發(fā)布時(shí)間：2018-04-11 10:31

  本文選題：肺肉瘤樣癌 + 肺鱗癌��； 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：近幾年我國吸煙人數(shù)不斷增加,人們生存的環(huán)境也不斷惡化,肺癌的發(fā)病率也隨之上升,在全國惡性腫瘤的總發(fā)病率已占據(jù)了首要位置,成為對(duì)人健康和生命產(chǎn)生威脅最大的惡性腫瘤之一。在近幾年肺癌的發(fā)病年齡也逐漸年輕化在男性肺癌發(fā)病率和死亡率均占第一位,女性發(fā)病率、死亡率僅次于乳腺癌居第二位,威脅人類的健康顯而易見。目的研究肺肉瘤樣癌(pulmonary sarcomatoid carcinoma,PSC)和肺鱗癌(lung squamous cell carcinoma,LSCS)中轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、EMT相關(guān)蛋白的表達(dá)情況,分析其相關(guān)性。并探討肺肉瘤樣癌中TGF-β1與血管生成擬態(tài)(vasculogenic mimicry,VM)的關(guān)系及對(duì)臨床生存、預(yù)后的影響。通過體外TGF-β1誘導(dǎo)肺鱗癌細(xì)胞發(fā)生EMT表型轉(zhuǎn)變及細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力的影響,并闡述EMT提高肺鱗癌細(xì)胞的侵襲遷移能力、VM形成的相關(guān)機(jī)制。方法1)分析天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院1995年1月至2010年12月在手術(shù)前沒有接受放化療治療的肺肉瘤樣癌患者41例、肺鱗癌患者79例的臨床資料,總結(jié)其隨訪結(jié)果。分別對(duì)肺肉瘤樣癌和肺鱗癌進(jìn)行TGF-β1和EMT相關(guān)指標(biāo)E-cadherin、Vimentin、Twist1進(jìn)行免疫組化染色,分析兩組中TGF-β1與EMT相關(guān)蛋白的關(guān)系。并對(duì)人肺肉瘤樣癌病例組織切片41例進(jìn)行CD31和PAS雙重染色,分析在肺肉瘤樣癌中TGF-β1與VM之間的預(yù)后關(guān)系。最后對(duì)VE-cadherin、MMP-2蛋白進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,分析肺肉瘤樣癌中VM形成的相關(guān)機(jī)制。2)通過培養(yǎng)SK-MES-1肺鱗癌細(xì)胞株,并利用TGF-β1對(duì)肺鱗癌細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)。觀察是否發(fā)生EMT,同時(shí)促進(jìn)了VM的形成。利用細(xì)胞功能學(xué)的一些方法,觀察經(jīng)過誘導(dǎo)后的肺鱗癌細(xì)胞的侵襲能力變化、遷移速度改變,還有三維管道形成能力。3)應(yīng)用Western Blot、RT-PCR、免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)從蛋白和m RNA水平檢測E-cadherin、Vimentin表達(dá)情況,從機(jī)制上探究肺鱗癌細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)后發(fā)生EMT,從而促進(jìn)VM的形成。4)Western Blot檢測VE-cadherin作為血管生成擬態(tài)形成的關(guān)鍵,在TGF-β1誘導(dǎo)前后的表達(dá)差異。5)利用明膠酶譜來檢測TGF-β1誘導(dǎo)后肺鱗癌細(xì)胞的基質(zhì)金屬蛋白酶-2、基質(zhì)金屬蛋白酶-9活性的影響。結(jié)果1)肺肉瘤樣癌、肺鱗癌EMT相關(guān)蛋白、TGF-β1的表達(dá)通過對(duì)41例肺肉瘤樣癌、79例肺鱗癌的EMT相關(guān)蛋白免疫組化染色,發(fā)現(xiàn)與肺鱗癌相比,肺肉瘤樣癌的E-cadherin表達(dá)下降,Vimentin表達(dá)明顯增強(qiáng),兩組間比較差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。隨后通過TGF-β1、Twist1的免疫組化染色,發(fā)現(xiàn)在肺肉瘤樣癌和肺鱗癌兩組中,TGF-β1與Twist1的差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2)TGF-β1蛋白與血管生成擬態(tài)的形成有關(guān)41例肺肉瘤樣癌病例中TGF-β1的陽性表達(dá)率為43.9%(18/41)。VM陽性組TGF-β1的陽性表達(dá)率為80%(8/10);VM陰性組TGF-β1的陽性表達(dá)率為32.3%(10/31)。