本文選題：RNA結(jié)合基序蛋白5　切入點(diǎn)：自噬　出處：《吉林大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：肺癌是危害人類健康的重大疾病之一�！�2012中國腫瘤登記年報(bào)》顯示肺癌居我國惡性腫瘤發(fā)病率和病死率首位,其中約85%為非小細(xì)胞肺癌。盡管近年來肺癌的診斷和治療不斷發(fā)展,新的診斷方法不斷被采用,手術(shù)方案不斷革新,化療方案及新的化療藥物不斷研發(fā),新的治療方案(如分子靶向治療等)不斷應(yīng)用于臨床,但是其5年生存率仍較低,不足17%。由于大部分肺癌發(fā)現(xiàn)時(shí)已為晚期,失去手術(shù)時(shí)機(jī),此時(shí)含鉑——尤其是順鉑的聯(lián)合化療,是一線推薦的標(biāo)準(zhǔn)抗腫瘤治療方案。但是由于肺癌對順鉑的天然耐藥或繼發(fā)性耐藥進(jìn)一步限制了化療的臨床療效。因此闡明肺癌化療耐藥的機(jī)制、找到有效克服化療耐藥的藥物、尋找新的有效地抗腫瘤治療方案,已成為肺癌臨床治療中亟待解決的問題。RBM5(又稱為Luca15或H37)基因是近年來發(fā)現(xiàn)的抑癌基因,定位于染色體3p21.3區(qū)域。RBM5可以調(diào)控多種基因m RNA前體的選擇性剪切,從而調(diào)節(jié)基因的表達(dá),調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)信號通路和細(xì)胞的生物學(xué)行為。RBM5與肺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。在肺癌組織中其表達(dá)量明顯低于正常肺組織。外源性高表達(dá)RBM5可以抑制肺癌、乳腺癌、纖維肉瘤、前列腺癌等多種腫瘤細(xì)胞的增殖,也可以逆轉(zhuǎn)肺腺癌細(xì)胞的順鉑耐藥�，F(xiàn)有研究表明RBM5作用機(jī)制主要是通過調(diào)節(jié)線粒體凋亡途徑、Bcl-2家族表達(dá)、EGFR及細(xì)胞周期蛋白表達(dá),從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期抑制來起到抗腫瘤作用。但有關(guān)RBM5抗腫瘤、逆轉(zhuǎn)順鉑耐藥的具體機(jī)制仍未完全明確。自噬是一種在所有真核細(xì)胞中存在的進(jìn)化保守的生物學(xué)行為。它的作用主要是去除過剩的或損傷的細(xì)胞器或分子,及在應(yīng)激狀態(tài)下進(jìn)行胞漿的回收利用,以提供能量及為生命大分子合成提供原料,從而維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。自噬失調(diào)與多種疾病相關(guān),其中也包括腫瘤。近年來越來越多的證據(jù)表明自噬在腫瘤細(xì)胞放化療耐受過程中起到了重要的作用。有研究表明自噬在肺癌細(xì)胞獲得性順鉑耐藥過程中起到了重要作用,但是在肺癌細(xì)胞中自噬的調(diào)節(jié)機(jī)制仍未完全明確。有研究表明EGFR及Bcl-2家族成員通過與自噬核心調(diào)節(jié)因子Beclin1相互作用而起到調(diào)控自噬的作用。而EGFR及Bcl-2表達(dá)均受RBM5調(diào)控,因此本研究旨在探討在肺腺癌細(xì)胞中RBM5是否對自噬起到調(diào)控作用,同時(shí)明確自噬在RBM5抗腫瘤、逆轉(zhuǎn)順鉑耐藥中起到的作用。本研究以人肺腺癌細(xì)胞A549及其順鉑耐藥細(xì)胞株A549/DDP為研究對象,探討肺腺癌細(xì)胞中RBM5在調(diào)控自噬相關(guān)基因表達(dá)、調(diào)控自噬水平及調(diào)節(jié)對順鉑的敏感性中所起的作用。本研究將明確RBM5抗腫瘤/逆轉(zhuǎn)順鉑耐藥機(jī)制及細(xì)胞內(nèi)自噬的調(diào)控機(jī)制,為肺癌治療方案的發(fā)展提供科學(xué)依據(jù)。方法:1)MTT法檢測人肺腺癌A549細(xì)胞及其順鉑耐藥株A549/DDP細(xì)胞的順鉑敏感性,相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)。2)吖啶橙染色、MDC染色、透射電鏡從形態(tài)學(xué)上檢測A549及A549/DDP細(xì)胞中自噬囊泡的生成。Western blot方法檢測自噬相關(guān)蛋白LC3-I/II、Beclin1、Lamp1表達(dá)水平。