本文選題：膠質(zhì)瘤　切入點：轉(zhuǎn)錄共激活因子　出處：《西南大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：神經(jīng)膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的和致命原發(fā)性腫瘤,約占中樞神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤的80%。根據(jù)生長速度和對鄰近腦組織的浸潤程度,膠質(zhì)瘤可分為低級別(世界衛(wèi)生組織(WHO)I級和II級),以及高級別(WHO III級和IV級)[3]。即使經(jīng)過目前最有效的治療方法如手術(shù)、放療、聯(lián)合化療等治療后,高級別膠質(zhì)瘤病人的中位生存期仍不容樂觀(14.6個月)。這可能是由于膠質(zhì)瘤的具體特性,如高度浸潤性和缺乏明確的邊界等引起的。此外,血腦屏障(BBB)的物理和化學(xué)約束也是膠質(zhì)瘤綜合治療的主要障礙。因此,研究惡性膠質(zhì)瘤形成的分子機制,尋找惡性膠質(zhì)瘤新的藥物靶點是迫切需要的。轉(zhuǎn)錄共激活因子TAZ是哺乳動物Hippo通路下游最主要的效應(yīng)因子之一,包含400個氨基酸,其結(jié)構(gòu)由一個TEAD結(jié)合區(qū)域(TB),一個WW區(qū)域,一個卷曲螺旋結(jié)構(gòu),一個轉(zhuǎn)錄激活區(qū)域,以及C端的一個PDZ結(jié)合模序組成。TAZ參與其下游靶因子的轉(zhuǎn)錄共激活過程,調(diào)控細(xì)胞的增殖、凋亡以及遷移等多種生理過程。近年來研究發(fā)現(xiàn),在胃癌、非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌及神經(jīng)母細(xì)胞瘤等多種惡性腫瘤中TAZ的表達(dá)均高于正常癌旁組織。腫瘤細(xì)胞的惡性增殖往往和細(xì)胞周期進(jìn)程的改變密切相關(guān),EGFR信號通路在此過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。EGFR屬于ErbB受體家族,在哺乳動物上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞等細(xì)胞表面均有廣泛分布,EGFR及其下游信號通路對細(xì)胞的生長、增殖和分化等過程至關(guān)重要。EGFR一經(jīng)磷酸化激活,其下游的PI3K/AKT和Ras-ERK通路隨即被激活,進(jìn)而加速細(xì)胞周期進(jìn)程。研究發(fā)現(xiàn),TAZ能夠通過促進(jìn)EGFR配體雙調(diào)蛋白(AREG)的表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞MCF10A不依賴于生長因子(EGF)增殖。但是,TAZ對于膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖的影響的研究還尚未有報道。本文旨在研究轉(zhuǎn)錄共激活因子TAZ對膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的影響及其可能的分子機制,通過實驗取得如下結(jié)果:1.TAZ對膠質(zhì)瘤的影響及表達(dá)分析我們通過查詢數(shù)據(jù)庫及基因芯片檢測TAZ與膠質(zhì)瘤病人預(yù)后的關(guān)系,及TAZ在不同級別的膠質(zhì)瘤中的表達(dá)情況,結(jié)果表明TAZ的表達(dá)情況與膠質(zhì)瘤病人的預(yù)后密切相關(guān),膠質(zhì)瘤級別越高,TAZ的表達(dá)量越高。利用Western blot技術(shù)檢測TAZ在多種不同膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中的表達(dá)情況,結(jié)果顯示TAZ在U251、LN229、U87、A172、U118及膠質(zhì)瘤組織中均有較高的表達(dá)。2.TAZ對惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖及腫瘤形成能力的影響采用慢病毒介導(dǎo)的shRNA干擾技術(shù)和穩(wěn)定質(zhì)粒表達(dá)技術(shù)在U87和LN229兩種膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中對TAZ蛋白進(jìn)行下調(diào)和上調(diào),利用MTT、Brdu技術(shù)檢測兩種細(xì)胞系的增殖情況,建立荷瘤小鼠模型和利用Soft Agar實驗檢測TAZ在體內(nèi)及體外成瘤及自我更新能力的影響。結(jié)果顯示細(xì)胞增殖實驗結(jié)果表明,細(xì)胞的增殖率與TAZ的表達(dá)量呈正相關(guān),TAZ下調(diào)后細(xì)胞的增殖受到抑制,在體內(nèi)及體外成瘤及自我更新能力也受到相應(yīng)的抑制,TAZ上調(diào)的結(jié)果恰好與此相反。3.TAZ對膠質(zhì)瘤細(xì)胞細(xì)胞周期的調(diào)控利用流式細(xì)胞儀檢測TAZ對細(xì)胞周期的調(diào)控,采用Western blot技術(shù)檢測相應(yīng)蛋白的表達(dá)量結(jié)果顯示TAZ下調(diào)的情況下細(xì)胞周期阻滯在G1期,相關(guān)周期蛋白CDK2和cyclin E2表達(dá)伴隨其下調(diào),TAZ上調(diào)的結(jié)果恰好與此相反。4.TAZ調(diào)控惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的機制研究采用Western blot技術(shù)檢測EGFR/AKT/ERK信號通路的變化情況,最后利用EGFR信號通路抑制劑阻斷由TAZ促進(jìn)的細(xì)胞增殖檢測膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖情況變化,結(jié)果顯示下調(diào)TAZ后相關(guān)的EGFR信號通路受到相應(yīng)的抑制,TAZ上調(diào)的結(jié)果恰好與此相反,EGFR信號通路抑制劑Eriotinib可以阻斷由TAZ過表達(dá)引起的相關(guān)反應(yīng),從而初步確定了TAZ是通過EGFR信號通路調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖與遷移的。
[Abstract]:Glioma is the most common central nervous system and fatal primary tumors, accounting for malignant tumors of central nervous system 80%. according to the growth rate and degree of infiltration of adjacent brain tissue and glioma can be divided into low level (the WHO (WHO) I and II), and WHO (high level III and IV [3].) even after the most effective treatment such as surgery, radiotherapy, chemotherapy and other treatment, the median survival time of patients with high grade gliomas is still not optimistic (14.6 months). This may be due to the specific characteristics of glioma, such as high degree of infiltration and the lack of clear boundaries as a result of the. In addition, the blood brain barrier (BBB) a major obstacle to the physical and chemical constraints are also comprehensive treatment of gliomas. Therefore, the research of molecular mechanism of malignant glioma formation of malignant glioma, looking for new drug targets is urgently needed. The transcriptional co activator TA Z is one of the most important effect factor downstream of the mammalian Hippo pathway, contains 400 amino acids, which is composed of a TEAD binding domain (TB), a WW