本文選題：腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞　切入點(diǎn)：粒細(xì)胞集落刺激因子　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：第一部分腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的誘導(dǎo)與表型鑒定目的:體外誘導(dǎo)人PBMC細(xì)胞生成M1和M2型巨噬細(xì)胞,并分析其生物學(xué)表型特征。方法:本實(shí)驗(yàn)首先分離獲得人外周血單核細(xì)胞(PBMC),再通過粒細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)或巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)分別刺激PBMC細(xì)胞分化成為M1型巨噬細(xì)胞或M2型巨噬細(xì)胞;Real-time PCR檢測不同巨噬細(xì)胞表面分子CD68、HLA-DR、CD206及細(xì)胞因子TGF-β的mRNA表達(dá)水平;通過LPS分別刺激M1和M2型巨噬細(xì)胞,ELISA檢測不同巨噬細(xì)胞分泌IL-10、IL-12及CD206的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:經(jīng)GM-CSF誘導(dǎo)生成的M1型巨噬細(xì)胞CD68和HLA-DR表達(dá)量明顯增加,ELISA結(jié)果顯示其IL-12表達(dá)顯著增高;而經(jīng)M-CSF誘導(dǎo)生成的M2型巨噬細(xì)胞CD206表達(dá)量明顯增加,ELISA結(jié)果表明其IL-10蛋白表達(dá)顯著增高,IL-12蛋白表達(dá)顯著降低。結(jié)論:體外成功誘導(dǎo)建立了M1型和M2型巨噬細(xì)胞,生物學(xué)表型符合各自特征。第二部分腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞對HCC細(xì)胞生長及轉(zhuǎn)移的作用及機(jī)制研究目的:探討腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞對HCC細(xì)胞生長及轉(zhuǎn)移的作用,并分析其分子機(jī)制。方法:首先通過CCK-8法分析比較單獨(dú)培養(yǎng)以及與M1/M2型巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)后的Hep G2及Huh-7細(xì)胞的生長情況;采用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測單獨(dú)培養(yǎng)以及與M1/M2型巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)后的Hep G2及Huh-7細(xì)胞的遷移侵襲能力;western blot檢測E-cardherin、Vimentin等EMT相關(guān)蛋白的表達(dá);運(yùn)用體外雙熒光素酶報(bào)告基因檢測mi R-101與其靶基因DUSP1的結(jié)合情況;經(jīng)LPS刺激的M2型巨噬細(xì)胞分別給予不同條件處理,Real-time PCR檢測mi R-101的m RNA表達(dá),western blot檢測DUSP1及其下游ERK、p38、JNK的蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:相較于單獨(dú)培養(yǎng)組及與M1型巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)組,M2型巨噬細(xì)胞可以明顯增加Hep G2及Huh-7細(xì)胞的增殖能力和遷移侵襲能力;western blot結(jié)果顯示,與M2型巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)后的HCC細(xì)胞E-cardherin表達(dá)降低,而N-cardherin、Vimentin蛋白表達(dá)明顯增加;雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)證實(shí)mi R-101可以通過直接與DUSP1的3'-UTR區(qū)發(fā)生互補(bǔ)結(jié)合,從而抑制其m RNA和蛋白的表達(dá);經(jīng)AKT抑制劑處理后M2型巨噬細(xì)胞mi R-101表達(dá)下調(diào),導(dǎo)致DUSP1的蛋白表達(dá)上調(diào),從而影響其下游ERK、p38、JNK的蛋白表達(dá)。結(jié)論:M2型巨噬細(xì)胞可增加HCC細(xì)胞的生長及遷移侵襲能力,其機(jī)制可能與mi R-101調(diào)控DUSP1的表達(dá),進(jìn)而影響其下游ERK、p38、JNK信號通路有關(guān)。第三部分索拉非尼通過mi R-101調(diào)控腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞釋放TGF-β抑制HCC生長的機(jī)制研究目的:探討腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在索拉非尼抑制HCC中的作用及其分子機(jī)制。