發(fā)布時間：2018-03-30 11:50

  本文選題：核酸適配體　切入點：篩選　出處：《湖南大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：肝癌是當今全世界發(fā)病率及致死率最高的癌癥之一。發(fā)展新型高效、快速的腫瘤標志物篩選方法,以及開發(fā)對腫瘤病理組織具有高特異性、高靈敏度并且化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定的分子識別探針對于臨床腫瘤診斷、分類及判斷預(yù)后等具有非常重要意義。近年來,基于protein-SELEX或者cell-SELEX技術(shù)篩選得到的核酸適配體作為一種新發(fā)展起來的識別分子在包括癌癥研究的許多領(lǐng)域獲得了廣泛的應(yīng)用。但是protein-SELEX方法的篩選靶標為純化蛋白,而cell-SELEX技術(shù)以體外培養(yǎng)的腫瘤細胞系為篩選靶標,這些篩選目標物都無法真正模擬體內(nèi)腫瘤的實際發(fā)生發(fā)展模式,忽略了腫瘤形成過程中會受到體內(nèi)包括血管微環(huán)境和細胞外周基質(zhì)等的多種因素影響,這使得基于cell-SELEX篩選得到的核酸適配體一般只能識別體外培養(yǎng)的腫瘤細胞系,難以真正實現(xiàn)對腫瘤臨床病理組織的檢測和診斷,嚴重限制了核酸適配體在腫瘤臨床領(lǐng)域的研究和應(yīng)用。而tissue-SELEX技術(shù)以臨床腫瘤組織為篩選靶標,能獲得真正識別臨床腫瘤病理組織的核酸適配體探針,在腫瘤標志物的發(fā)現(xiàn)、臨床診斷和分型研究中展示出了良好的潛力,但是相關(guān)研究目前還開展得太少,有待進一步推進。本論文采用tissue-SELEX技術(shù),以臨床肝癌組織切片為樣本,成功篩選得到能區(qū)分肝癌組織與正常肝組織的核酸適配體,并對核酸適配體與靶標的結(jié)合性能進行了分析研究。(1)基于tissue-SELEX技術(shù),以臨床肝癌組織切片為靶標,癌旁正常肝組織為對照進行篩選。此外,我們還對篩選方法進行了修改,利用前人篩選得到的核酸適配體BC15對組織中的相關(guān)位點進行了封閉,希望篩選得到的核酸適配體結(jié)合一個新位點。經(jīng)過11輪不斷增加篩選壓力的反復(fù)篩選過程,成功鑒定出一條能區(qū)分肝癌組織與正常肝組織的核酸適配體SW1。(2)用固定的癌細胞系為模型,通過熒光共定位表征發(fā)現(xiàn)核酸適配體SW1的靶分子亞細胞定位在細胞核,而且不是核酸,可能是一種核酸結(jié)合蛋白；利用流式細胞術(shù),我們測定出SW1對肝癌SMMC-7721細胞的解離常數(shù)在納摩爾級別,展現(xiàn)出較強的親和力；競爭實驗表明我們篩選得到的核酸適配體SW1與其他研究組篩選得到的核酸適配體BC15的識別位點不相同。此外,通過組織芯片考察,核酸適配體對臨床肝癌組織的識別率達到了72.7%,且對來源于多種器官的腫瘤組織都有較強的結(jié)合能力。綜合以上分析結(jié)果,我們篩選得到的核酸適配體SW1能區(qū)分肝癌組織與正常肝組織,對于肝癌的臨床篩查和診斷有一定的輔助指導(dǎo)價值,而且由于SW1的靶分子為一種亞細胞定位在細胞核的蛋白質(zhì),因此SW1有望用于鑒定新的腫瘤標志物,對于開發(fā)早期診斷和精準治療方法,以及研究肝癌的發(fā)病機理有積極推動作用。
[Abstract]:Liver cancer is one of the highest morbidity and fatality rates in the world. The development of new and rapid screening methods for tumor markers and the development of high specificity for tumor pathological tissue. Highly sensitive and chemically stable molecular recognition probes are of great significance for clinical tumor diagnosis, classification and prognosis. Nucleic acid aptamers screened based on protein-SELEX or cell-SELEX technology have been widely used in many fields including cancer research as a newly developed recognition molecule. But the screening target of protein-SELEX method is purified protein. However, cell-SELEX technology uses tumor cell lines cultured in vitro as the screening target, and none of these screening targets can really mimic the actual occurrence and development pattern of tumor in vivo. Many factors, including vascular microenvironment and peripheral matrix, have been neglected in tumor formation, which makes the aptamers selected based on cell-SELEX can only recognize tumor cell lines in vitro. It is difficult to detect and diagnose tumor clinicopathological tissue, which seriously limits the research and application of aptamer in the clinical field of tumor. However, tissue-SELEX technology selects clinical tumor tissue as the target. The aptamer probe that can truly identify clinical tumor tissues shows good potential in the discovery of tumor markers, clinical diagnosis and typing, but the relevant studies are still too few. In this paper, tissue-SELEX technique was used to select the nucleic acid aptamers which could distinguish the liver cancer tissue from the normal liver tissue, and the clinical liver tissue section was used as the sample to screen the aptamer of nucleic acid. The binding properties of aptamers to target were analyzed and studied. (1) based on tissue-SELEX technique, clinical liver cancer tissue sections were used as target and normal liver tissues adjacent to cancer were selected as control. In addition, we modified the screening method. The aptamer BC15 was used to block the relevant sites in the tissue and to bind the aptamer to a new site. After 11 rounds of repeated screening with increasing screening pressure, A nucleic acid aptamer SW1.2capable of distinguishing liver cancer tissue from normal liver tissue was successfully identified. Using a fixed cancer cell line as a model, the target subcell of aptamer SW1 was found to be located in the nucleus and not nucleic acid by fluorescence co-localization. Using flow cytometry, we determined that the dissociation constant of SW1 to SMMC-7721 cells of liver cancer showed strong affinity at the nanomolor level. Competitive experiments showed that the nucleic acid aptamer SW1 we screened was different from the nucleic acid aptamer BC15 selected by other team. The recognition rate of aptamer of nucleic acid to clinical liver cancer tissue is 72.7, and it has strong binding ability to tumor tissue from many organs. The nucleic acid aptamer SW1 we screened can distinguish the liver cancer tissue from the normal liver tissue, which is helpful for clinical screening and diagnosis of liver cancer. Moreover, the target molecule of SW1 is a subcellular protein located in the nucleus. Therefore, SW1 is expected to be used to identify new tumor markers, which can promote the development of early diagnosis and accurate treatment, as well as the study of pathogenesis of liver cancer.
【學(xué)位授予單位】：湖南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 梁紅茹;楊松濤;張濤;胡桂秋;夏咸柱;;核酸適配體及其在病原微生物學(xué)中的應(yīng)用[J];生物工程學(xué)報;2011年05期

