發(fā)布時(shí)間：2018-04-06 04:01

  本文選題：肝細(xì)胞癌　切入點(diǎn)：5-氟尿嘧啶　出處：《西北大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是一種世界性的惡性腫瘤,其發(fā)病率隨著環(huán)境和生活方式的改變而逐年增高。針對(duì)肝癌晚期患者,化學(xué)療法是一種有效的治療手段。而5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)作為首選的一線化療藥物之一,常在臨床上被用于治療肝癌晚期患者。但是,在長期使用的過程中,患者易對(duì)5-氟尿嘧啶等常規(guī)化療藥物產(chǎn)生耐藥性,從而導(dǎo)致治療效果減弱甚至失效�，F(xiàn)階段對(duì)于5-氟尿嘧啶在肝癌中的耐藥機(jī)制仍不完全清楚。本實(shí)驗(yàn)旨在篩選出與5-氟尿嘧啶的耐藥機(jī)制密切相關(guān)的基因和信號(hào)通路。我們使用濃度梯度遞增的方法藥物誘導(dǎo)人肝癌HepG2細(xì)胞,再通過有限稀釋法得到了由單細(xì)胞衍生而來的兩種細(xì)胞株,分別為HepG2敏感細(xì)胞株和HepG2/5-FU耐藥細(xì)胞株。利用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序(Transcriptome Sequencing,RNA-Seq)技術(shù),我們得到了這兩個(gè)細(xì)胞株樣品的轉(zhuǎn)錄組信息(總共檢測(cè)了 21409個(gè)基因),隨后分析了這兩個(gè)樣本中的基因表達(dá)量,并篩選出641個(gè)差異表達(dá)基因(differentially expressed genes,DEGs),包含350個(gè)上調(diào)基因和291個(gè)下調(diào)基因。在完成對(duì)基因的功能注釋和富集分析之后,我們發(fā)現(xiàn),共有13個(gè)差異表達(dá)基因被富集到了 Wnt信號(hào)通路,其中三個(gè)基因具有上下游關(guān)系且其表達(dá)差異符合預(yù)期,它們分別為 Wnt 通路抑制因子 1(dickkopf WNT signaling pathway inhibitor 1,DKK1)、卷曲受體 10(frizzled class receptor 10,FZD10)、和人散亂蛋白 1(dishevelled segment polarity protein 1,DVL1)。隨后,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(q-PCR)驗(yàn)證了測(cè)序結(jié)果的可靠性以及三個(gè)Wnt信號(hào)(DKK1、FZD10和DVL1)的表達(dá)差異。最后,利用siRNA干擾技術(shù)驗(yàn)證了這三個(gè)Wnt信號(hào)與HepG2細(xì)胞5-FU耐藥之間的關(guān)聯(lián)。在本研究中,我們篩選出三個(gè)新的生物標(biāo)志物(DKK1、FZD10和DVL1)(位于Wnt信號(hào)通路中),其表達(dá)調(diào)控與肝癌5-FU耐藥性密切相關(guān)。研究表明,Wnt信號(hào)通路在肝癌5-FU耐藥性的形成過程中可能起到了重要的作用,這為肝癌耐藥患者的個(gè)體化治療提供了一個(gè)潛在靶點(diǎn)。
[Abstract]:Hepatocellular carcinoma (HCC) is a worldwide malignant tumor. The incidence of HCC increases year by year with the change of environment and lifestyle.Chemotherapy is an effective treatment for advanced liver cancer patients.5-Fluorouraciline 5-FU (5-Fluorouraciline 5-FU), as one of the first-line chemotherapeutic drugs, is often used in the treatment of advanced liver cancer patients.However, in the long-term use, patients tend to develop drug resistance to 5-fluorouracil and other conventional chemotherapeutic drugs, resulting in weakened or even ineffective treatment.At present, the mechanism of 5-fluorouracil resistance in hepatocellular carcinoma is not fully understood.The aim of this study was to screen genes and signaling pathways closely related to the resistance mechanism of 5-fluorouracil.We used the method of increasing concentration gradient to induce human hepatoma HepG2 cells. Then we obtained two kinds of cell lines derived from single cell by finite dilution method: HepG2 sensitive cell line and HepG2/5-FU drug resistant cell line.Using transcriptome sequencing RNA-Seq-based technique, we obtained transcriptome sequencing RNA-Seq-based information for the two cell lines (21409 gene loci were detected, and then the amount of gene expression in the two samples was analyzed.A total of 641 differentially expressed genes were screened, including 350 up-regulated genes and 291 down-regulated genes.After functional annotation and enrichment analysis, we found that 13 differentially expressed genes were enriched into the Wnt signaling pathway.They are 1(dickkopf WNT signaling pathway inhibitor 1 (DKK1), 10(frizzled class receptor 10 (FZD10), and 1(dishevelled segment polarity protein 1 (DVL1), respectively.The reliability of the sequencing results and the differences in the expression of three Wnt signals DKK1FZD10 and DVL1) were verified by real-time fluorescence quantitative PCRQ-PCR.Finally, siRNA interference technique was used to verify the correlation between the three Wnt signals and 5-FU resistance in HepG2 cells.In this study, we screened out three new biomarkers, DKK1FZD10 and DVL1 (located in the Wnt signaling pathway), whose expression regulation is closely related to 5-FU resistance in HCC.It is suggested that the Wnt signaling pathway may play an important role in the formation of 5-FU resistance in hepatocellular carcinoma, which provides a potential target for individualized treatment of drug-resistant HCC patients.
【學(xué)位授予單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.7

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