本文選題：嗜鉻細(xì)胞瘤　切入點(diǎn)：信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子3(STAT3)　出處：《上海交通大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：目的:研究HSP90在良惡性嗜鉻細(xì)胞瘤中表達(dá)情況,觀察其抑制劑17-AAG和Ganetespib對(duì)大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤PC12細(xì)胞系的細(xì)胞增殖、凋亡及VEGF、HSP90、STAT3蛋白表達(dá)的影響;建立裸鼠嗜鉻細(xì)胞瘤移植瘤模型,研究HSP90抑制劑17-AAG和Ganetespib對(duì)其作用;探討HSP90抑制劑17-AAG和Ganetespib對(duì)嗜鉻細(xì)胞瘤治療的作用及分子機(jī)制。方法:免疫組織化學(xué)、Western Blot檢測(cè)HSP90在良、惡性嗜鉻細(xì)胞瘤中的表達(dá)情況。不同濃度梯度的17-AAG和Ganetespib處理PC12細(xì)胞12h、24 h和48 h后采用MTT方法檢測(cè)HSP90抑制劑17-AAG和Ganetespib對(duì)PC12細(xì)胞增殖能力的影響。應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同濃度的HSP90抑制劑17-AAG和Ganetespib處理后對(duì)PC12細(xì)胞凋亡的影響,及不同濃度Ganetespib處理后對(duì)PC12細(xì)胞周期的影響。Western blot檢測(cè)不同濃度的HSP90抑制劑Ganetespib處理對(duì)PC12細(xì)胞VEGF、HSP90、STAT3蛋白表達(dá)水平的影響。建立裸鼠嗜鉻細(xì)胞瘤移植瘤模型,通過(guò)測(cè)量裸鼠移植瘤體積和重量,病理學(xué)方法檢測(cè)腫瘤形態(tài),免疫組織化學(xué)、Western blot檢測(cè)腫瘤組織中HSP90、STAT3和ERBB2的表達(dá),研究17-AAG、Ganetespib對(duì)腫瘤的影響。結(jié)果:HSP90在惡性嗜鉻細(xì)胞瘤中的蛋白表達(dá)水平高于良性嗜鉻細(xì)胞瘤,而正常腎上腺髓質(zhì)組織中HSP90表達(dá)水平最低,三組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。17-AAG、Ganetespib對(duì)PC12細(xì)胞均有明顯的抑制增殖作用,并呈現(xiàn)劑量與時(shí)間的依賴(lài)性,其中17-AAG的半數(shù)抑制濃度(IC50)為0.05μmol/L。17-AAG可以有效促進(jìn)PC12細(xì)胞的凋亡,且具有時(shí)效關(guān)系;Ganetespib可以促進(jìn)PC12細(xì)胞凋亡,使其細(xì)胞周期阻滯,且具有劑量相關(guān)性。Ganetespib作用于PC12細(xì)胞24h后,可使HSP90、VEGF及STAT3蛋白表達(dá)明顯減少。成功建立裸鼠嗜鉻細(xì)胞瘤移植瘤模型,實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)17-AAG組、Ganetespib組與對(duì)照組比較,用藥組瘤體較小,差異明顯;處死裸鼠,取出腫瘤并稱(chēng)重,17-AAG組瘤體重3.29±0.57g,明顯低于對(duì)照組7.94±1.20g,抑瘤率為58.6%。結(jié)論:HSP90表達(dá)水平與惡性嗜鉻細(xì)胞瘤的生物學(xué)行為有關(guān),HSP90抑制劑17-AAG、Ganetespib能夠抑制移植瘤中HSP90、VEGF及STAT3的表達(dá),進(jìn)而抑制腫瘤的生長(zhǎng),通過(guò)靶向抑制HSP90可能有助于對(duì)晚期惡性嗜鉻細(xì)胞瘤的治療,從而提高患者生存時(shí)間,但這需要大樣本的臨床試驗(yàn)來(lái)證明。本研究可為HSP90抑制劑在后期的臨床應(yīng)用研究中提供一定的參考,為惡性嗜鉻細(xì)胞瘤的分子靶向治療提供新的方法和思路。目的通過(guò)應(yīng)用哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)抑制劑依維莫司于大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤PC12細(xì)胞系裸鼠移植瘤,并觀察其對(duì)移植瘤生長(zhǎng)及裸鼠生存的影響,進(jìn)一步探討依維莫司對(duì)嗜鉻細(xì)胞瘤腫瘤生長(zhǎng)及抑制血管生成的作用及其機(jī)制,為嗜鉻細(xì)胞瘤分子靶向治療提供指導(dǎo)。