本文選題：腦膠質瘤 + PIK3CD��； 參考：《第三軍醫(yī)大學》2016年碩士論文

【摘要】：腦膠質瘤是成人中樞神經系統發(fā)病率最高的原發(fā)性實體瘤,世界衛(wèi)生組織(WHO)依據其病理特點將之分為4級,分別為I級、II級、III級和IV級。低級別腦膠質瘤(WHO II級)可以轉變?yōu)楦呒墑e腦膠質瘤,高級別腦膠質瘤侵襲性強、外科手術難以完全切除,術后易復發(fā)。惡性程度最高的膠質母細胞瘤患者5年存活率極低,平均生存期僅為12到15個月。惡性膠質瘤最突出的病理形態(tài)學特點是含有大量異質性的新生血管,這些新生血管為腫瘤演進、侵襲、復發(fā)提供了物質支撐。然而,目前針對膠質瘤血管的治療策略效果欠佳。因此,探討膠質瘤血管新生機制、研發(fā)靶向治療策略、提高治療效果依舊是目前的研究熱點。已有研究表明,膠質瘤的發(fā)生及演進過程涉及多個基因突變、缺失、及表達異常,包括抑癌基因P53、PTEN、異檸檬酸脫氫酶1(IDH1)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)等。這些基因的異常及引發(fā)的相關信號通路變化在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起至關重要的作用。在膠質瘤演進過程中,PI3K/Akt信號通路異�；罨顬槌Ｒ�,并與腫瘤的發(fā)生、演進、侵襲、復發(fā)有密切聯系。我們前期研究發(fā)現PI3K/Akt通路在膠質瘤干細胞促血管生成中發(fā)揮重要作用。I A型脂酰肌醇3激酶(IA型PI3K)是由p85和p110兩個亞基構成的異質二聚體,其中p110亞基可以分為p110α、p110β、p110δ型。不同的亞基在機體不同組織和器官中表達和分布是不一樣的。P110α、p110β型表達廣泛,無組織和器官特異性,而p110δ型在不同組織中卻有明顯表達差異,主要表達于免疫細胞。P110δ由PIK3CD基因編碼轉錄而來,與p85構成異質二聚體PI3Kδ而發(fā)揮相應的生物學效應。本研究中,我們探討了PIK3CD對人腦膠質瘤血管生成的影響及機制。我們首先通過免疫組織化學染色檢測了PIK3CD編碼蛋白p110δ在人膠質瘤標本中的表達及分布特點,并分析了膠質瘤p110δ表達與病人臨床特征及微血管密度之間的相關性。然后利用慢病毒載體在人膠質瘤細胞系中過表達和敲低PIK3CD,研究了PIK3CD表達改變后的膠質瘤細胞上清液對臍靜脈內皮細胞增殖、遷移、成管能力的影響。最后,通過構建免疫缺陷鼠原位膠質瘤移植瘤,研究了敲低PIK3CD對移植瘤血管密度及荷瘤鼠生存期的影響。本課題主要包含了以下3個部分:1.PIK3CD表達與膠質瘤患者臨床病理參數的關系通過在166例臨床病例標本中進行免疫組織化學染色,發(fā)現PIK3CD表達產物p110δ蛋白主要表達于腫瘤細胞漿,在瘤細胞核也有少量陽性表達,而腫瘤間質血管幾乎無表達。在高級別腦膠質瘤(III級和IV級)中,PIK3CD表達量高(IHC評分≥2分)的患者所占比例數高(34%和46%);而低級別膠質瘤(II級)中,PIK3CD表達量高(IHC評分≥2分)的患者占的比例較低(5%)。PIK3CD在I級膠質瘤和瘤旁腦組織中幾乎不表達。通過Kaplan-Meier方法分析患者預后,發(fā)現PIK3CD高表達的患者無進展生存期和總生存期顯著短于低表達者,在膠質母細胞瘤(GBM)中也觀察到了這一現象。Cox比例風險模型的單因素和多因素生存分析表明PIK3CD是膠質瘤的獨立預后預測因子。Person相關性檢驗發(fā)現PIK3CD的表達在膠質瘤及GBM中與腫瘤微血管密度值正相關。2.PIK3CD對膠質瘤細胞體外促血管生成能力的影響利用慢病毒導入shRNA,敲低人膠質瘤細胞(細胞系U87、原代膠質瘤細胞GBM1)的PIK3CD基因,經PCR及Western Blot證實細胞中PIK3CD表達比對照組明顯降低。收集細胞上清,與人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)共培養(yǎng),發(fā)現HUVEC的增殖、遷移能力、及成管能力均顯著降低。為了驗證上述結果,在人膠質瘤細胞U87和GBM1中過表達PIK3CD基因,經Western Blot及PCR證實細胞中PIK3CD表達顯著增高。結果表明膠質瘤細胞過表達PIK3CD可以增強其對HUVEC的增殖、遷移及成管能力的促進作用。免疫熒光染色發(fā)現PIK3CD低表達的膠質瘤細胞VEGF表達量顯著降低,反之,PIK3CD過表達的膠質瘤細胞中VEGF表達明顯增高,在Western Blot中也驗證了這一發(fā)現。ELISA發(fā)現PIK3CD低表達的膠質瘤細胞上清液中含有的VEGF量顯著減少。3.PIK3CD對膠質瘤原位移植瘤血管生成及腫瘤生長的影響用穩(wěn)定低表達PIK3CD的人膠質瘤細胞系(U87)建立原位移植瘤,發(fā)現與對照組相比,PIK3CD低表達組裸鼠生存期顯著延長,瘤體內新生血管數量減少。以上研究結果提示,膠質瘤中PIK3CD通過調控VEGF產生而促進膠質瘤內皮細胞增殖、遷移及形成小管樣結構,進而形成新生血管。該研究結果將為進一步闡明膠質瘤血管生成機制和研發(fā)膠質瘤血管生成靶向治療策略提供理論與實驗依據。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R739.41

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