方法:為了檢測索拉非尼對M2型巨噬細(xì)胞中mi R-101表達(dá)的調(diào)控,我們將M2型巨噬細(xì)胞分別給予LPS和(或)索拉非尼處理,western blot檢測DUSP1及其下游ERK、p38、JNK的蛋白表達(dá)情況,Real-time PCR檢測TGF-β、CD206的m RNA表達(dá)水平,ELISA檢測TGF-β、CD206的蛋白表達(dá)水平;通過CCK-8法分析比較單獨(dú)培養(yǎng)以及與M1/M2型巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)的Hep G2及Huh-7細(xì)胞經(jīng)索拉非尼干預(yù)前后的生長情況,采用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測與M2型巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)的Hep G2及Huh-7細(xì)胞經(jīng)索拉非尼干預(yù)前后的遷移侵襲能力,western blot檢測E-cardherin、Vimentin等EMT相關(guān)蛋白的表達(dá);檢測HCC細(xì)胞與經(jīng)TGF-β阻斷劑處理后的M2型巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)的生長及轉(zhuǎn)移情況;構(gòu)建小鼠HCC模型并給予索拉非尼處理,免疫組化方法檢測TGF-β及巨噬細(xì)胞表面分子CD68、HLA-DR、CD206的表達(dá)水平;Real-time PCR檢測人HCC組織中TGF-β、CD206的m RNA表達(dá)水平,采用免疫組化檢測人HCC組織中TGF-β及CD206表達(dá)水平,并分析其與臨床病理資料的關(guān)系。結(jié)果:western blot結(jié)果顯示,索拉非尼能明顯增加DUSP1的表達(dá),而降低ERK、p38、JNK的蛋白表達(dá);Real-time PCR結(jié)果顯示,給予索拉非尼干預(yù)的M2型巨噬細(xì)胞mi R-101、TGF-β、CD206的m RNA表達(dá)下調(diào);ELISA結(jié)果顯示TGF-β、CD206的蛋白表達(dá)下調(diào);索拉非尼可以抑制與M2型巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)的HCC細(xì)胞的生長及遷移侵襲能力;western blot實(shí)驗(yàn)顯示,共培養(yǎng)后的HCC細(xì)胞E-cardherin表達(dá)降低,而N-cardherin、Vimentin蛋白表達(dá)明顯增高;與經(jīng)TGF-β阻斷劑處理后的M2型巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)的HCC細(xì)胞的生長及轉(zhuǎn)移明顯降低;通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),索拉非尼能夠明顯抑制腫瘤的生長,并且抑制HCC組織中TGF-β、CD206的表達(dá);免疫組化結(jié)果顯示,人HCC組織中TGF-β及CD206表達(dá)增加,并與HCC發(fā)生關(guān)系密切。結(jié)論:索拉非尼可以通過抑制M2型巨噬細(xì)胞中mi R-101的表達(dá),使其失去對靶基因DUSP1的調(diào)控,進(jìn)而抑制ERK、p38、JNK信號通路,影響M2型巨噬細(xì)胞釋放TGF-β發(fā)揮抑制HCC細(xì)胞增殖及侵襲轉(zhuǎn)移的作用。
[Abstract]:The expression levels of IL - 10 , HLA - DR , CD206 and TGF - 尾 in human peripheral blood mononuclear cells ( PBMC ) were detected by ELISA . The results showed that the expression of IL - 10 , HLA - DR , CD206 and TGF - 尾 in human peripheral blood mononuclear cells ( PBMC ) were significantly increased . The expression of TGF - 尾 and CD206 was detected by Western blot . The expression of TGF - 尾 and CD206 was detected by Western blot . The expression level of TGF - 尾 and CD206 was detected by Western blot . The results showed that the expression of TGF - 尾 and CD206 in human HCC was detected by Western blot . The results showed that the expression of TGF - 尾 , CD206 and TGF - 尾 and CD206 in HCC tissues were downregulated by the results of real - time PCR . The results showed that the expression of TGF - 尾 and CD206 in HCC cells was decreased and the expression of TGF - 尾 and CD206 in HCC tissues was decreased .

