本文選題：預(yù)后　切入點(diǎn)：WTX基因　出處：《昆明醫(yī)科大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：研究目的1.研究抑癌基因WTX和β-catenin、P-gp在不同生存期胃癌患者腫瘤組織中的表達(dá)情況及三者之間的相關(guān)性；建立Logistic回歸模型,分析影響胃癌預(yù)后的因素。2.構(gòu)建過(guò)表達(dá)WTX的慢病毒載體,以高表達(dá)P糖蛋白(P-gp)的MDR胃癌細(xì)胞SGC7901/VCR為模型,研究WTX對(duì)P-gp表達(dá)水平的影響。3.初步研究WTX調(diào)控P-gp表達(dá)的機(jī)制,并研究WTX對(duì)耐藥胃癌細(xì)胞SGC7901/VCR的影響。方法1.按生存時(shí)間的不同分為預(yù)后良好組(生存期5年)和預(yù)后不良組(2年內(nèi)因腫瘤進(jìn)展死亡),分別取腫瘤和正常組織石蠟切片進(jìn)行免疫組化染色。檢測(cè)WTX、β-catenin和P-gp在不同生存期胃癌患者腫瘤組織中的表達(dá)情況及其之間的相關(guān)性。建立Logistic回歸模型,分析影響胃癌預(yù)后的相關(guān)因素。2.構(gòu)建過(guò)表達(dá)WTX的慢病毒載體,觀察綠色熒光蛋白表達(dá)情況,qPCR檢測(cè)WTX mRNA表達(dá)水平。qPCR檢測(cè)分析WTX、mdr-1、MRP-1、BCRP在SGC7901和SGC7901/VCR細(xì)胞的表達(dá)情況。將SGC7901/VCR細(xì)胞分為細(xì)胞對(duì)照組(CON組)、陰性對(duì)照組(NC組)和WTX過(guò)表達(dá)組(OE組)。慢病毒感染SGC7901/VCR, qPCR和Western blot檢測(cè)過(guò)表達(dá)WTX后SGC7901/VCR細(xì)胞中P-gp的表達(dá)情況。3. SGC7901/VCR細(xì)胞分組后感染慢病毒,qPCR檢測(cè)過(guò)表達(dá)WTX前后β-catenin、TCF4、CBP、p300、TP53、MDM2、NF-κB、E-cadherin、c-myc和cyclinD1的變化,初步探討WTX對(duì)P-gp的調(diào)控機(jī)制。同時(shí)研究WTX對(duì)MDR胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響：流式細(xì)胞Annexin V/PI染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡率;CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性并繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線：流式細(xì)胞測(cè)定細(xì)胞周期。結(jié)果1.預(yù)后良好組中WTX表達(dá)水平高于預(yù)后不良組,而β-catenin和P-gp表達(dá)水平低于預(yù)后不良組。相關(guān)性分析顯：WTX表達(dá)水平與β-catenin和P-gp表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)關(guān)系,而β-catenin和P-gp表達(dá)水平間為正相關(guān)關(guān)系。通過(guò)建立Logistic回歸模型,由通過(guò)檢驗(yàn)可以得到如下變量：年齡、TMN分期、WTX評(píng)分、β-catenin評(píng)分和P-gp評(píng)分。結(jié)果如下：(1)年齡：年齡(1)和年齡(2)表示以青年組(40歲)為參照,分別用中年組(≥40歲—60歲)和老年組(≥60歲)與青年組相比較。結(jié)果顯示B值為負(fù)數(shù),且Exp(B)1,年齡因素和預(yù)后呈負(fù)相關(guān)關(guān)系,即年輕的患者預(yù)后較老年患者差。(2)TNM分期：B值為正數(shù),且Exp (B)1,顯示TNM分期和疾病預(yù)后呈正相關(guān)關(guān)系,即TNM分期增加,則預(yù)后不良。OR=12.76,95%置信區(qū)間為：1.119-145.435。(3)WTX評(píng)分：B值為負(fù)數(shù),且Exp (B)1,WTX評(píng)分與預(yù)后呈負(fù)相關(guān)關(guān)系,即評(píng)分越高,預(yù)后越好。(4) β-catenin評(píng)分：B值為正數(shù),且Exp (B)1, β-catenin評(píng)分與預(yù)后呈正相關(guān)關(guān)系,即評(píng)分越高,預(yù)后越差。OR=12.872,95%置信區(qū)間為：1.524-108.72。(5)P-gp評(píng)分：B值為正數(shù),且Exp (B)1, P-gp評(píng)分與預(yù)后呈正相關(guān)關(guān)系,即評(píng)分越高,預(yù)后越差。2.成功構(gòu)建WTX慢病毒表達(dá)載體,qPCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)SGC7901和SGC7901/VCR中WTX均為低表達(dá);P-gp在SGC7901中低表達(dá)而在SGC7901/VCR中高表達(dá)；MRP-1和BCRP在SGC7901和SGC7901/VCR中均為高表達(dá)。qPCR檢測(cè)SGC7901/VCR感染慢病毒后,WTX mRNA升高了108.9倍,成功過(guò)表達(dá)WTX; qPCR和Western blot檢測(cè)過(guò)表達(dá)WTX后mdr-1 mRNA和P-gp蛋白表達(dá)均下調(diào)。3. qPCR檢測(cè)過(guò)表達(dá)WTX后：TCF4、p300和NF-κB的mRNA表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；僅c-myc表達(dá)下調(diào)(P0.05); β-catenin、CBP、 TP53、MDM2、E-cadherin和cyclinD1均為上調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。提示W(wǎng)TX可能通過(guò)p53途徑調(diào)控P-gp,且WTX抑制c-myc表達(dá),并對(duì)細(xì)胞間粘附和細(xì)胞周期產(chǎn)生影響。流式細(xì)胞檢測(cè)未發(fā)現(xiàn)細(xì)胞出現(xiàn)明顯凋亡；CCK8法檢測(cè)SGC7901/VCR細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)WTX后SGC7901/VCR細(xì)胞增殖受到抑制；進(jìn)一步用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示細(xì)胞周期阻滯于S期。結(jié)論1. WTX、β-catenin和P-gp表達(dá)水平均與胃癌預(yù)后相關(guān)：WTX表達(dá)水平與胃癌預(yù)后呈負(fù)相關(guān)關(guān)系,而β-catenin和P-gp表達(dá)水平與胃癌預(yù)后呈正相關(guān)關(guān)系。年齡、TMN分期、WTX評(píng)分、β-catenin評(píng)分和P-gp評(píng)分是影響胃癌預(yù)后的因素。2. SGC7901/VCR細(xì)胞高表達(dá)P-gp,是研究P-gp介導(dǎo)的MDR的良好模型。過(guò)表達(dá)WTX可以降低SGC7901/VCR細(xì)胞P-gp的mRNA和蛋白表達(dá)水平。3.WTX可能通過(guò)p53途徑調(diào)控P-gp,抑制c-myc表達(dá),并對(duì)細(xì)胞間粘附和細(xì)胞周期產(chǎn)生影響。過(guò)表達(dá)WTX后未出現(xiàn)明顯的SGC7901/VCR細(xì)胞凋亡是通過(guò)誘導(dǎo)S期阻滯抑制細(xì)胞增殖。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.2

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本文編號(hào)：1724404