發(fā)布時(shí)間：2018-04-03 13:58

  本文選題：胃腫瘤　切入點(diǎn)：microRNA-210　出處：《浙江大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：第一章 miR-210在胃癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理因素及預(yù)后的相關(guān)性研究目的：探討microRNA-210(miR-210)在胃癌(gastric cancer, GC)組織中的表達(dá)及其臨床意義。方法：檢測78例胃癌組織及相應(yīng)的癌旁組織中miR-210的表達(dá)情況,分析其與臨床病理因素及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果：實(shí)時(shí)定量PCR發(fā)現(xiàn),miR-210在胃癌組織中的表達(dá)高于癌旁組織,兩者相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。MiR-210的表達(dá)與腫瘤大小(P=0.022)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.018)和TNM分期(P=0.034)密切相關(guān)。MiR-210低表達(dá)患者5年生存率為48.2%,MiR-210高表達(dá)患者5年生存率為30.4%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.216,P=0.040)。結(jié)論：1.與癌旁組織比較,胃癌組織中miR-210的表達(dá)明顯增加,提示miR-210可能與胃癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。2.MiR-210表達(dá)水平與胃癌臨床分期及轉(zhuǎn)移潛能有關(guān),并可作為判斷預(yù)后的可靠指標(biāo)。第二部分 缺氧對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響及miR-210的作用研究目的：觀察缺氧狀態(tài)對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、侵襲能力及EMT過程的影響,研究miR-210在這一過程中的可能作用。方法：采用LipofectamineTM 2000轉(zhuǎn)染hsa-mir-210 inhibitor于胃癌細(xì)胞株中,敲低miR-210的表達(dá),實(shí)時(shí)定量PCR檢測常氧、缺氧及缺氧miR-210抑制狀態(tài)下胃癌細(xì)胞miR-210的表達(dá),MTT法、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)和western blot分別檢測細(xì)胞增殖、侵襲能力及EMT相關(guān)蛋白的變化。結(jié)果：與常氧組相比,缺氧組miR-210表達(dá)顯著上調(diào)(P0.05)；與缺氧組相比,缺氧抑制組miR-210的相對(duì)表達(dá)量顯著降低(P0.05). MTT法檢測細(xì)胞的生長抑制率,transwell檢測其侵襲能力,western blot檢測EMT相關(guān)蛋白表達(dá),發(fā)現(xiàn)與常氧組相比,缺氧組胃癌細(xì)胞相對(duì)存活率顯著升高,侵襲細(xì)胞數(shù)明顯增加(P0.05)；而通過miR-210 inhibitor抑制miR-210的表達(dá)后,胃癌細(xì)胞相對(duì)存活率顯著降低,侵襲細(xì)胞數(shù)明顯減少(P0.05).Western blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)與常氧組相比,缺氧組上皮標(biāo)志物表達(dá)減少,間質(zhì)標(biāo)志物表達(dá)增加；而降低miR-210表達(dá)可逆轉(zhuǎn)EMT相關(guān)蛋白的表達(dá)。結(jié)論：1、缺氧能誘導(dǎo)miR-210表達(dá)增加,同時(shí)增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的增殖侵襲能力,促進(jìn)EMT過程。2、敲低miR-210表達(dá)抑制了缺氧狀態(tài)下胃癌的增殖侵襲能力,并且抑制EMT過程。第三部分 缺氧狀態(tài)下胃癌細(xì)胞miR-210作用靶點(diǎn)的研究目的：研究缺氧狀態(tài)下胃癌細(xì)胞miR-210的作用靶點(diǎn)。方法：通過生物信息軟件預(yù)測miR-210的可能靶點(diǎn),檢測常氧組、缺氧組和缺氧miR-210抑制組中miR-210可能靶基因及蛋白的表達(dá)。結(jié)果：選擇PicTar、TargetScan和mirbase這3個(gè)軟件預(yù)測miR-210的靶基因,結(jié)合既往相關(guān)的文獻(xiàn),發(fā)現(xiàn)HOXA9、EFNA3和FGFRL1為其可能的靶基因。實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示缺氧組HOXA9的相對(duì)表達(dá)量低于常氧組,而缺氧miR-210抑制組則高于缺氧組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；缺氧miR-210抑制組FGFRL1的相對(duì)表達(dá)量則明顯高于缺氧組(P0.05)。EFNA3的表達(dá)在三組中無明顯差異。Western blot的結(jié)果表明缺氧組與常氧組相比FGFRL1的蛋白表達(dá)比值下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),缺氧miR-210抑制組與缺氧組相比FGFRL1的蛋白表達(dá)比值則明顯上升(P0.05)。而HOXA9和EFNA3蛋白在三個(gè)組中表達(dá)無顯著性差異。結(jié)論：1、FGFRL1的表達(dá)受缺氧的影響,同時(shí)抑制胃癌細(xì)胞中miR-210可以上調(diào)FGFRL1的表達(dá)。2、FGFRL1可能是胃癌細(xì)胞缺氧狀態(tài)下miR-210的靶基因,而HOXA9和EFNA3不是miR-210在胃癌細(xì)胞中的靶基因。
[Abstract]:The first chapter of expression of miR-210 in gastric carcinoma and its correlation with clinicopathological factors and prognosis. Objective: To investigate the microRNA-210 (miR-210) in gastric cancer (gastric cancer, GC) expression and its clinical significance. Methods: to detect expression of miR-210 carcinoma and corresponding 78 cases of gastric carcinoma tissues, and analyze the relationship and the clinical pathology factors and prognosis. Results: real time quantitative PCR showed that the expression of miR-210 in gastric cancer was higher than that of adjacent tissues, the comparison was statistically different (P0.05) expression and tumor size.MiR-210 (P=0.022), lymph node metastasis (P=0.018) and TNM stage (P=0.034) is closely related to the low expression of.MiR-210 patients the 5 year survival rate was 48.2%, with high expression of MiR-210 5 year survival rate was 30.4%, the difference was statistically significant (2=4.216, P=0.040). Conclusion: 1. compared with noncancerous tissues, miR-210 in gastric carcinoma The expression was significantly increased, suggesting