本文選題：PIK3R3　切入點(diǎn)：HER2　出處：《華中科技大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：目的：研究PIK3R3在HER2陽性乳腺癌和胃癌的Trastuzumab耐藥中作用。方法：首先,我們利用在線數(shù)據(jù)庫,包括癌癥基因組圖譜(The Cancer Genome Atlas,TCGA),分析PIK3R3與乳腺癌、胃癌的臨床病理關(guān)系。然后,通過對Trastuzumab敏感乳腺癌細(xì)胞系(BT474, SKBR3)和胃癌細(xì)胞系(NCI-N87)進(jìn)行長時間(6個月)的Trastuzumab處理,分別得到對Trastuzumab耐藥的細(xì)胞系(BT474-R, SKBR3-R, NCI-N87-R)。分析Trastuzumab敏感細(xì)胞系及耐藥細(xì)胞系中PIK3R3的表達(dá)情況。進(jìn)一步在Trastuzumab敏感細(xì)胞系中高表達(dá)PIK3R3,在體外以及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中觀察PIK3R3對Trastuzumab耐藥的影響。最后,在Trastuzumab耐藥細(xì)胞系中低表達(dá)PIK3R3,觀察PIK3R3對Trastuzumab耐藥的影響。結(jié)果：第一,PIK3R3在HER2陽性乳腺癌患者中,PIK3R3的表達(dá)水平與患者預(yù)后以及無瘤生存期相關(guān)。第二,在Trastuzumab耐藥細(xì)胞系中PIK3R3水平相比對應(yīng)敏感細(xì)胞系高。第三,Trastuzumab敏感細(xì)胞系高表達(dá)PIK3R3后,對Trastuzumab敏感性降低。第四,Trastuzumab耐藥細(xì)胞系低表達(dá)PIK3R3后,能恢復(fù)對Trastuzumab治療的反應(yīng)。結(jié)論：PIK3R3表達(dá)水平與HER2陽性乳腺癌患者預(yù)后相關(guān)。PIK3R3在Trastuzumab耐藥患者以及細(xì)胞系中均高表達(dá)。PIK3R3高表達(dá)能促進(jìn)Trastuzumab耐藥。而在Trastuzumab耐藥細(xì)胞系中,低表達(dá)PIK3R3能恢復(fù)Trastuzumab敏感性。目的：研究PIK3R3在HER2陽性乳腺癌和胃癌中促進(jìn)Trastuzumab耐藥的具體機(jī)制。方法：首先,在Trastuzumab敏感細(xì)胞系中高表達(dá)PIK3R3以及在Trastuzumab耐藥細(xì)胞系低表達(dá)PIK3R3,檢測其耐藥相關(guān)下游信號通路(AKT和STAT3)的變化。并且在體外實(shí)驗(yàn)中高表達(dá)PIK3R3的同時通過特異性抑制劑或者特異性siRNA阻遏下游信號通路,觀察相關(guān)信號通路對PIK3R3促Trastuzumab耐藥的影響。然后,在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,高表達(dá)PIK3R3同時加入相關(guān)信號通路的抑制劑治療,觀察加入抑制劑后對Trastuzumab治療的影響。結(jié)果：第一,高表達(dá)PIK3R3或者低表達(dá)后,發(fā)現(xiàn)對AKT磷酸化水平并無明顯影響,說明PIK3R3不能通過經(jīng)典PI3K-AKT通路影響Trastuzumab耐藥,但是發(fā)現(xiàn)PIK3R3能明顯影響STAT3的磷酸化水平。第二,高表達(dá)PIK3R3能激活 IL-6/STAT3炎性環(huán)路。第二二,在體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,高表達(dá)PIK3R3后加入STAT3抑制劑或者STAT3的特異性siRNA,能明顯消除PIK3R3引起的耐藥效應(yīng)。第四,PIK3R3能通過STAT3激活ERK信號通路,從而促進(jìn)Trastuzumab耐藥。結(jié)論：PIK3R3通過STAT3而不是AKT通路引起Trastuzumab耐藥,抑制STAT3通路能消除PIK3R3引起的耐藥效應(yīng)。目的：明確PIK3R3激活STAT3的具體機(jī)制和PIK3R3與STAT3之間的關(guān)系。方法：首先,通過免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation, IP)、免疫熒光共定位(Immunofluorescence colocalization,IFC)等方法探討PIK3R3與STAT3之間的關(guān)系。然后,用STAT3特異性小分子抑制STAT3活性,或者用siRNA低表達(dá)STAT3,檢測PIK3R3表達(dá)的變化。再構(gòu)建含PIK3R3啟動子區(qū)域的報告基因,明確STAT3的活性對于PIK3R3啟動子活性的影響。最后,利用染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)明確STAT3能直接作用于PIK3R3啟動子區(qū)域而調(diào)控PIK3R3的表達(dá)。結(jié)果：第一,PIK3R3能與STAT3直接結(jié)合,從而磷酸化STAT3而激活STAT3。第二,抑制STAT3活性,PIK3R3的mRNA水平和蛋白水平均下降,并且激活STAT3能促進(jìn)PIK3R3啟動子活性。第三,活化的STAT3能直接結(jié)合在PIK3R3的啟動子區(qū)域,從而直接調(diào)控PIK3R3的表達(dá)。結(jié)論:PIK3R3能通過直接結(jié)合而激活STAT3,反之,激活的STAT3能直接調(diào)控PIK3R3的表達(dá),因而PIK3R3與STAT3之間形成了正反饋調(diào)控環(huán)路。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of PI3R3 on the drug resistance of HER2 - positive breast cancer and gastric cancer . Methods : First , we used the online database , including the Cancer Genome Atlas ( TCGA ) , to analyze the clinical and pathological relationship between PI3R3 and breast cancer and gastric cancer . Then , the drug - resistant cell lines ( BT474 - R , SKBR3 - R , NCI - N87 - R ) were obtained by the Tradable treatment of Tragically sensitive breast cancer cell line ( BT474 , SKBR3 ) and gastric cancer cell line ( NCI - N87 ) for a long time ( 6 months ) . In vitro and in vivo experiments , the expression level of PI3R3 was significantly higher than that in patients with HER2 positive breast cancer . Conclusion : First , PI3R3 can directly bind to the promoter region of PI3R3 to regulate the expression of PI3R3 . Conclusion : The PI3R3 can directly bind to the promoter region of PI3R3 to regulate the expression of PI3R3 .

【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9;R735.2

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本文編號：1710445