本文選題：PX-478　切入點：HIF-1α　出處：《浙江大學》2016年博士論文

【摘要】：目的：口腔鱗癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC)是頭頸部最常見的惡性腫瘤之一。以局部侵襲性為特征的腫瘤,高表達缺氧水平。腫瘤性缺氧直接依賴于缺氧誘導因子(HIF)。腫瘤缺氧和代謝密切相關,由于O-糖基化功能上的重要性,目前是腫瘤代謝重要的研究熱點。通過口腔鱗癌組織和細胞學的研究,初步探討O-糖基化和口腔鱗狀細胞癌關系。通過舌鱗癌細胞株Tca8113探討抑制自噬對口腔鱗狀細胞癌O-糖基化的影響。描述缺氧誘導因子HIF-1α的基本生物學特性和口腔鱗狀細胞癌自噬對糖基化的影響,通過對癌細胞進行缺氧抑制劑誘導的糖基化的調節(jié),探索其在口腔鱗狀上皮癌中的自噬作用。以及評估其作為藥物治療靶點的可能途徑。方法：1.對30例口腔鱗狀細胞癌和10例正�？谇火つそM織,采用免疫組織化學SP法檢測O位N-乙酰葡萄糖胺(O-linked N-acetylglucosamine, O-GlcNAc)、N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶(O-GlcNAc transferase, OGT)和N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(O-GlcNAcase, OGA)的表達。2.人體Tca8113細胞株用免疫熒光檢測在糖基化增強劑(transglycosylation,TG)和糖基化抑制劑(deoxynorleucine, DON)作用下舌鱗狀細胞癌TCA8113細胞的增殖。3.小干擾RNA (siRNA)轉染阻斷人體ATG12和ATGl。檢測HIF-1α抑制劑PX-478作用下糖基化相關蛋白表達。4.采用蛋白免疫印跡方法,來檢測自噬和糖基化相關的蛋白表達。結果：1. O-GlcNAc和OGT在正�？谇火つそM織和口腔鱗癌組織中存在表達顯著性差異(P0.05),并且隨著腫瘤惡性程度的增高,呈現(xiàn)表達升高的趨勢。OGA的表達和O-GlcNAc、OGT均不同,從正常組織到鱗癌中表達呈增高趨勢,但在不同分化鱗癌組內表達差異不明顯。TG可促進TCA8113的增殖和O-GlcNAc、OGT的表達,DON可抑制TCA8113的增殖和O-GlcNAc、OGT的表達。2. Atg12 siRNA和Atg1 siRNA導致LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的轉化減少。在經過Atg12 siRNA和Atg1 siRNA轉染Tca8113, ATG12和ATG1阻斷的作用下,O-GlcNAc與OGT的蛋白表達增高,顯示抑制自噬可以引起O-GlcNAc與OGT蛋白在Tca8113細胞的聚積。3.在PX-478處理過的Tca8113細胞中,O-GlcNAc糖基化現(xiàn)象具有多樣化。HIF-1α抑制劑PX-478處理過的Tca8113細胞中O-GlcNAc表達降低,而OGT表達減少,OGA表達增加。PX-478對OGT和OGA的表達作用結果相反,而O-GlcNAc的表達趨勢與OGT相似。PX-478處理4-16個小時內Tca8113細胞的OGT含量逐漸減少。4.自噬反應的誘導引起了LC3-Ⅰ的轉換,在Atg12-Atg5-Atg16L復合體的作用下生產出自殺式的LC3-Ⅱ。當自噬反應被HIF-1α抑制劑PX-478(0,5,和251μM)處理后減少了,LC3-Ⅱ和LC3-Ⅰ的數(shù)量也降低。自噬小體隨PX-478劑量的提升而減少。結果提示阻斷HIF-1α可以減少自噬現(xiàn)象的發(fā)生。5.為了明確自噬反應和HIF-1α是否參與調節(jié)糖基化,由于O-G1cNAc的表達與OGT相關,本實驗在自噬和HIF-1α抑制同時進行的過程中檢測OGT的蛋白水.平。在Atg12和Atgl siRNA以及PX-478處理后,OGT的表達在0,8,16,24,36和48小時內的波動在最初的24小時內有一定減少,然后緩慢上升。因此,我們認為OGT蛋白表達的不穩(wěn)定性在最后階段主要是由于自噬作用的影響,其次是因為開始階段HIF-1κ的抑制。免疫熒光顯示LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ在48小時內完全被抑制。結論：1.O-糖基化在口腔鱗狀細胞癌中表達增高,在舌鱗癌細胞系中活化,抑制劑DON可抑制腫瘤細胞增殖。2. HIF-1α抑制劑PX-478導致LC3-Ⅱ和LC3-Ⅰ在Tca8113細胞中數(shù)量的減少,同時,降低了O-GlcNAC和OGT在癌細胞中的表達,提高了OGA的表達。O-GlcNAC的下降趨勢與OGT相似。3.O-GlcNAC和OGT的蛋白水平在ATG12和ATG1消耗下提高。4.OGT的表達在Atg12和Atgl siRNA的處理后和PX-478波動下先下降后緩慢升高。當HEF-1α信號通道被阻斷后,細胞自噬影響OGT的穩(wěn)定性。5.自噬現(xiàn)象受缺氧抑制的影響而減少。HIF-1α抑制劑減少了癌細胞的糖基化形成。在HIF-1α信號通路阻斷后,OGT蛋白由于自噬現(xiàn)象的消失而不穩(wěn)定。
[Abstract]:Objective : Oral squamous cell carcinoma ( OSCC ) is one of the most common malignant tumors in the head and neck . The effect of autophagy on O - glycosylation in oral squamous cell carcinoma is studied by means of immunohistochemistry SP method . There was a significant difference in the expression of O - and OGT in normal oral mucosal tissues and oral squamous cell carcinoma ( P0.05 ) . The expression of OGA was different from normal tissues to squamous cell carcinoma . The expression of OGT in Tca8113 cells treated with Atg12 siRNA and Atg1 siRNA decreased . The expression of OGT and OGT decreased after the treatment of Atg12 and Atgl siRNA and decreased in the presence of ATG12 and ATG1 .

【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R739.85

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本文編號：1712849