that miR-210 may be associated with the development of gastric cancer.2.MiR-210 expression and clinical stage and metastasis, and can be used as a reliable indicator of prognosis. The second part hypoxia and the effect of miR-210 on invasion and metastasis of gastric cancer cells research objective: To observe the effect of hypoxia on gastric cancer cell proliferation, invasion and influence EMT process and possible role of miR-210 in this process. Methods: LipofectamineTM 2000 hsa-mir-210 inhibitor in transfected gastric cancer cell lines, knockdown miR-210 protein, real-time quantitative PCR detection of normoxia, hypoxia and hypoxia inhibits the expression of miR-210, miR-210 in gastric cancer cells under the condition of MTT method, Transwell assay and Western blot the changes were detected in cell proliferation, invasion and EMT related proteins. Results: compared with normoxia group, hypoxia group was significantly miR-210 Increase (P0.05); compared with the hypoxia group, the relative expression of inhibition of hypoxia group miR-210 decreased significantly (P0.05). MTT assay for the detection of cell growth inhibition rate, Transwell detection of invasion, the expression of Western blot detection of EMT related protein, compared with normoxia group, hypoxia group significantly increased the relative survival rate of gastric cancer cells. The number of invasive cells increased significantly (P0.05); the expression of inhibitor and miR-210 by inhibiting miR-210, relative survival rate was significantly lower in gastric cancer cells, invasive cells significantly reduced the number of (P0.05).Western blot results showed that compared with normoxia group, hypoxia group decreased expression of epithelial markers, mesenchymal marker expression and reduce the expression of miR-210 increased; the expression of EMT related proteins can be reversed. Conclusion: 1. Hypoxia can induce the expression of miR-210 increased, while enhancing the proliferation of gastric cancer cells invasion ability, promote the process of EMT.2, knockdown of miR-210 inhibited the expression of. The oxygen state of proliferation of gastric cancer invasion and inhibition of the EMT process. The third part under hypoxia study of gastric cancer cell miR-210 target: target miR-210 gastric cancer cells under hypoxia study. Methods: through bioinformatics software to predict possible targets of miR-210 detection, normoxia group, hypoxia group and miR-210 hypoxia miR-210 inhibition group target gene expression and protein. Results: PicTar, TargetScan and the predicted target gene of miR-210 miRBase 3 software, combined with previous related literature, found that HOXA9, EFNA3 and FGFRL1 as the target gene can be. The real-time PCR showed that the relative expression amount of HOXA9 was lower than the normal hypoxia group oxygen and hypoxia group, miR-210 inhibition group was higher than the hypoxia group, the difference was statistically significant (P0.05); the relative expression of miR-210 inhibits hypoxia group FGFRL1 was significantly higher than that of hypoxia group (P0.05.EFNA3) The expression of.Western blot showed no significant difference in the three groups showed hypoxia group and normoxia group compared FGFRL1 protein expression ratio decreased, the difference was statistically significant (P0.05), hypoxia group and hypoxia group compared miR-210 inhibited FGFRL1 protein expression ratio was significantly increased (P0.05). HOXA9 and EFNA3 protein in three the group was no significant difference. Conclusion: 1. The expression of FGFRL1 was affected by hypoxia, the expression of.2 and miR-210 in gastric cancer cells can inhibit the expression of FGFRL1 FGFRL1 may be the target gene of gastric cancer cells under hypoxia miR-210, and the target gene HOXA9 and EFNA3 are not miR-210 in gastric cancer cells.

【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.2

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本文編號(hào)：1705489