2 姚遠;張波;;核酸適配體及其應(yīng)用研究進展[J];國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志;2014年08期

3 甘龍杰;蘭小鵬;;適配體芯片技術(shù)及其應(yīng)用[J];臨床檢驗雜志;2009年06期

4 蘭小鵬;;適配體技術(shù)及其在醫(yī)學(xué)檢驗研究中的作用[J];臨床檢驗雜志;2012年10期

5 李曉佩;楊良嶸;黃昆;李文松;孫西同;劉會洲;;核酸適配體在生化分離及檢測領(lǐng)域中的研究進展[J];化工學(xué)報;2013年01期

6 劉婷先;張娜;;適配體在腫瘤治療方面的應(yīng)用[J];生命的化學(xué);2013年05期

7 唐德平;張宇潔;毛愛紅;;適配體在體外細胞檢測中的應(yīng)用[J];重慶醫(yī)學(xué);2014年13期

8 李紅玉;閻輝;;適配體與病毒性感染診斷及治療[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報;2013年05期

9 滿燕;呂雪飛;彭廣;宋達;慶宏;;雙適配體夾心微陣列芯片在凝血酶檢測中的應(yīng)用[J];生命科學(xué)儀器;2014年Z1期

10 胡燕;楊先達;;核酸適配體在腫瘤學(xué)中的應(yīng)用研究進展[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2012年03期

相關(guān)會議論文 前10條

1 蔡圣;劉彩云;盧建忠;;基于核酸適配體和酶循環(huán)放大的腺苷化學(xué)發(fā)光檢測[A];中國化學(xué)會第十屆全國發(fā)光分析學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2011年

2 陳巍;趙新穎;屈鋒;;毛細管電泳法篩選蛋白質(zhì)的核酸適配體的初步研究[A];全國生物醫(yī)藥色譜學(xué)術(shù)交流會（2010景德鎮(zhèn)）論文集[C];2010年

3 楊曉娟;邴濤;梅宏成;上官棣華;;核酸適配體用于手性拆分L型和D型色氨酸[A];全國生物醫(yī)藥色譜學(xué)術(shù)交流會（2010景德鎮(zhèn)）論文集[C];2010年

