本文選題：SAHA + 順鉑��； 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景骨肉瘤是最常發(fā)生的原發(fā)性骨腫瘤,惡性程度極高,多發(fā)生于兒童、青少年。順鉑(cisplatin,CDDP)作為一種一線化療藥物,已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于骨肉瘤的治療,但是藥物的副作用(如腎毒性和耳毒性)和耐藥性限制了順鉑在臨床上的應(yīng)用。SAHA作為一種新興的組蛋白去乙�；敢种苿�(Histone deacetylase inhibitors,HDACIs),已經(jīng)被美國食品藥品管理局(Food and Drug Administration,FDA)批準(zhǔn)為第一個(gè)用于治療皮膚T細(xì)胞淋巴瘤(cutaneous T cell lymphoma,CTCL)的HDACI。然而,SAHA單獨(dú)用于治療時(shí)的療效十分有限,特別是用于實(shí)體腫瘤時(shí)。目的研究SAHA與順鉑聯(lián)用對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞株143B的增殖、凋亡和遷移作用的影響,并探討其分子機(jī)制。方法1.SAHA與CDDP單獨(dú)應(yīng)用和聯(lián)合應(yīng)用對(duì)人骨肉瘤143B細(xì)胞增殖、凋亡和遷移能力的影響:骨肉瘤143B細(xì)胞分別經(jīng)不同濃度的SAHA、CDDP、SAHA+CDDP作用48 h。采用倒置普通顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變;采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力的改變并采用Chou-Talalay法計(jì)算兩藥聯(lián)合指數(shù)(Combination index,CI);采用流式細(xì)胞術(shù)(Flow cytometer,FCM)檢測(cè)細(xì)胞的周期阻滯和凋亡的改變;采用克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞集落形成能力的改變;采用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)對(duì)細(xì)胞遷移能力的影響。2.生物信息學(xué)篩選SAHA、CDDP共同作用基因以及信號(hào)通路并進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)分析:通過比較毒物基因組學(xué)數(shù)據(jù)庫(Comparative Toxicogenomics Database,CTD)檢索受SAHA、CDDP調(diào)控的基因和通路,利用在線韋恩工具對(duì)其共同靶基因和通路進(jìn)行富集;并用Cytoscape 3.4.0對(duì)共有靶基因進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)分析及預(yù)測(cè)。3.SAHA與CDDP聯(lián)合作用對(duì)人骨肉瘤143B細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白以及凋亡信號(hào)通路的影響:骨肉瘤143B細(xì)胞分別經(jīng)SAHA、CDDP、SAHA+CDDP處理48 h后,采用Western blot檢測(cè)Bcl-2和Bax的表達(dá);采用Western blot檢測(cè)cleaved-Caspase-3,cleaved-Caspase-8和cleaved-PARP的表達(dá)。結(jié)果1.SAHA+CDDP處理組中骨肉瘤143B細(xì)胞大量壞死,細(xì)胞增殖的抑制較單藥組顯著,且兩藥為協(xié)同作用關(guān)系;FCM結(jié)果證實(shí)SAHA+CDDP能夠使細(xì)胞阻滯于S期,細(xì)胞早期凋亡率明顯增加;SAHA+CDDP處理組的克隆形成能力與細(xì)胞遷移能力結(jié)果亦明顯低于單藥組。2.通路富集結(jié)果顯示,骨肉瘤發(fā)生過程中受SAHA、CDDP共同調(diào)控的通路共有78條;藥物作用網(wǎng)絡(luò)顯示,共有12個(gè)共同基因同時(shí)受SAHA、CDDP調(diào)節(jié)。3.143B細(xì)胞經(jīng)SAHA+CDDP處理48 h后促凋亡因子Bax表達(dá)水平較對(duì)照組與單藥組上調(diào)(P0.05,P0.05),抗凋亡因子Bcl-2表達(dá)水平下降(P0.05,P0.05)。同時(shí),SAHA+CDDP處理組中凋亡信號(hào)通路相關(guān)蛋白cleaved-Caspase-3,cleaved-Caspase-8和cleaved-PARP表達(dá)水平較對(duì)照組與單藥組上調(diào)(P0.05,P0.05)。結(jié)論1.SAHA與CDDP聯(lián)合應(yīng)用能夠顯著抑制人骨肉瘤143B細(xì)胞的增殖,促進(jìn)其凋亡,且兩者具有協(xié)同性。2.SAHA與CDDP聯(lián)合應(yīng)用能夠顯著抑制人骨肉瘤143B細(xì)胞的克隆形成能力與細(xì)胞遷移能力。3.SAHA與CDDP聯(lián)合應(yīng)用可以協(xié)同調(diào)控多條信號(hào)通路。4.SAHA與CDDP聯(lián)合應(yīng)用引起的骨肉瘤143B細(xì)胞凋亡過程中,能夠改變Caspases家族、Bcl-2家族相關(guān)凋亡蛋白的表達(dá)。
[Abstract]:The effects of SAHA and cisplatin on proliferation , apoptosis and migration of human osteosarcoma cell line 143B were studied . The effects of SAHA and cisplatin on proliferation , apoptosis and migration of human osteosarcoma cell line 143B were studied . Results 1 . The expression of Bcl - 2 and Bax was detected by Western blot . The results showed that the expression of Bcl - 2 and Bax was significantly higher than that in single - drug group . At the same time , the expression level of apoptosis signal pathway related protein kinase - Caspase - 3 , MMP - Caspase - 8 in SAHA + cisplatin group was higher than that in the control group ( P0.05 , P0.05 ) . Conclusion 1 . The combination of SAHA and cisplatin can significantly inhibit the proliferation of human osteosarcoma 143B cells and promote apoptosis , and the combination of both SAHA and cisplatin can significantly inhibit the clonal formation ability and cell migration ability of human osteosarcoma 143B cells .

【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R738

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