本文選題：肝細胞肝癌　切入點：LncRNA　出處：《浙江大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：肝細胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)已成為我國最常見的惡性腫瘤之一,其死亡率位居腫瘤相關(guān)死亡的前列。目前手術(shù)切除、化療、放療,肝移植是治療肝細胞肝癌的主要手段,由于其進展速度快,惡性程度高,個體差異大,患者術(shù)后復(fù)發(fā)率及轉(zhuǎn)移率仍較高,導(dǎo)致治療后的總體生存率沒有明顯上升。然而,我國是乙肝大國且人口基數(shù)大,而肝細胞肝癌的發(fā)生與乙肝密切相關(guān),因此肝細胞肝癌為我國國民經(jīng)濟和人民健康帶來嚴重負擔和威脅。所以,尋找新的腫瘤標記物,探索肝癌發(fā)生發(fā)展的確切發(fā)病機制,開發(fā)新的特異性的分子靶向藥物是突破肝癌治療瓶頸的重中之重。長鏈非編碼RNA(Long non-coding RNA,LncRNA)是一類長度超過200nt的RNA分子,其沒有編碼蛋白質(zhì)的能力,最初其被認為不能發(fā)揮生物學(xué)功能,只是轉(zhuǎn)錄過程中產(chǎn)生的多余產(chǎn)物。然而,近年來的研究表明,lncRNA參與周期,凋亡,增殖,分化等各種細胞生命活動,且與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。LncRNA在肝細胞肝癌發(fā)生發(fā)展中的調(diào)節(jié)作用同樣也受到廣大學(xué)者青睞,比如目前研究較多的有H19,HOTAIR,MEG3等,因此新型LncRNA的發(fā)現(xiàn),作用功能機制的探索為肝細胞肝癌的早期診斷和治療提供了新的思路和方向。第一部分肝細胞肝癌差異表達長鏈非編碼RNA的篩選目的:挖掘肝細胞肝癌與癌旁組織中差異表達的長鏈非編碼RNA。方法:收集3對經(jīng)病理證實的肝細胞肝癌及癌旁組織,委托上海伯豪生物技術(shù)有限公司進行生物樣本的RNA的抽提與質(zhì)檢,芯片實驗,數(shù)據(jù)分析。結(jié)果:以差異倍數(shù)"g2倍,T檢驗P值0.05作為篩選條件,肝細胞肝癌中差異表達LncRNA共2320個,其中高表達1048個,低表達1272個。第二部分長鏈非編碼RNAZNF674-AS1在肝細胞肝癌的表達及其臨床意義目的:研究ZNF674-AS1在肝細胞肝癌中表達及其臨床意義方法:收集肝癌與癌旁組織,通過RT-PCR檢測ZNF674-AS1在肝癌組織及肝癌細胞系的表達量;將ZNF674-AS1的表達量與肝癌病人的臨床資料做相關(guān)性分析及預(yù)后生存分析。結(jié)果:相對癌旁組織,ZNF674-AS1在137例肝癌組織中低表達99例,且相對與正常肝癌細胞系QSG-7701相比,在肝癌細胞系HCCLM3,SK-Hep1,HuH7,Hep3B及MHCC97H中ZNF674-AS1低表達;ZNF674-AS1表達量的高低與轉(zhuǎn)移(P=0.041),臨床分期(P=0.039)和病理學(xué)分期(P=0.045)密切相關(guān),且低表達的肝癌病人預(yù)后生存差。結(jié)論:預(yù)示ZNF674-AS1是潛在的抑癌基因,可能在肝癌發(fā)生發(fā)展中起發(fā)揮作用,是一種新的潛在的肝細胞肝癌標記物。第三部分長鏈非編碼RNANCRUPAR的表達下調(diào)與肝細胞肝癌的臨床特征相關(guān)目的:探究長鏈非編碼RNANCRUPAR在肝細胞肝癌中的臨床意義方法:收集肝癌及癌旁組織,通過RT-PCR檢測NCRUPAR在肝癌組織及肝癌細胞系的表達量;將NCRUPAR的表達量與肝癌病人的臨床資料做相關(guān)性分析及預(yù)后生存分析。