【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;豚鼠巨噬細(xì)胞經(jīng)P_(204)處理后的抗石英細(xì)胞毒作用[J];國外醫(yī)學(xué)參考資料(衛(wèi)生學(xué)分冊);1976年04期

2 鄧俠進(jìn);;巨噬細(xì)胞的抗癌作用[J];遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1979年02期

3 陸天才;;疾病對肺巨噬細(xì)胞的影響[J];煤礦醫(yī)學(xué);1982年01期

4 郭瑞清;祝彼得;;一種分離巨噬細(xì)胞的簡單方法[J];濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1990年02期

5 謝志堅(jiān);巨噬細(xì)胞異質(zhì)性[J];醫(yī)學(xué)綜述;2001年06期

6 饒艷;運(yùn)動及神經(jīng)內(nèi)分泌對巨噬細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)[J];體育與科學(xué);2002年05期

7 朱金元;;吸煙對肺巨噬細(xì)胞的影響[J];浙江醫(yī)學(xué)教育;2003年01期

8 張俊峰;過氧化物酶體增殖物激活受體與單核/巨噬細(xì)胞系[J];醫(yī)學(xué)綜述;2004年03期

9 韋錦學(xué);顧軍;;巨噬細(xì)胞的激活誘導(dǎo)死亡[J];生命科學(xué);2006年02期

10 李曉曦;郭寧;曹雪濤;;腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞促進(jìn)腫瘤生長與轉(zhuǎn)移的研究現(xiàn)狀[J];中國腫瘤生物治療雜志;2008年01期

相關(guān)會議論文 前10條

1 史玉玲;王又明;豐美福;;巨噬細(xì)胞激活作用的研究[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會第五次會議論文摘要匯編[C];1992年

2 吳國明;周輝;;巨噬細(xì)胞和創(chuàng)傷纖維化[A];2009年浙江省骨科學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

3 李奇;王海杰;;透明質(zhì)酸對于淋巴結(jié)巨噬細(xì)胞運(yùn)動的影響[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會2002年年會文摘匯編[C];2002年

4 劉革修;歐大明;劉軍花;黃紅林;廖端芳;;丙丁酚在體外能抑制巨噬細(xì)胞脂質(zhì)氧化介導(dǎo)的低密度脂蛋白氧化并調(diào)節(jié)氧化巨噬細(xì)胞的分泌功能[A];面向21世紀(jì)的科技進(jìn)步與社會經(jīng)濟(jì)發(fā)展（下冊）[C];1999年

5 葉金善;楊麗霞;郭瑞威;;環(huán)氧化酶-2/前列腺素E_2在血管緊張素Ⅱ刺激巨噬細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子中的作用[A];第十三次全國心血管病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

6 秦帥;陳希;孔德明;;構(gòu)建由綠色熒光標(biāo)記巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)基因斑馬魚系[A];貴州省中西醫(yī)結(jié)合內(nèi)分泌代謝學(xué)術(shù)會論文匯編[C];2012年

7 武劍華;徐惠綿;;腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在胃癌中的相關(guān)研究[A];第9屆全國胃癌學(xué)術(shù)會議暨第二屆陽光長城腫瘤學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2014年

8 何軍;;血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體升高巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇水平[A];中華醫(yī)學(xué)會第11次心血管病學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

9 宋盛;周非凡;邢達(dá);;PDT誘導(dǎo)的凋亡細(xì)胞對巨噬細(xì)胞NO合成的影響[A];第七屆全國光生物學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2010年

