本文選題：巖藻多糖 + 吉馬酮　； 參考：《華中科技大學》2015年博士論文

【摘要】：褐藻多糖硫酸酯是多糖中的主要生物活性成分之一。在多種褐藻中,褐藻多糖硫酸酯大約占總干重的4%。褐藻多糖硫酸酯是一種結構復雜的硫酸化多糖,主要成分包括硫酸酯化L-巖藻糖、半乳糖和微量的木糖以及谷氨酸。褐藻多糖硫酸酯作為一種潛在的抗癌藥物正在受到人們的關注,但其作用的分子機理仍不十分清楚。 本論文首先針對褐藻多糖硫酸酯對人肝癌細胞HepG2的效應及其可能的作用機制開展了研究。褐藻多糖硫酸酯處理后會引起HepG2細胞周期的阻滯和誘導HepG2細胞藥物濃度依賴性地發(fā)生凋亡。采用濃度為0、0.2、1、2、4和6mg/ml的褐藻多糖硫酸酯處理HepG2細胞后,通過MTT、流式細胞儀和熒光顯微鏡檢測等方法檢測了細胞周期和細胞凋亡的變化。流式細胞儀分析的結果表明,褐藻多糖硫酸酯能夠將HepG2細胞周期阻滯在G2/M期。Hoechst33258和Annexin V/PI染色結果顯示,隨著Bax表達的上調以及Bcl-2和p-STAT3表達的下調,細胞出現藥物濃度依賴性的凋亡。此外,褐藻多糖處理后還會引起Cyclin B1和CDK1的下調。褐藻多糖硫酸酯引起的p-STAT3的下調會導致細胞凋亡和細胞內活性氧的增加。因此,我們得出結論：褐藻多糖硫酸酯誘導的HepG2細胞凋亡是通過下調p-STAT3實現的。 本論文還初步探討了褐藻多糖硫酸酯對體外培養(yǎng)的神經母細胞瘤SH-SY5Y增殖的影響,發(fā)現低濃度褐藻多糖硫酸酯對神經母細胞瘤SH-SY5Y增殖有促進作用,主要是增加了S期細胞的比例。 我們還研究了莪術油的有效成分之一吉馬酮對肝癌細胞Be17402增殖的影響,并對其作用機制進行了初步的分析。采用MTT法檢測了吉馬酮對Be17402和L02細胞增殖的影響；通過流式細胞儀檢測了吉馬酮誘導細胞凋亡情況和細胞內ROS的變化;采用Western Blotting法檢測p53、 Bax和Bcl-2等蛋白的表達情況。在實驗所用的濃度范圍內,發(fā)現吉馬酮能夠濃度依賴性的抑制肝癌細胞Be17402增殖,同時吉馬酮還能促進Be17402細胞發(fā)生凋亡和ROS合成的增多；在Be17402細胞中觀察到吉馬酮處理可引起p53和Bax表達的增加以及Bcl-2蛋白表達的降低。吉馬酮能夠顯著的抑制Be17402細胞顯著增殖可能與p53, Bax和Bcl-2和ROS的增加相關。 以上研究結果對全面揭示褐藻多糖硫酸酯及吉馬酮抗癌作用的分子機理及抗癌藥物的開發(fā)應用具有參考意義。
[Abstract]:Sulfates from brown algae polysaccharides are one of the main bioactive components in polysaccharides.In many kinds of brown algae, the sulfates of polysaccharides from brown algae account for about 4% of the total dry weight.Fucoidan sulfate is a kind of sulfated polysaccharide with complex structure. The main components include sulfated L-fucose galactose and trace xylose as well as glutamic acid.As a potential anticancer drug, fucoidan sulfate has attracted much attention, but the molecular mechanism of its action is still unclear.In this paper, the effect of polysaccharide sulfate of brown algae on HepG2 of human hepatoma cells and its possible mechanism were studied.HepG2 cell cycle arrest and apoptosis in a concentration-dependent manner were induced by polysaccharides sulfate from brown algae.The cell cycle and apoptosis of HepG2 cells were detected by MTT, flow cytometry and fluorescence microscopy.The results of flow cytometry showed that the cell cycle of HepG2 could be blocked in G _ 2 / M phase. Hoechst33258 and Annexin V/PI staining, with the up-regulation of Bax expression and the down-regulation of Bcl-2 and p-STAT3 expression.Cell apoptosis was concentration-dependent.In addition, Cyclin B1 and CDK1 were down-regulated after the treatment of brown algae polysaccharides.The down-regulation of p-STAT3 induced by polysaccharides sulfate from brown algae may lead to apoptosis and increase of intracellular reactive oxygen species (Ros).Therefore, we concluded that the apoptosis of HepG2 cells induced by polysaccharide sulfate of brown algae was achieved by down-regulation of p-STAT3.The effect of polysaccharide sulfate of brown algae on the proliferation of SH-SY5Y of neuroblastoma in vitro was also studied. It was found that the low concentration of polysaccharide sulfate of brown algae promoted the proliferation of SH-SY5Y in neuroblastoma, mainly by increasing the proportion of S phase cells.We also studied the effect of gemanone, one of the effective components of zedoary turmeric oil, on the proliferation of hepatoma cell line Be17402, and analyzed its mechanism.The effects of gemanone on the proliferation of Be17402 and L02 cells were detected by MTT assay, the apoptosis induced by gemone and the changes of intracellular ROS were detected by flow cytometry, and the expression of p53, Bax and Bcl-2 were detected by Western Blotting assay.In the range of concentration used in the experiment, it was found that gemadone could inhibit the proliferation of Be17402 cells in a concentration-dependent manner, and at the same time, it could promote the apoptosis of Be17402 cells and the increase of ROS synthesis.In Be17402 cells, the expression of p53 and Bax was increased and the expression of Bcl-2 protein was decreased.The inhibitory effect of gemadone on the proliferation of Be17402 cells may be related to the increase of p53, Bax, Bcl-2 and ROS.The above results are helpful to reveal the molecular mechanism of the anticancer effects of fucoidan polysaccharides sulfate and jimarone and the development and application of anticancer drugs.
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R730.5

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本文編號：1734730