方法將大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤PC12接種于裸鼠腋窩皮下,2周后待移植瘤體積增加至合適大小,并將荷瘤裸鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和治療組,對(duì)照組給予生理鹽水灌胃10mg/kg,實(shí)驗(yàn)組給予依維莫司灌胃5mg/kg,處理四周后分別測(cè)量腫瘤的體積及生存時(shí)間;取腫瘤標(biāo)本后分別通過(guò)免疫組化及Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)腫瘤組織中信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子3(STAT3)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的表達(dá)水平。結(jié)果對(duì)照組裸鼠的平均生存時(shí)間為(25.3±2.4)天,實(shí)驗(yàn)組則為(37.8±4.6)天,并用Kaplan-Meier,Log-Rank方法分析并檢測(cè)兩組生存差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);對(duì)照組裸鼠移植瘤平均體積為(4340.67±794.07)mm3,實(shí)驗(yàn)組體積則為(1506.01±352.69)mm3,兩組移植瘤體積亦具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論m TOR抑制劑依維莫司可以明顯抑制裸鼠腫瘤體積增加,并改善生存預(yù)后,而同時(shí)可以降低腫瘤組織中STAT3和VEGF的表達(dá)水平;提示未來(lái)依維莫司可以作為嗜鉻細(xì)胞瘤的分子靶向治療藥物。目的:探討胰島素樣生長(zhǎng)因子-2(IGF-2)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子-3(signal transducers and activators of transcription,STAT3)在腎上腺皮質(zhì)癌(ACC)中的表達(dá)及其臨床意義,并用CD34標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞,定量檢測(cè)微血管密度(microvessel density,MVD)的表達(dá),結(jié)合臨床資料,探討它們?cè)谀I上腺皮質(zhì)腫瘤發(fā)生、發(fā)展及血管形成中的意義。方法:選取上海瑞金醫(yī)院1986年到2010年間手術(shù)切除且有完整臨床和病理資料的腎上腺皮質(zhì)腫瘤標(biāo)本44例,將標(biāo)本分為良性腎上腺皮質(zhì)腺瘤(良性組)20例,ACC(惡性組)24例。免疫組化標(biāo)記采用間接法,En Vision TM+檢測(cè)系統(tǒng)。IGF-2和STAT3采用半定量計(jì)數(shù)法進(jìn)行評(píng)分,以細(xì)胞染色強(qiáng)度和染色細(xì)胞所占比例兩種指標(biāo)的積分之和作為判斷陽(yáng)性或陰性的依據(jù),若兩種積分之和大于3分則表達(dá)為陽(yáng)性,小于或等于3分則為陰性。腫瘤內(nèi)MVD計(jì)數(shù):在低倍物鏡下選取高血管密度區(qū),之后在高倍鏡(×400)下計(jì)數(shù)3個(gè)視野內(nèi)被CD34染成棕黃色的血管數(shù),取其平均值作為該例腫瘤的MVD值。比較并分析良、惡性腎上腺皮質(zhì)腫瘤組織之間IGF-2和STAT3的高、低表達(dá)率及MVD的區(qū)別。結(jié)果:免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示,STAT3在ACC組中的表達(dá)為79.17%(19/24),良性組中為20.00%(4/20),兩者之間有極顯著性差異(P0.001);IGF-2在ACC組中呈高表達(dá)(17/24,70.83%),在良性組中表達(dá)較低(5/20,25.00%),IGF-2在ACC組中的表達(dá)與在良性組中的表達(dá)有顯著性差異(P=0.002)。MVD在ACC組中的表達(dá)為(84.70±12.44),良性組中為(21.05±8.07),兩者之間有顯著性差異(P0.001)。Spearman等級(jí)相關(guān)性分析顯示,STAT3的表達(dá)與MVD呈正相關(guān)(rs=0.832,P0.001),IGF-2的表達(dá)與MVD也呈正相關(guān)(rs=0.703,P=0.001)。結(jié)論:IGF-2和STAT3在腎上腺皮質(zhì)癌組織中的蛋白表達(dá)高于腎上腺皮質(zhì)腺瘤組織,且IGF-2和STAT3的表達(dá)與MVD間呈正相關(guān),提示IGF-2和STAT3在腎上腺皮質(zhì)癌的血管形成和腫瘤生長(zhǎng)中起重要作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R736.6

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