TGF-β1在VM陽性組和VM陰性組的陽性表達(dá)率的差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。生存分析表明,TGF-β1陽性組較陰性組的總體生存時(shí)間短。3)TGF-β1對(duì)肺鱗癌細(xì)胞的誘導(dǎo)通過體外三維培養(yǎng)證實(shí)其促進(jìn)了肺鱗癌細(xì)胞血管生成擬態(tài)的形成,增強(qiáng)了肺鱗癌細(xì)胞的侵襲和遷移能力經(jīng)過TGF-β1誘導(dǎo)后的肺鱗癌細(xì)胞在Matrigel三維培養(yǎng)模型上能夠形成VM,且管道化結(jié)構(gòu)較復(fù)雜。Transwell小室體外侵襲實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)不同濃度TGF-β1誘導(dǎo)不同時(shí)間的肺鱗癌細(xì)胞,與未處理組相比,濃度高且誘導(dǎo)時(shí)間長的實(shí)驗(yàn)組穿過Matrigel膠形成的基底膜的細(xì)胞數(shù)越多,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,組間差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。劃痕實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn),TGF-β1誘導(dǎo)10d、15d組的肺鱗癌細(xì)胞在48h傷口完全愈合,其速度均高于未處理組,差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。進(jìn)一步證明誘導(dǎo)后的肺鱗癌細(xì)胞,其侵襲性和移動(dòng)能力較未處理組明顯增強(qiáng)。4)體外實(shí)驗(yàn)TGF-β1誘導(dǎo)肺鱗癌細(xì)胞發(fā)生EMT,促進(jìn)了VM的形成細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)證實(shí)SK-MES-1細(xì)胞在TGF-β1誘導(dǎo)后不僅在形態(tài)上發(fā)生了變化,同時(shí)也發(fā)生了EMT,出現(xiàn)了抗原表型的轉(zhuǎn)變,由上皮的表型轉(zhuǎn)變成間充質(zhì)表型。Western Blot及RT-PCR檢測經(jīng)誘導(dǎo)后的細(xì)胞蛋白和m RNA表達(dá),證實(shí)了誘導(dǎo)后的肺鱗癌細(xì)胞Vimentin蛋白及m RNA水平均顯著上調(diào)表達(dá),E-cadherin表達(dá)下調(diào)。以上結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)肺鱗癌細(xì)胞發(fā)生EMT樣可塑性轉(zhuǎn)變,從而促進(jìn)了血管生成擬態(tài)的形成。5)VM形成的關(guān)鍵蛋白VE-cadherin和基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2在TGF-β1誘導(dǎo)后表達(dá)顯著升高在人肺肉瘤樣癌的石蠟切片上已經(jīng)初步證實(shí)具有VM的肺肉瘤樣癌病例中VE-cadherin、MMP-2蛋白高表達(dá),其中MMP-2的高表達(dá)說明了肺肉瘤樣癌侵襲性強(qiáng)、預(yù)后差、5年生存率低的特點(diǎn)。且體外Western Blot檢測出肺鱗癌細(xì)胞在TGF-β1誘導(dǎo)后,血管生成擬態(tài)關(guān)鍵蛋白VE-cadherin呈現(xiàn)高表達(dá);明膠酶譜實(shí)驗(yàn)證實(shí)誘導(dǎo)15d后的SK-MES-1細(xì)胞較未處理組的MMP-2的活性增高。結(jié)論1)肺肉瘤樣癌中發(fā)生了EMT,其EMT表型的機(jī)制可能與TGF-β激活轉(zhuǎn)錄因子Twist1促進(jìn)EMT發(fā)生有關(guān)。2)轉(zhuǎn)化生長因子TGF-β1與血管生成擬態(tài)有關(guān),促進(jìn)了肺肉瘤樣癌中VM的形成。3)經(jīng)過TGF-β1誘導(dǎo)的肺鱗癌細(xì)胞,其侵襲性和運(yùn)動(dòng)能力得到增強(qiáng),管道形成能力增強(qiáng)。4)TGF-β1促進(jìn)了VM形成的關(guān)鍵蛋白VE-cadherin表達(dá)上調(diào)。5)TGF-β1誘導(dǎo)肺鱗癌細(xì)胞可發(fā)生EMT,進(jìn)而促進(jìn)了VM的形成。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R734.2

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本文編號(hào)：1735614