本文選題：膀胱癌　切入點(diǎn)：microRNA-379-5p　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：背景在我國,目前膀胱癌的發(fā)病率位居泌尿系統(tǒng)癌癥的首位。膀胱癌早期死亡率不高,但在出現(xiàn)浸潤或轉(zhuǎn)移的進(jìn)展期膀胱癌患者中死亡率明顯升高。盡管膀胱癌的綜合治療措施不斷完善,當(dāng)前的治療仍不能獲得滿意效果。因此,從分子水平上研究相關(guān)基因在膀胱癌發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移中的作用及分子機(jī)制,確立防治靶點(diǎn),尋求新的干預(yù)策略對提高膀胱癌的療效具有特殊的重要性和迫切性。微小RNA(microRNAs,miRNAs)是近年來發(fā)現(xiàn)的長度約21-25bp的非蛋白編碼 RNA,通過與耙 mRNA 的 3'非編碼區(qū)(3'-untranslated region,3'UTR)結(jié)合,在轉(zhuǎn)錄后水平促進(jìn)靶mRNA降解和/或抑制其翻譯而發(fā)揮類似于小干擾RNA的基因沉默作用。在人類體內(nèi),近1/3的基因表達(dá)均有miRNAs參與。后續(xù)的功能研究也已證明,miRNAs參與幾乎所有的細(xì)胞生命活動,包括細(xì)胞的增殖、細(xì)胞周期、凋亡、遷移及侵襲等,并且研究發(fā)現(xiàn)miRNAs的異常表達(dá)存在于多種人類腫瘤中,包括肺癌、乳腺癌、胃癌及膀胱癌等。miRNAs在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中可能扮演著癌基因或抑癌基因的角色。然而對于miRNAs在膀胱癌中的作用機(jī)制、靶基因及調(diào)控機(jī)制等,還有待于進(jìn)一步闡明。研究目的探討miRNA-379-5p(miR-379-5p)在膀胱癌中的表達(dá)、功能及其相關(guān)機(jī)制。方接首先我們檢測了 miR-379-5p在膀胱癌組織標(biāo)本和膀胱癌細(xì)胞系(T24,EJ和TCCSUP)中的表達(dá)情況。在T24和EJ細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-379-5p mimics和miR-NC后,通過RT-qPCR的方法檢測miR-379-5p的表達(dá);通過CCK8和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測miR-379-5p對膀胱癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響。通過生物信息學(xué)相關(guān)軟件預(yù)測發(fā)現(xiàn)MDM2是miR-379-5p的潛在靶基因,采用熒光素酶報(bào)告基因檢測驗(yàn)證其是否靶向結(jié)合MDM2 3'-UTR;通過RT-qPCR和Western blot檢測miR-379-5p對膀胱癌細(xì)胞中MDM2 mRNA和蛋白表達(dá)水平的影響。緊接著,在T24和EJ細(xì)胞中敲低MDM2表達(dá)后檢測其對細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲的影響。通過回復(fù)實(shí)驗(yàn)(rescueexperiments)來驗(yàn)證MDM2在miR-379-5p抑制膀胱癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲中的作用。最后,我們通過RT-qPCR和Western blot檢測MDM2在膀胱癌組織中的表達(dá)情況,并且分析MDM2和miR-379-5p之間的表達(dá)相關(guān)性。結(jié)果1、本研究發(fā)現(xiàn),與癌旁組織相比miR-379-5p在膀胱癌組織中表達(dá)下調(diào)。同時(shí)我們檢測了三種膀胱癌細(xì)胞T24,EJ和TCCSUP中miR-379-5p的表達(dá)。結(jié)果顯示,與正常人體膀胱上皮永生化細(xì)胞(SV-HUC-1)相比,miR-379-5p在三種膀胱癌細(xì)胞系中的表達(dá)均顯著下調(diào)。2、在T24和EJ細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-379-5pmimics后,miR-379-5p的表達(dá)明顯上升。CCK8和Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示miR-379-5p高表達(dá)明顯抑制T24和EJ細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。3、通過TargetScan和miRanda預(yù)測軟件,我們發(fā)現(xiàn)MDM2是miR-379-5p的潛在靶基因。通過熒光素酶報(bào)告基因檢測我們證實(shí)miR-379-5p可以靶向結(jié)合MDM2 3'-UTR。RT-qPCR 和 Western blot 結(jié)果顯示 miR-379-5p 可明顯抑制MDM2在T24和EJ細(xì)胞內(nèi)的mRNA和蛋白的表達(dá)水平。這些結(jié)果證實(shí)MDM2是miR-379-5p的靶基因。4、在T24和EJ細(xì)胞中敲低MDM2表達(dá)后,細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲明顯受到抑制。5、回復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示共轉(zhuǎn)染MDM2高表達(dá)質(zhì)粒后可以將被miR-379-5p抑制的細(xì)胞增殖、遷移及侵襲能力恢復(fù)到miR-NC處理組的水平。結(jié)果表明,MDM2參與介導(dǎo)miR-379-5p抑制膀胱癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲過程。6、RT-qPCR結(jié)果表明,和癌旁組織相比,MDM2mRNA在膀胱癌組織中的表達(dá)水平顯著上升。利用Western blot檢測MDM2在膀胱癌組織和癌旁組織中MDM2蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果顯示:在膀胱癌組織中,MDM2蛋白表達(dá)明顯上調(diào)。同時(shí)分析發(fā)現(xiàn)miR-379-5p與MDM2 mRNA在膀胱癌組織中表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系結(jié)論miR-379-5p在膀胱癌組織及細(xì)胞中的表達(dá)顯著下調(diào)。miR-379-5p通過靶向調(diào)控MDM2的表達(dá)來抑制膀胱癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力。
[Abstract]:The expression of miR - 379 - 5p in bladder cancer , including lung cancer , breast cancer , gastric cancer and bladder cancer , has been detected by RT - qPCR . The expression of miR - 379 - 5p in bladder cancer tissues was significantly lower than that of normal human bladder epithelial cells ( SV - HUC - 1 ) . The results showed that the expression of miR - 379 - 5p in bladder cancer tissues was significantly lower than that of normal human bladder epithelial cells ( SV - HUC - 1 ) .

【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.14

【參考文獻(xiàn)】

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1 李鵬超;人膀胱腫瘤中miR-200c和miR-141功能的初步研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2010年

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本文編號：1692211