region, a coiled coil structure, a transcriptional activation domain, transcription of a PDZ and C end binding motifs of.TAZ and its downstream target. The total factor activation, regulation of cell proliferation, migration and apoptosis of a variety of physiological processes. Recent studies have found that in gastric cancer, non-small cell lung cancer, breast cancer and neuroblastoma and other malignant tumors in TAZ were higher than that in normal adjacent tissues. The change is closely related to the malignant proliferation of tumor cells and often the process of cell cycle, EGFR signaling pathway in this process plays a crucial role in the.EGFR belongs to the family of ErbB receptors in mammalian epithelial cells, fibroblasts, glial cells, keratinocyte cell surface has wide The distribution, growth of EGFR and its downstream signaling pathway on cell proliferation and differentiation, and other critical.EGFR by phosphorylation, PI3K/AKT and its downstream Ras-ERK pathway was activated, thus speeding up the process of cell cycle. The study found that TAZ can promote EGFR ligands amphiregulin (AREG) expression, and promote MCF10A breast cancer cell growth factor independent proliferation (EGF). However, the effect of TAZ on glioma cell proliferation has not yet been reported. This paper aims to study the effect of CO transcriptional factor TAZ on the proliferation of glioma cells and its possible molecular mechanism. The results are as follows: through the experiment and the effect of 1.TAZ on the expression of glioma analysis we through the relationship between database query and gene chip detection of TAZ and the prognosis of patients with glioma, and expression of TAZ in gliomas of different grades of the results show that the TAZ The expression and prognosis of glioma patients is closely related to the higher level of glioma, the expression of TAZ was higher. The expression of blot using Western technology to detect TAZ in different glioma cell lines, the results showed that TAZ in U251, LN229, U87, A172, were down regulated and up-regulated, TAZ protein U87 and LN229 in two glioma cell lines affect the expression of U118 and glioma tissues showed higher expression of.2.TAZ forming ability on the proliferation of human glioma cells and tumor by lentivirus mediated shRNA interference and stable plasmid by MTT, the proliferation of Brdu technology for detection of two kinds of cell lines, the establishment of model tumor bearing mice and effects of tumor formation and self-renewal in vivo and in vitro by Soft Agar assay. The results showed that TAZ cell proliferation experiment results showed that the expression of TAZ and cell proliferation rate was positively related to the down-regulation of TAZ After the cell proliferation was inhibited in vitro and in vivo tumorigenicity and self-renewal capacity by corresponding suppression, upregulation of TAZ results are just the opposite regulation of.3.TAZ glioma cell cycle by flow cytometry TAZ the regulation of the cell cycle, the expression of the corresponding protein detection results showed that the amount of TAZ down under the condition of cell cycle arrest in G1 phase by Western blot, cyclin CDK2 and cyclin related with the down-regulation of E2 expression and mechanism of TAZ up regulation results are just the opposite of.4.TAZ regulating the proliferation of malignant glioma cell research using Western blot technology to detect the changes of EGFR/AKT/ERK signaling pathway, the EGFR pathway inhibitor blocked by TAZ promoted cell proliferation assay proliferation of glioma cells, results showed that the EGFR signaling pathway related to down-regulation of TAZ by the corresponding suppression In conclusion, the results of TAZ up regulation are just the opposite. EGFR signaling pathway inhibitor Eriotinib can block the related reactions induced by over expression of TAZ, thus initially determined that TAZ regulates the proliferation and migration of glioma cells through EGFR signaling pathway.

【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R739.4

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本文編號：1706124