本文選題：膠質(zhì)母細(xì)胞瘤　切入點(diǎn)：miR-16　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：背景和目的:膠質(zhì)母細(xì)胞瘤是腦腫瘤中最常見的致死性腫瘤,是一種多基因異常疾病,涉及大量信號(hào)通路的調(diào)控和多個(gè)基因的表達(dá)異常[1-3],其中也包括mi RNAs對(duì)基因表達(dá)的精準(zhǔn)調(diào)控[4-5],但詳細(xì)機(jī)制不十分清楚。盡管采取綜合性治療及靶向治療,其患者中位生存期仍不足15個(gè)月。腫瘤干細(xì)胞理論認(rèn)為腫瘤干細(xì)胞是惡性腫瘤復(fù)發(fā)的根源。因而研究膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞及干細(xì)胞生長(zhǎng)和侵襲的分子機(jī)制具有重要的臨床價(jià)值,可以促進(jìn)更有效的治療手段或藥物的研發(fā),有望提高患者的生存期。micro RNAs(mi RNAs)是一類由內(nèi)源性基因編碼的長(zhǎng)度約為22個(gè)核苷酸的非編碼單鏈RNA分子,按其功能可分原癌基因功能的mi RNAs、抑癌基因功能的mi RNAs和調(diào)控干細(xì)胞功能的mi RNAs,他們?cè)谀[瘤發(fā)生或發(fā)展中通過多種分子機(jī)制參與經(jīng)典的遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)調(diào)控[6-7]。膠質(zhì)瘤相關(guān)mi RNAs研究中,具有原癌基因功能的有mi R-21、mi R-221/222、mi R-10b、mi R-17-92基因簇等[8-10],具有抑癌基因功能的有mi R-128、mi R-34a、mi R-7、mi R124/mi R-137d[11-12]等。mi R-16首次發(fā)現(xiàn)在慢性淋巴細(xì)胞白血病中低表達(dá),可能具有抑癌基因的功能[13]。迄今已發(fā)現(xiàn)多種調(diào)節(jié)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞(Glioblastoma stem cells,GSCs)和神經(jīng)干細(xì)胞的stem-mi Rs,參與調(diào)控BMPs(形態(tài)形成蛋白)、SHH(Sonic hedgehog通路)和NOTCH等多條信號(hào)通路,其中調(diào)控GSCs增殖和分化的有mi R-124、mi R-135b和mi R-37等[14-15];調(diào)控自我更新的有mi R-7、mi R-9、mi R-34a、mi R-124、mi R-128、mi R-326和mi R-451等[16];調(diào)控化療耐藥和放療抵抗的有mi R-181b[17]等。本課題組前期實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果證實(shí)在膠質(zhì)瘤組織和細(xì)胞系中mi R-16均顯著低表達(dá),可能與膠質(zhì)瘤的發(fā)生相關(guān)。通過對(duì)micro RNA.org、Targetscan和mi R Walk數(shù)據(jù)庫(kù)的分析,預(yù)測(cè)Wip1可能是mi R-16的靶基因之一。Wip1(wild-type p53-induced phosphatase 1,野生型p53誘導(dǎo)的磷酸酶1基因)是近年發(fā)現(xiàn)的一種原癌基因,研究發(fā)現(xiàn)在多種腫瘤中高表達(dá),與腫瘤的增殖和預(yù)后相關(guān),可以通過作用于其下游靶基因p53以及Wip1-p53通路參與細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡過程,且與腫瘤的放療抵抗、化療耐藥及預(yù)后不良相關(guān)[18-19]。有研究顯示p53與膠質(zhì)瘤及其腫瘤干細(xì)胞關(guān)系密切[20-21],但其調(diào)控機(jī)制尚未明確�；诖�,本研究試圖通過上調(diào)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞U87和U251及其干細(xì)胞中的mi R-16,以探討mi R-16對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤增殖和侵襲等生物學(xué)功能的影響,以及mi R-16調(diào)控Wip1-p53通路的機(jī)制,進(jìn)一步深入解析mi R-16及其靶基因在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中的抑癌作用。方法:膠質(zhì)母細(xì)胞瘤U87和U251及其干細(xì)胞(GSC-U87和GSC-U251)的培養(yǎng);干細(xì)胞分化實(shí)驗(yàn)及免疫熒光染色方法鑒定干細(xì)胞;Lipfectamine2000脂質(zhì)體法將化學(xué)合成的mi R-16寡核苷酸隨機(jī)序列(mi R-16 mimics和mi R-16 mimics negative control)轉(zhuǎn)染到人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株U87和U251及其干細(xì)胞中,構(gòu)建mi R-16過表達(dá)的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞和干細(xì)胞模型;q RT-PCR技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞中后mi R-16、Wip1和p53 m RNA表達(dá)情況;平板克隆和Ed U實(shí)驗(yàn)檢測(cè)mi R-16對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖影響,流式細(xì)胞儀檢測(cè)mi R-16對(duì)細(xì)胞的凋亡和周期的影響;Transwell侵襲和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)mi R-16對(duì)細(xì)胞遷移、侵襲能力的影響;雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證mi R-16與Wip1 3’-UTR的關(guān)系;Western blot技術(shù)檢測(cè)mi R-16的預(yù)測(cè)靶基因Wip1及其下游基因p53的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:膠質(zhì)瘤細(xì)胞干細(xì)胞培養(yǎng),分化后的細(xì)胞表達(dá)GFAP,CD133和Nestin失表達(dá),而GSC-U87和GSC-U251細(xì)胞表達(dá)CD133和Nestin,GFAP失表達(dá),表明本實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)的GSC-U87和GSC-U251細(xì)胞為膠質(zhì)瘤干細(xì)胞;轉(zhuǎn)染mi R-16 mimics后mi R-16的表達(dá)顯著升高,Wip1 m RNA及蛋白表達(dá)降低,p53 m RNA及蛋白表達(dá)升高;過表達(dá)mi R-16使U87和U251細(xì)胞及其干細(xì)胞生長(zhǎng)增殖和侵襲能力下降,G1期細(xì)胞增多,S期細(xì)胞減少,細(xì)胞早期凋亡率增加。結(jié)論:mi R-16抑制U87和U251細(xì)胞及其干細(xì)胞的增殖和侵襲能力,促進(jìn)凋亡發(fā)生;mi R-16通過抑制其靶基因Wip1的表達(dá)而使p53高表達(dá),從而在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中發(fā)揮抑癌作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R739.41

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1703721