本文選題：膀胱癌　切入點：miR-124-3p　出處：《浙江大學》2016年博士論文

【摘要】：背景膀胱癌是泌尿系統(tǒng)疾病中最常見的惡性疾病之一,也是全身十大常見腫瘤之一。目前,膀胱癌的發(fā)病率在我國居于泌尿生殖系腫瘤發(fā)病率的第一位,而在歐美國家,膀胱癌的發(fā)病率僅次于前列腺癌,位于泌尿系腫瘤發(fā)病率的第二位。盡管膀胱癌在臨床十分常見,目前對于膀胱癌的發(fā)生與發(fā)展的機制,特別是分子機制仍缺乏足夠深入的理解。多年的研究表明,膀胱癌的發(fā)生和進展是一個多因素,多基因參與,分階段進展演變的疾病。在內(nèi)源和外源危險因素的作用下,多個基因出現(xiàn)突變或者功能失常,這些致病因素在一定時間內(nèi)逐漸積累,并最終導致惡性的疾病表型的出現(xiàn)。近年來,內(nèi)源性非編碼RNA的研究越發(fā)深入,而MicroRNA是這其中研究較為深入的一類。MicroRNA是一種基因編碼轉錄生成的RNA單鏈分子,長度約為20-24個核酸。研究表明這些RNA在基因的表達和調(diào)控方面有著重要作用。而在各種因素的影響下MicroRNA這種調(diào)控基因表達的功能的紊亂或者缺失會導致包括腫瘤的各種疾病的發(fā)生。本研究著重于篩選這樣的在膀胱癌中異常表達的的MicroRNA并進一步的探索其在膀胱癌細胞中的生物學功能和分子機制。目的采用Real Time Quantitative PCR檢測膀胱癌患者手術后的標本中的miR-124-3p的表達狀況；在體外實驗部分,對比膀胱移行上皮細胞株SV-HUC1,檢測膀胱癌細胞株T24, UM-UC-3, J82中的miR-124-3p的表達情況。進一步探索miR-124-3p的靶點和生物學功能,以及miR-124-3p調(diào)控這些生物學行為的分子機制。方法1.在13對配對的膀胱癌組織標本檢測miR-124-3p的相對表達量,對膀胱癌組織及對照的正常粘膜組織中miR-124-3p的表達差異進行統(tǒng)計；2.體外實驗,使用膀胱癌T24, UM-UC-3, J82細胞株,轉染miR-124-3p模擬體,外源性地過表達miR-124-3p.通過CCK-8、平板克隆形成、流式細胞周期和劃痕愈合實驗和Transwell小室法等手段來探索外源性地過表達miR-124-3p對膀胱癌細胞產(chǎn)生的生物學功能上的影響；3.使用多種在線靶點預測軟件對miR-124-3p的靶基因進行預測,利用膀胱癌組織芯片檢測靶基因在膀胱癌組織中的表達。然后利用Real Time PCR和Western Blot首先確定預測的靶基因是否隨著外源性的miR-124-3p過表達而變化,以及使用預測的靶基因的干擾RNA試驗是否能得到與過表達miR-124-3p相似的生物學功能。下一步利用熒光素酶雙報告系統(tǒng)對miR-124-3p的靶基因及結合位點做進行進一步地鑒定,確定miR-124-3p的直接靶點。最后使用拯救實驗進一步驗證miR-124-3p及其靶基因在膀胱癌細胞中的功能。4.使用Western Blost對下游的信號傳導通路基因進行檢測,進一步探索miR-124-3p發(fā)揮生物學功能的分子機制。結果1.在所有收集的13例膀胱癌癌組織標本中,miR-124-3p均相對低表達。有11例膀胱癌組織中的miR-124-3p表達量小于癌旁組織的50%。對比膀胱移行上皮細胞株SV-HUC-1,膀胱癌細胞株T24, UM-UC-3, J82中,miR-124-3p均為低表達。2.體外轉染終濃度為50nM的miR-124-3p mimic至膀胱癌T24,UM-UC-3,J82細胞株中,可以抑制細胞增殖。體外平板克隆形成實驗能明顯抑制細胞克隆形成,并有G1期阻滯。劃痕愈合實驗和Transwell小室實驗顯示miR-124-3p過表達可以減弱T24, UM-UC-3, J82細胞的遷移和侵襲能力。3.通過多種在線軟件的分析,預測ROCK1可能是miR-124-3p的靶基因,同時通過Real Time PCR和Western Blot實驗檢測到ROCK1在轉染miR-124-3p模擬體后在mRNA水平和蛋白水平的表達量都有所下降。ROCK1的siRNA能夠產(chǎn)生于miR-124-3p模擬體相似的生物學功能。熒光素酶雙報告系統(tǒng)分析證實ROCK1的mRNA是miR-124-3p的直接結合靶點,它的3’-UTR中存在miR-124-3p的結合序列。4.miR-124-3p能夠逆轉膀胱癌細胞的上皮間質(zhì)轉化,并抑制轉移相關基因c-Met, MMP2, MMP9的表達。結論1.對比癌旁組織,膀胱癌組織中miR-124-3p相對表達量較低。但是本研究未能提示miR-124-3p表達量高低與膀胱癌的惡性程度相關。2.體外轉染miR-124-3p模擬體使miR-124-3p外源性的過表達,削弱了膀胱癌T24, UM-UC-3, J82細胞株的增殖能力,遷移和侵襲能力。3.miR-124-3p的直接靶基因是ROCK1,并影響下游遷移和侵襲通路的蛋白表達。4. miR-124-3p能夠參與調(diào)控膀胱癌細胞的上皮間質(zhì)轉化。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.14

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 青云;英國科學家辨別出與膀胱癌有關的基因[J];中國處方藥;2004年08期

2 ;特殊激素可導致男性患膀胱癌幾率升高[J];中國社區(qū)醫(yī)師(綜合版);2007年11期

3 肖建利;張麗芳;劉巧莉;;白花蛇舌草治療膀胱癌1例[J];臨床合理用藥雜志;2009年08期

4 丁虹彬，，余雪軒;培養(yǎng)膀胱癌細胞的新方法[J];南京醫(yī)學院學報;1994年01期

5 張曉峰;劉訓勤;;一種新型膀胱癌快速診斷裝置[J];醫(yī)療衛(wèi)生裝備;2013年10期

6 孫宏志,凡杰,唐孝達;自穩(wěn)定反義IGF1R基因片段對膀胱癌細胞的影響[J];中華泌尿外科雜志;2000年05期

7 章小平,楊紅枚,魯功成;膀胱癌穩(wěn)定表達多藥耐受相關蛋白亞克隆的生物學特征[J];中華實驗外科雜志;2000年03期

8 漆少廷,徐錫坤,王心如;膀胱癌的分子生物學研究進展[J];國外醫(yī)學.泌尿系統(tǒng)分冊;2000年04期

9 章小平,楊紅枚,魯功成;流式細胞儀在膀胱癌多藥耐受研究中的應用[J];臨床泌尿外科雜志;2000年09期

10 楊莉,汪少娟,楊業(yè)金,陳忠,吳燕麗;抗腫瘤藥對膀胱癌細胞產(chǎn)生的免疫抑制因子作用的影響[J];藥物流行病學雜志;2000年03期

相關會議論文 前10條

1 張永春;谷江;孫發(fā);石家齊;;傳統(tǒng)醫(yī)學在膀胱癌治療中的意義[A];2010年貴州省泌尿外科學術會議論文集[C];2010年

2 潘春武;沈周俊;唐小瑩;王e

本文編號：1688991