)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示,DDR1過表達(dá)后BGC-823細(xì)胞在裸鼠皮下移植瘤的生長速度明顯加快(p0.05),瘤體組織免疫組化染色顯示CD34在DDR1過表達(dá)組表達(dá)明顯增加(p0.01)。結(jié)論(1)DDR1的表達(dá)可促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲能力,提示DDR1有可能成為胃癌治療的靶點(diǎn)。(2)DDR1在胃癌的表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞的細(xì)胞周期和凋亡無明顯影響。(3)DDR1可能通過激活Snail信號(hào)通路促進(jìn)胃癌細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,進(jìn)而影響胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移。(4)DDR1能夠促進(jìn)胃癌細(xì)胞體內(nèi)移植瘤的生長,并且能夠促進(jìn)移植瘤微血管的形成。
[Abstract]:The expression of EMT - related protein E - cadherin and vimentin was detected by Western Blot . The expression of EMT - related protein E - cadherin and vimentin was detected by Western Blot . The results showed that the expression of EMT - related protein E - cadherin and vimentin was detected by Western Blot .
( 2 ) The expression of MKN - 45 DDRl significantly decreased ( P < 0.01 ) .
( 4 ) Flow cytometry showed that the proliferation of MKN - 45 cells in gastric cancer cells could not result in the change of cell cycle ( p0.01 ) .
Conclusion ( 1 ) DDR1 can promote the proliferation , migration and invasion of gastric cancer cells . ( 3 ) DDR1 may promote the growth of gastric cancer cells and promote the invasion and metastasis of gastric cancer cells .

【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.2

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1738472