本文選題：miR-155-5p　切入點：uc.160　出處：《揚(yáng)州大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：[目的]胃癌是我國最常見的惡性腫瘤之一,其早期診斷和治療并不理想。我們前期研究提示miR-155-5p在胃癌中的表達(dá)顯著降低,通過生物信息學(xué)檢索我們還發(fā)現(xiàn)超保守RNAuc.160與miR-155-5p在序列上存在互補(bǔ)序列,而uc.160在胃癌中的表達(dá)情況及其功能尚未知曉,因此本研究主要明確uc.160和miR-155-5p在胃癌中的表達(dá)是否存在差異和兩者在胃癌發(fā)生發(fā)展中的功能以及它們之間的相互關(guān)系。[方法]1、首先,運(yùn)用RT-PCR的實驗方法檢測胃癌細(xì)胞系和正常胃黏膜上皮細(xì)胞系中miR-155-5p和uc.160的表達(dá)。2、構(gòu)建miR-155-5p和uc.160的逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)質(zhì)粒。分別瞬時轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞,使miR-155-5p和uc.160在胃癌細(xì)胞系中過表達(dá)。運(yùn)用RT-PCR的實驗方法檢測高表達(dá)miR-155-5p的胃癌細(xì)胞系中uc.160表達(dá)的變化。同時檢測過表達(dá)uc.160的胃癌細(xì)胞系中miR-155-5p的表達(dá)。3、生物信息學(xué)方法檢索出uc.160基因組序列中含有若干miR-155-5p的結(jié)合位點,這些結(jié)合位點分別位于uc.160的成熟序列及其基因組序列中。選取3段含有miR-155-5p結(jié)合位點和1段不含miR-155-5p結(jié)合位點的uc.160序列,分別將之克隆至熒光素酶報告基因質(zhì)粒的3’端。將miR-155-5p表達(dá)質(zhì)粒與重組熒光素酶報告基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞,雙熒光素酶報告基因檢測方法檢測miR-155-5p對含有uc.160序列的熒光素酶報告基因的調(diào)節(jié)作用。4、通過體外、體內(nèi)實驗了解miR-155-5p和uc.160分別對胃癌細(xì)胞增殖、凋亡的影響。體外實驗：胃癌細(xì)胞分別過表達(dá)miR-155-5p和uc.160后,通過流式細(xì)胞儀動態(tài)檢測GFP陽性細(xì)胞數(shù)目、通過細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)動態(tài)計數(shù)細(xì)胞增殖數(shù)目；胃癌細(xì)胞分別過表達(dá)miR-155-5p和uc.160后,流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞凋亡情況。體內(nèi)實驗：胃癌細(xì)胞分別過表達(dá)miR-155-5p和uc.160后,接種于SCID小鼠皮下,觀察每組小鼠成瘤情況。[結(jié)果]1、胃癌細(xì)胞(7901、AGS、803)中miR-155-5p 的表達(dá)低于正常胃粘膜上皮細(xì)胞中的表達(dá),而uc.160在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)高于正常胃黏膜上皮細(xì)胞中的表達(dá)。2、胃癌細(xì)胞過表達(dá)miR-155-5p后,uc.160的表達(dá)明顯降低,而過表達(dá)uc.160后測miR-155-5p的表達(dá)改變不大。3、雙熒光素酶報告基因檢測顯示含有miR-155-5p結(jié)合位點的uc.160序列與沒有結(jié)合位點的序列相比,熒光素酶報告基因活性顯著降低。4、miR-155-5p和uc.160對胃癌細(xì)胞生長情況的影響。在胃癌細(xì)胞(7901、AGS、803)細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-155-5p后2天、4天、6天及8天,利用流式細(xì)胞技術(shù)檢測GFP陽性細(xì)胞數(shù)目,由于所轉(zhuǎn)染的miR-155-5p表達(dá)載體上均帶有GFP基因,因此GFP陽性細(xì)胞數(shù)目的增多或減少反應(yīng)外源表達(dá)基因?qū)?xì)胞的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)過表達(dá)miR-155-5p導(dǎo)致胃癌細(xì)胞數(shù)目呈減少趨勢。同時細(xì)胞計數(shù)也反應(yīng)過表達(dá)miR-155-5p后癌細(xì)胞的增長比沒有過表達(dá)的癌細(xì)胞增長慢。而過表達(dá)uc.160后癌細(xì)胞的增長也變慢。5、miR-155-5p和uc.160對胃癌細(xì)胞凋亡情況的影響。在胃癌7901細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-155-5p或uc.160在轉(zhuǎn)染后48小時,測得細(xì)胞早期凋亡百分?jǐn)?shù)增加。6、miR-155-5p和uc.160對小鼠成瘤的影響。四組小鼠(每組四只)分別皮下種入106個胃癌7901細(xì)胞、7901-MSCV-pig細(xì)胞、7901-miR-155-5p細(xì)胞、7901-uc.160細(xì)胞,一個月后7901細(xì)胞組小鼠最先成瘤,接著7901-MSCV-pig細(xì)胞組小鼠成瘤,最后7901-miR-155-5p細(xì)胞、7901-uc.160細(xì)胞組小鼠陸續(xù)成瘤,而最后兩組小鼠不僅瘤小而且各有一只小鼠未成瘤。[結(jié)論]miR-155-5p和uc.160基因通過交互作用發(fā)揮抑制胃癌細(xì)胞生長增殖的抗癌作用。
[Abstract]:The expression of miR - 155 - 5p and miR - 155 - 5p in gastric cancer cells was detected by RT - PCR .
The expression of miR - 155 - 5p and uc.160 in gastric cancer cells was significantly lower than that in normal gastric mucosa .

【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2

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1 龐磊;超保守RNA uc.160與miR-155-5p在胃癌中的表達(dá)及相互關(guān)系研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2015年

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本文編號：1716722