結(jié)果:NCRUPAR 在肝癌細胞系 HCCLM3,HUH7,MHCC97H,SK-Hep1 and Hep3B中低表達,同時在肝癌組織中也低表達(101/137),且其低表達與門靜脈血栓(P=0.046),遠處轉(zhuǎn)移(P=0.046),病理學(xué)分期相關(guān)(P=0.006)。NCRUPAR低表達的肝癌患者預(yù)后生存差。結(jié)論提示肝癌的發(fā)生發(fā)展可能與長鏈非編碼RNANCRUPAR的低表達有關(guān),是潛在的肝癌分子標記物。第四部分長鏈非編碼RNA HNF1A-AS1在肝細胞肝癌增殖和轉(zhuǎn)移中的功能機制研究目的:探究長鏈非編碼RNAHNF1A-AS1在肝細胞肝癌增殖和轉(zhuǎn)移中的功能機制方法:通過RT-PCR驗證HNF1A-AS1在肝癌臨床樣本及細胞系的表達,并分析其表達與臨床病理特征及預(yù)后生存的關(guān)系;在HUH7及SMMC7721兩種肝癌細胞系中運用小干擾RNA敲低HNF1A-AS1的表達,通過流式細胞技術(shù)、EDU、Transwell試驗及集落克隆形成實驗檢測敲低細胞HNF1A-AS1的表達后對凋亡、周期、增殖、克隆形成及遷移侵襲的影響;在動物水平上探究HNF1A-AS1對瘤體生長的影響;最后通過免疫印跡及生物信息學(xué)探索HNF1A-AS1在肝細胞肝癌發(fā)展中背后的作用機制。結(jié)果:通過檢測138對肝癌與癌旁組織中HNF1A-AS1的表達發(fā)現(xiàn)91對表達上調(diào),47對表達下調(diào),且表達量的高低與乙肝(P=0.036)、肝硬化(P=0.009)、轉(zhuǎn)移CP=0.01)、臨床分期(P=0.002)密切相關(guān),生存分析曲線顯示高表達HNF1A-AS1的患者預(yù)后生存差。且肝癌細胞系HepG2、HCCLM3、SK-Hep1、HUH7、Hep3B、SMMC7721的表達量均高于正常肝細胞系QSG-7701。在細胞功能學(xué)實驗發(fā)現(xiàn)在肝癌細胞系HUH7和SMMC7721中敲低HNF1A-AS1后,肝癌細胞出現(xiàn)凋亡增多,增殖減弱,周期阻滯,集落克隆形成減少。裸鼠瘤體實驗發(fā)現(xiàn)敲減HNF1A-AS1后瘤體的生長速度和大小均小于對照組。在SMMC7721上敲低HNF1A-AS1后,遷移侵襲能力減弱,同時PIGR蛋白的表達減少,E-cadherin表達增多,Vimentin表達減少;反之過表達HNF1A-AS1后,遷移侵襲能力增強,PIGR蛋白表達升高,E-cadherin表達減少,Vimentin表達增多。且在SMMC7721上敲低和過表達PIGR后,出現(xiàn)和HNF1A-AS1相同的結(jié)果。然而在敲低HNF1A-AS1的基礎(chǔ)上,過表達PIGR后,肝癌細胞的遷移侵襲能力又變強,同時E-cadherin和Vimentin出現(xiàn)相應(yīng)變化;反之在過表達HNF1A-AS1的基礎(chǔ)上,敲低PIGR后,肝癌細胞的遷移侵襲能力又變?nèi)?同時E-cadherin和Vimentin出現(xiàn)相應(yīng)變化。結(jié)論HNF1A-AS1具有促進肝癌發(fā)生發(fā)展的作用并通過調(diào)控PIGR蛋白的表達參與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化促進肝癌轉(zhuǎn)移侵襲
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.7

【參考文獻】

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本文編號：1701120