3)脂質(zhì)體法瞬時(shí)轉(zhuǎn)染RBM5表達(dá)質(zhì)粒(GV287-RBM5)至A549細(xì)胞,或在過表達(dá)RBM5同時(shí)加入自噬抑制劑3-MA,RT-PCR及Western blot方法檢測RBM5 m RNA及蛋白表達(dá)水平,吖啶橙染色、MDC染色、透射電鏡及Western blot方法檢測細(xì)胞自噬水平。MTT法檢測細(xì)胞的生存率。Western blot方法檢測自噬調(diào)控蛋白Beclin1、Bcl-2和NF-κB/P65的表達(dá)水平。4)建立A549細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤模型,應(yīng)用攜帶GV287-RBM5質(zhì)粒的減毒沙門氏菌作用于移植瘤引起RBM5高表達(dá),免疫組化法檢測腫瘤組織中RBM5、LC3,LAMP1和Beclin1的表達(dá)水平。5)脂質(zhì)體法瞬時(shí)轉(zhuǎn)染GV287-RBM5至A549/DDP細(xì)胞,或在過表達(dá)RBM5同時(shí)加入自噬抑制劑3-MA,RT-PCR及Western blot方法檢測RBM5的表達(dá)水平,吖啶橙染色、MDC染色、透射電鏡及Western blot方法檢測細(xì)胞自噬水平。MTT法檢測細(xì)胞的生存率。結(jié)果:1)A549/DDP細(xì)胞對順鉑的敏感性明顯低于A549細(xì)胞。與A549細(xì)胞相比,A549/DDP細(xì)胞體積增大,形態(tài)更不規(guī)則。2)吖啶橙染色、MDC染色、透射電鏡檢測結(jié)果顯示A549/DDP細(xì)胞中自噬囊泡的生成明顯多于A549細(xì)胞。Western blot方法檢測結(jié)果顯示A549/DDP細(xì)胞中自噬相關(guān)蛋白LC3-I/II、Beclin1、Lamp1表達(dá)水平明顯高于A549細(xì)胞。3)RT-PCR及Western blot方法證實(shí)轉(zhuǎn)染GV287-RBM5的A549細(xì)胞RBM5高表達(dá)。吖啶橙染色、MDC染色、透射電鏡及Western blot方法檢測結(jié)果顯示過表達(dá)RBM5的A549細(xì)胞自噬水平較對照組增高,加入3-MA后RBM5誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬受到抑制,早期凋亡細(xì)胞增加。MTT法檢測結(jié)果顯示RBM5過表達(dá)可抑制A549細(xì)胞增殖,而聯(lián)合應(yīng)用3-MA后可進(jìn)一步加強(qiáng)RBM5過表達(dá)引起的細(xì)胞增殖抑制和化療增敏作用。Western blot檢測結(jié)果顯示RBM5過表達(dá)可上調(diào)Beclin1、NF-κB/P65表達(dá)水平和下調(diào)Bcl-2的表達(dá)水平,而加入3-MA后這一作用受到抑制。4)成功建立A549細(xì)胞移植瘤動物模型。在移植瘤組織中過表達(dá)的RBM5增強(qiáng)了LC3、LAMP1和Beclin1的表達(dá)。5)轉(zhuǎn)染后A549/DDP細(xì)胞中RBM5表達(dá)上調(diào)。過表達(dá)RBM5的A549/DDP細(xì)胞自噬水平較對照組增高,加入3-MA后RBM5誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬受到抑制,早期凋亡細(xì)胞增加。RBM5過表達(dá)可抑制A549/DDP細(xì)胞增殖,而聯(lián)合應(yīng)用3-MA后可進(jìn)一步加強(qiáng)RBM5過表達(dá)引起的細(xì)胞增殖抑制和化療增敏作用。結(jié)論:1)過表達(dá)RBM5可誘導(dǎo)非耐藥/耐藥肺腺癌細(xì)胞自噬增強(qiáng),這種自噬可能起到細(xì)胞保護(hù)作用,拮抗了RBM5的抗腫瘤作用。RBM5對Beclin1、Bcl-2和NF-κB/P65基因表達(dá)的調(diào)控可能是其機(jī)制之一。2)自噬抑制劑3-MA可有效拮抗RBM5誘導(dǎo)的自噬,并增強(qiáng)RBM5過表達(dá)介導(dǎo)的凋亡作用、抗腫瘤作用和化療增敏作用。因此自噬抑制劑聯(lián)合RBM5過表達(dá)治療可能是治療肺腺癌和逆轉(zhuǎn)化療耐藥的有效途徑。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 葉青;鄭民華;;自噬的分子機(jī)制與病理生理意義[J];國際病理科學(xué)與臨床雜志;2007年04期