10 張磊;朱建華;黃元偉;姚航平;;血管緊張素Ⅱ?qū)奘杉?xì)胞(THP-1重細(xì)胞)凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體表達(dá)的影響[A];浙江省免疫學(xué)會第五次學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2004年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 通訊員 李靜 記者 胡德榮;惡性腫瘤巨噬細(xì)胞未必皆“惡人”[N];健康報(bào);2014年

2 蘭克;以嘗試用巨噬細(xì)胞治癱瘓[N];科技日報(bào);2000年

3 薛佳;免疫系統(tǒng)——人體的“衛(wèi)士”[N];保健時報(bào);2009年

4 記者 胡德榮;鐵泵蛋白“維穩(wěn)”鐵代謝作用首次闡明[N];健康報(bào);2011年

5 侯嘉 何新鄉(xiāng);硒的神奇功能[N];中國食品質(zhì)量報(bào);2003年

6 唐穎 倪兵 陳代杰;巨噬細(xì)胞泡沫化抑制劑研究快步進(jìn)行[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

7 劉元江;新發(fā)現(xiàn)解釋腫瘤為何易成“漏網(wǎng)之魚”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2007年

8 本報(bào)記者 侯嘉 通訊員 何新鄉(xiāng);今天你補(bǔ)硒了嗎[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

9 左志剛;升血小板藥使用注意[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2007年

10 記者 許琦敏;“鐵泵”蛋白幫助回收鐵元素[N];文匯報(bào);2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 周赤燕;巨噬細(xì)胞MsrA對動脈粥樣硬化的干預(yù)研究[D];武漢大學(xué);2013年

2 章桂忠;TIPE2蛋白調(diào)控細(xì)胞增殖和炎癥的機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

3 張瑜;DKK1抑制巨噬細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積及其相關(guān)分子機(jī)制[D];山東大學(xué);2015年

4 孟濤;異丙酚對心臟收縮功能的抑制作用及其對巨噬細(xì)胞分泌功能調(diào)節(jié)的機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

5 周興;基于酵母微囊構(gòu)建新型口服巨噬細(xì)胞靶向遞送系統(tǒng)的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

6 蔣興偉;Tim-3對巨噬細(xì)胞極化的調(diào)控機(jī)制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

7 劉伯玉;清道夫受體A介導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬鉤端螺旋體研究[D];上海交通大學(xué);2013年

8 楊紹俊;miRNA-155介導(dǎo)ESAT-6誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制及其在結(jié)核診斷中的作用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

9 翟光耀;單核/巨噬細(xì)胞Ly6C~(low)亞群在心肌梗死后瘢痕形成期的抗炎特性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

10 韓露;TRB3介導(dǎo)的脂肪組織巨噬細(xì)胞極化與糖尿病冠狀動脈病變關(guān)系的研究[D];山東大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 馬春梅;AP0E~(-/-)小鼠TLR9介導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化效應(yīng)對動脈粥樣硬化作用的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 張譯丹;鹽皮質(zhì)激素受體拮抗劑調(diào)控巨噬細(xì)胞表型對實(shí)驗(yàn)性矽肺的作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 盧文冉;HCV core蛋白作用的巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清對肝細(xì)胞生物學(xué)性狀的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 李文建;載脂蛋白E影響巨噬細(xì)胞因子表達(dá)及分型的機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

5 曹爽;高糖對巨噬細(xì)胞TLR4信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)節(jié)作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

6 寧程程;腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在子宮內(nèi)膜癌雌激素敏感性中的作用及機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

7 高龍;PLD4在腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞抑制結(jié)腸癌增殖中的作用研究[D];成都醫(yī)學(xué)院;2015年

8 任虹;感染期子宮頸癌U14細(xì)胞荷瘤小鼠抑制巨噬細(xì)胞CCL5分泌的機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

9 李美玲;雙酚A對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞極化影響的體外研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

10 劉瓊;黃芪多糖影響巨噬細(xì)胞向脂肪細(xì)胞趨化的作用及機(jī)制研究[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2015年

，

本文編號：1692007