本文選題：自噬　切入點：凋亡　出處：《河南大學》2016年碩士論文

【摘要】：目的探討不同濃度的左氧氟沙星醛縮對甲氧苯乙酮(6-氟-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-1,8-(2-甲基亞乙氧基)-1,4-二氫-4-氧-3-(4-甲氧基苯乙烯基)喹啉)(HGQ5)誘導人肝癌細胞SMMC-7721細胞發(fā)生凋亡和自噬,并分析凋亡與自噬的關(guān)系及作用機制。方法用不同濃度的HGQ5處理SMMC-7721細胞,采用四甲基偶氮唑藍(MTT)比色法,檢測HGQ5對SMMC-7721細胞的增殖抑制效應、檢測氯喹(CQ)在12 h和48h時對SMMC-7721細胞生長的影響、檢測HGQ5和HGQ5聯(lián)合氯喹處理SMMC-7721細胞48h對細胞的影響;用DAPI染色法觀察SMMC-7721細胞凋亡形態(tài)變化;TUNEL法測定HGQ5和HGQ5聯(lián)合氯喹后細胞凋亡率;間接免疫熒光法檢測細胞LC3和p62蛋白的變化;蛋白質(zhì)印跡技術(shù)檢測HGQ5作用于SMMC-7721細胞后p62表達量、LC3Ⅰ/LC3Ⅱ表達量與比值的變化;用自噬抑制劑CQ聯(lián)合HGQ5探討p62表達量、LC3Ⅰ/LC3Ⅱ表達量與比值的變化。結(jié)果HGQ5濃度分別為1.25μmol/L、2.5μmol/L、5.0μmol/L和10μmol/L,處理SMMC-7721細胞24 h,與0μmol/L HGQ5濃度組比較,細胞凋亡率分別為30.06%(P0.05)、39.12%(P0.01)、51.71%(P0.05)和65.22%(P0.01),細胞半數(shù)致死率(IC50)值為5.0μmol/L,并且HGQ5在不同濃度作用細胞48h和72h細胞IC50值分別為4.5μmol/L和4.48μmol/L,說明處理細胞在不同時間和不同濃度HGQ5均可顯著抑制SMMC-7721細胞的生長增殖,生存率呈濃度依賴關(guān)系。氯喹處理細胞12 h和48 h在6.25μmol/L濃度時,與對照組0μmol/L氯喹相比,差別沒有統(tǒng)計學意義(P0.05)、HGQ5聯(lián)合氯喹處理SMMC-7721細胞48 h后,在低劑量(0.3125-2.5μmol/L)對細胞生長抑制率高于單獨HGQ5組,在高劑量(5.0-10μmol/L)則相反;DAPI染細胞核,隨HGQ5濃度增加可見典型細胞凋亡特征性如細胞固縮,核染色質(zhì)聚集或斷裂,形成凋亡小體;TUNEL檢測顯示單獨使用HGQ5細胞凋亡率較對照組相比差別有統(tǒng)計學意義(P0.01),HGQ5可顯著誘導SMMC-7721細胞凋亡,TUNEL檢測HGQ5聯(lián)合CQ后細胞凋亡率,HGQ5(1.25μmol/L)聯(lián)合氯喹組細胞凋亡率高于HGQ5單獨處理組,HGQ5(5.0μmol/L)聯(lián)合氯喹組的細胞凋亡率低于HGQ5單獨處理組(P0.05),說明HGQ5誘導SMMC-7721細胞凋亡與自噬相關(guān)。間接免疫熒光觀察HGQ5誘導SMMC-7721細胞自噬,自噬標志物LC3在細胞核附近密度增高;Western-Blot結(jié)果顯示,相同濃度(5.0μmol/L)不同時間處理SMMC-7721細胞時,LC3-Ⅱ和p62的表達量分別在6 h、12 h、24 h和3 h、6 h、12 h時表達增高,較0 h對照組相比,差別有統(tǒng)計學意義(P0.05);HGQ5處理SMMC-7721細胞不同時間和濃度p62蛋白表達呈時間、濃度依賴性;HGQ5聯(lián)合氯喹處理SMMC-7721細胞12 h和48 h p62蛋白表達對比,48 h時p62蛋白表達量高于12 h表達量(P0.05)。結(jié)論1左氧氟沙星醛縮對甲氧苯乙酮(HGQ5)誘導肝癌細胞SMMC-7721凋亡。2HGQ5對SMMC-7721細胞自噬具有誘導作用。3在低劑量HGQ5作用于SMMC-7721細胞時,自噬過程對細胞具有保護作用,而在高劑量HGQ5作用時,自噬則促進HGQ5對SMMC-7721細胞的殺傷作用,且上述作用的機制與細胞凋亡有關(guān)。
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本文編號：1703805