2 何韜;王海杰;譚玉珍;;自噬在細(xì)胞存活和死亡中的作用[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2008年01期

3 張志才;邵增務(wù);;自噬分子機(jī)制的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2008年01期

4 趙勇;師長宏;伍靜;張海;;自噬的形態(tài)特征及分子調(diào)控機(jī)制[J];中國比較醫(yī)學(xué)雜志;2010年10期

5 王梅;李慶林;;自噬與癌癥的治療[J];安徽醫(yī)藥;2010年08期

6 伍靜;趙勇;師長宏;張海;;自噬的形態(tài)特征及分子調(diào)控[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2010年20期

7 王雄;譚璐;;自噬研究進(jìn)展[J];亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥;2010年10期

8 卞龍艷;;運(yùn)動與自噬的關(guān)系進(jìn)展研究[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年07期

9 王偉;徐忠東;陶瑞松;;腫瘤發(fā)生過程中自噬與凋亡關(guān)系的研究[J];合肥師范學(xué)院學(xué)報(bào);2011年06期

10 王光輝;;自噬與疾病[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2012年03期

相關(guān)會議論文 前10條

1 韋雪;漆永梅;張迎梅;;鎘、活性氧自由基與自噬發(fā)生的分子機(jī)制[A];中國活性氧生物學(xué)效應(yīng)學(xué)術(shù)會議論文集（第一冊）[C];2011年

2 秦正紅;粱中琴;陶陸陽;黃強(qiáng);劉春風(fēng);蔣星紅;倪宏;邢春根;;自噬在細(xì)胞生存與死亡中的作用[A];中國藥理學(xué)會第九次全國會員代表大會暨全國藥理學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

3 秦正紅;;自噬與腫瘤和神經(jīng)細(xì)胞生存——藥物作用的新靶位[A];全國生化與分子藥理學(xué)藥物靶點(diǎn)研討會論文摘要集[C];2008年

4 李芹;丁壯;;自噬功能研究進(jìn)展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第八屆全國會員代表大會暨第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2013年

5 胡晨;張璇;滕衍斌;胡海汐;周叢照;;家蠶中自噬相關(guān)蛋白Atg8的結(jié)構(gòu)研究[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會2009年學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2009年

6 陳希;李民;Xiao-Ming Yin;李林潔;;通過不同途徑誘導(dǎo)自噬的化合物對Atg9的依賴性不同[A];細(xì)胞—生命的基礎(chǔ)——中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會2013年全國學(xué)術(shù)大會·武漢論文摘要集[C];2013年