4 鄭冬梅;婁新徽;;一種基于結(jié)構(gòu)開關(guān)型適配體的無標記熒光傳感法[A];中國化學(xué)會第28屆學(xué)術(shù)年會第9分會場摘要集[C];2012年

5 薛利云;周小明;邢達;;基于核酸適配體探針和酶輔助熒光信號擴增的等溫高靈敏度蛋白檢測方法[A];中國光學(xué)學(xué)會2011年學(xué)術(shù)大會摘要集[C];2011年

6 馬文韜;古力;屈鋒;;毛細管電泳篩選大腸桿菌適配體的初步研究[A];全國生物醫(yī)藥色譜學(xué)術(shù)交流會（2010景德鎮(zhèn)）論文集[C];2010年

7 梁好均;徐華國;鄧偉;;核酸適配體鏈構(gòu)象轉(zhuǎn)變的研究[A];2014年兩岸三地高分子液晶態(tài)與超分子有序結(jié)構(gòu)學(xué)術(shù)研討會摘要集[C];2014年

8 王曉芳;程琳;耿霞;趙強;;基于適配體修飾的磁珠和量子點熒光法檢測凝血酶[A];中國化學(xué)會第28屆學(xué)術(shù)年會第9分會場摘要集[C];2012年

9 汪海林;章大鵬;;單核苷水平核酸適配體與蛋白質(zhì)相互作用分析[A];中國化學(xué)會第28屆學(xué)術(shù)年會第9分會場摘要集[C];2012年

10 溫桂清;范燕燕;梁愛惠;蔣治良;;核酸適配體納米金共振散射光譜檢測血清中鉀離子[A];中國化學(xué)會第十五屆全國有機分析及生物分析學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2009年

相關(guān)重要報紙文章 前2條

1 潘文;核酸適配體在醫(yī)藥領(lǐng)域應(yīng)用前景廣闊[N];中國醫(yī)藥報;2010年

2 于洋　田野;蛋白質(zhì)檢測有了新方法[N];吉林日報;2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 黃玉坤;基于核酸適配體識別-時間分辨熒光納米探針的生物毒素檢測方法研究[D];江南大學(xué);2015年

2 陳霞;功能核酸的篩選及在分析檢測中的應(yīng)用[D];武漢大學(xué);2012年

3 林雪霞;微流控芯片與可控適配體技術(shù)用于細胞代謝物分析及其相互作用的研究[D];北京化工大學(xué);2015年

4 周慶同;生物相空間中的適配體和藥物虛擬篩選[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2015年

5 郭業(yè)民;基于適配體傳感器的牛奶中抗生素殘留快速檢測技術(shù)研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

6 李菁菁;適配體功能化的熒光納米探針用于蛋白和細胞傳感研究[D];南京大學(xué);2012年

7 于鴿;乙丙肝病毒相互干擾及適配體在肝癌診斷及靶向治療中的作用[D];吉林大學(xué);2016年

8 王成全;基于磁控適配體傳感體系的農(nóng)產(chǎn)品中典型霉菌毒素檢測研究[D];江蘇大學(xué);2016年

9 姜紅巖;自組裝RNA適配體納米傳感器[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

10 胡波;海洋聚醚類毒素基于適配體的檢測及生物合成的探索[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張月俠;蛋白質(zhì)寡核苷酸適配體的篩選與應(yīng)用研究[D];山東師范大學(xué);2009年

2 李慧玲;BHL DNA適配體對銅綠假單胞菌群體感應(yīng)系統(tǒng)抑制作用的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

3 劉金釧;適配體納米金比色法靈敏度影響因素研究及其在食品安全檢測中的應(yīng)用[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

4 于連元;核酸適配體修飾的納米顆粒在腫瘤靶向免疫治療及靶向熱療中的應(yīng)用[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

5 趙變軍;基于適配體特異性作用的乳腺癌細胞表面多種腫瘤標記物同時檢測的新方法研究[D];南京師范大學(xué);2015年

6 喬醴峰;基于核酸適配體的β-葡萄糖醛酸苷酶一步純化固定化研究及其應(yīng)用[D];石河子大學(xué);2015年

7 呂莉;基于適配體的酶聯(lián)吸光度法檢測血小板衍生生長因子-BB[D];山西大學(xué);2015年

8 陳艷霞;核酸適配體/小檗堿熒光體系的構(gòu)筑及分析應(yīng)用[D];山西大學(xué);2015年

9 呂琴;基于熒光標記適配體的熒光各向異性法檢測小分子[D];山西大學(xué);2015年

10 朱志玲;基于核酸適配體的赭曲霉毒素A SPR檢測技術(shù)研究[D];北京化工大學(xué);2015年

，

本文編號：1685788