達(dá)瑪-24-烯-3β-乙酰氧基-20s-醇對胃癌細(xì)胞增殖的抑制作用
本文選題:達(dá)瑪--烯-β-乙酰氧基-s-醇 切入點(diǎn):胃癌細(xì)胞 出處:《醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報》2017年05期
【摘要】:目的前期研究發(fā)現(xiàn)中藥連翹醇提物具有明顯體外抑制腫瘤細(xì)胞的作用,文章進(jìn)一步探討從中藥連翹提取的化合物達(dá)瑪-24-烯-3β-乙酰氧基-20s-醇(Dammar-24-ene-3β-acetate-20S-ol,DM)體外抗腫瘤作用及其機(jī)制。方法采用MTT法檢測DM對胃癌細(xì)胞株SGC-7901、BGC-823和MKN-45體外抑制作用。實(shí)驗(yàn)分為MKN-45對照組及其低、高劑量組,BGC-823對照組及其低、高劑量組,SGC-7901對照組及其低、高劑量組,對照組均為新鮮培養(yǎng)基,低劑量DM為10、50μg/m L,流式細(xì)胞儀檢測凋亡細(xì)胞比例。應(yīng)用Cell Quest軟件分析結(jié)果,記錄細(xì)胞不同周期的比例。采用DCFH-DA探針檢測ROS水平,實(shí)驗(yàn)分為空白對照組,多西紫杉醇組和DM組。配置微管聚集實(shí)驗(yàn)反應(yīng)體系,其中多西紫杉醇10μmol/L,DM終濃度選擇50或100μmol/L,空白對照組不加藥物,采用微管聚集實(shí)驗(yàn)和微管蛋白免疫熒光染色研究DM對于微管系統(tǒng)的影響。結(jié)果 50μg/m L對于3株胃癌細(xì)胞抑制率均在80%以上,IC50分別為:MKN-45(11.72±1.35)μg/m L;BGC-823(17.19±0.82)μg/m L;SGC-7901(7.55±0.79)μg/m L。2μg/m L DM處理48 h后再以低密度培養(yǎng)8 d,細(xì)胞克隆較對照組明顯減少。與MKN-45對照組凋亡細(xì)胞[(21.1±2.5)%]相比,MKN-45低劑量組和高劑量組凋亡細(xì)胞比率[(25.1±1.3)%和(55.2±2.3)%]均有明顯升高(P0.01)。BGC-823對照組凋亡細(xì)胞百分率(13.2±2.4)%比較,BGC-823低、高劑量組凋亡細(xì)胞百分率[(18.2±2.1)%、(41.8±2.8)%]明顯升高(P0.01)。與SGC-7901對照組凋亡細(xì)胞率[(10.5±1.8)%]比較,SGC-7901高劑量DM組凋亡細(xì)胞率[(21.1±1.9)%]升高(P0.05),而與SGC-7901低劑量DM組[(12.3±1.6)%]差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與MKN-45對照組比較,MKN-45低劑量組S期細(xì)胞百分率降低[(14.5±2.7)%vs(12.3±3.3)%,P0.05]。與BGC-823對照組比較,BGC-823低劑量組細(xì)胞S期百分率增加[(12.2±5.4)%vs(20.2±2.1)%,P0.05]。與SGC-7901對照組比較,SGC-7901低劑量組S期細(xì)胞百分率增加[(21.5±3.8)%vs(31.3±2.6%),P0.05]。檢測DM處理后細(xì)胞內(nèi)活性氧水平研究發(fā)現(xiàn),10、50μg/m L DM處理48 h 3株細(xì)胞均可見劑量依賴性ROS水平上升。微管蛋白免疫熒光染色可見采用IC50濃度的多西紫杉醇和10μg/m L DM處理48 h后,MKN-45熒光信號均表現(xiàn)為局部濃聚、紊亂。結(jié)論達(dá)瑪-24-烯-3β-乙酰氧基-20s-醇能夠?qū)⑽赴┘?xì)胞周期阻滯于S期,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,從而抑制細(xì)胞增殖作用。
[Abstract]:Objective to study the effect of alcohol extract of Forsythia suspensa on tumor cells in vitro. The antitumor effect of Dammar-24-ene-3 尾 -acetate-20S-olDMm extracted from Forsythia suspensa in vitro and its mechanism were further studied. Methods the inhibitory effect of DM on gastric cancer cell line SGC-7901BGC-823 and MKN-45 in vitro was detected by MTT assay. MKN-45 control group and its low level, In high dose group, BGC-823 control group and its low level, high dose group, high dose group, high dose group and control group were all fresh medium, low dose DM was 10 ~ 50 渭 g / mL, flow cytometry was used to detect the percentage of apoptotic cells, and the results were analyzed by Cell Quest software. The ratio of different cell cycle was recorded. The ROS level was detected by DCFH-DA probe. The experiment was divided into three groups: blank control group, docetaxel group and DM group. The microtubule aggregation reaction system was set up. The final concentration of docetaxel 10 渭 mol / L DM was 50 or 100 渭 mol / L, and the blank control group was not treated with drugs. The effects of DM on the microtubule system were studied by microtubule aggregation test and tubulin immunofluorescence staining. Results the inhibitory rates of 50 渭 g / mL on three gastric cancer cell lines were all above 80%. The IC50 was 11.72 鹵1.35 渭 g / mL BGC-823N 17.19 鹵0.82 渭 g / mL SGC-7901U 7.55 鹵0.79 渭 g / mL DM for 48 h. The percentage of apoptotic cells in MKN-45 low dose group and high dose group [25.1 鹵1.3% and 55.2 鹵2.3%] was significantly higher than that in MKN-45 control group (13.2 鹵2.4% vs 13.2 鹵2.4%), and the percentage of apoptotic cells in control group was significantly lower than that in BGC-823 control group (13.2 鹵2.4% vs 13.2 鹵2.4%) after low density culture for 8 days, and the percentage of apoptotic cells in MKN-45 low dose group and high dose group [25.1 鹵1.3% and 55.2 鹵2.3%] was significantly higher than that in control group. The percentage of apoptotic cells in the high dose group [18.2 鹵2.1%] was significantly higher than that in the control group [10.5 鹵1.8%]. Compared with the control group of SGC-7901 [10.5 鹵1.8%], the percentage of apoptotic cells in the SGC-7901 high dose DM group was increased [21.1 鹵1.9%], but there was no significant difference between the high dose DM group and the SGC-7901 low-dose DM group (12.3 鹵1.6%). The percentage of S phase cells in the low dose group of MKN-45 decreased [14.5 鹵2.7)%vs(12.3 鹵3.3% P0.05]. Compared with the control group of BGC-823, the percentage of S phase increased [12.2 鹵5.4)%vs(20.2 鹵2.1] in the low dose group of BGC-823. Compared with the control group of SGC-7901, the percentage of S phase cells in the low dose group of SGC-7901 increased [21.5 鹵3.8)%vs(31.3 鹵2.6%]. The results of oxygen level study showed that the increase of ROS level in dose-dependent manner was observed in 3 cells treated with 1050 渭 g / mL DM for 48 h. The fluorescence signals of MKN-45 were detected by IC50 concentration of docetaxel and 10 渭 g / mL DM for 48 h. Expressed as local concentration, Conclusion Dama 24 ene 3 尾 acetyl 20 s alcohol can block the cell cycle in S phase, induce apoptosis and inhibit the proliferation of gastric cancer cells.
【作者單位】: 南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院腫瘤中心;
【分類號】:R735.2
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,本文編號:1683588
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