7 陳涓涓;敬靜;蔡元博;張俊龍;;針對活體細(xì)胞自噬行為的發(fā)光金屬配合物的設(shè)計(jì)[A];中國化學(xué)會第28屆學(xué)術(shù)年會第8分會場摘要集[C];2012年

8 寧曉潔;鐘自彪;王彥峰;付貞;葉啟發(fā);;缺血再灌注誘導(dǎo)小鼠肝細(xì)胞自噬[A];2013中國器官移植大會論文匯編[C];2013年

9 吳曉琦;李丹丹;鄧蓉;江山;楊芬;馮公侃;朱孝峰;;CaMKKβ磷酸化Beclin 1調(diào)控自噬及其在腫瘤治療中的作用[A];2011醫(yī)學(xué)科學(xué)前沿論壇第十二屆全國腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

10 周鴻雁;裴中;陳杰;申存周;錢浩;劉妍梅;冼文彪;鄭一帆;陳玲;;線粒體動力改變參與了LRRK2突變導(dǎo)致的自噬[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前3條

1 生命學(xué)院;俞立課題組在《科學(xué)》發(fā)文揭示自噬調(diào)控的重要機(jī)制[N];新清華;2012年

2 周飛 張粹蘭;花櫚木“自噬”可抗癌[N];廣東科技報(bào);2011年

3 張明永;水稻自噬基因研究取得新進(jìn)展[N];廣東科技報(bào);2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 賈盛楠;轉(zhuǎn)錄因子p8調(diào)控自噬的功能研究[D];浙江大學(xué);2015年

2 皮會豐;DNM1L蛋白介導(dǎo)的線粒體自噬在鎘致肝臟毒性中的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 李倩;miRNAs介導(dǎo)的自噬抑制在類鼻疽桿菌感染免疫逃逸中的作用機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

4 黎炳護(hù);激活TRPV1誘導(dǎo)自噬在血管平滑肌細(xì)胞泡沫化中作用及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 陳江偉;自噬在椎間盤退變中的作用及機(jī)制研究[D];上海交通大學(xué);2014年

6 李榮榮;自噬在布比卡因肌毒性中的作用及機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

7 王維;NF-κB信號通路參與介導(dǎo)的自噬在高血壓大鼠心血管重構(gòu)的作用研究[D];山東大學(xué);2015年

8 劉春朋;日糧硒缺乏對雞肝臟蛋白質(zhì)組學(xué)及自噬變化的影響[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

9 梁蓓蓓;P53凋亡刺激蛋白ASPP2調(diào)控細(xì)胞自噬的研究[D];上海交通大學(xué);2012年

10 李少瑩;自噬在LPS誘導(dǎo)的肺泡上皮細(xì)胞死亡中的作用及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 匡紅;Jnk2通過smARF的降解來調(diào)控壓力誘導(dǎo)的線粒體自噬及組織損傷[D];浙江理工大學(xué);2015年

2 洪永桃;自噬在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞中的作用及甲氨蝶呤對自噬的影響[D];川北醫(yī)學(xué)院;2015年

3 李寧;自噬在嗎啡心肌保護(hù)中的作用及機(jī)制研究[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

4 劉冰;腦缺血預(yù)處理對大鼠局灶性腦缺血再灌注后自噬及凋亡的影響[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

5 王存凱;microRNA-30a-5p通過抑制自噬阻止肝星狀細(xì)胞激活[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

6 張宇程;泛素連接酶HOIL-1L在線粒體自噬中的功能與機(jī)制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

7 唐芙蓉;自噬對奶山羊雄性生殖干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

8 陳軍童;腎損傷分子1對高糖誘導(dǎo)人腎小管上皮細(xì)胞自噬作用的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

9 包勇;Kap1在LBH589誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞MCF-7自噬形成中的作用[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

10 魏園玉;P53缺失型HL-60白血病細(xì)胞內(nèi)Nucleostemin下調(diào)對mTOR通路介導(dǎo)的自噬活性的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

，

本文編號：1705067