本文選題：KLA　切入點(diǎn)：iRGD　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：第一部分KLA-iRGD融合蛋白的構(gòu)建及穿透性、靶向抗腫瘤作用的研究[目的]研究KLA-iRGD融合蛋白對(duì)胃癌細(xì)胞凋亡的影響,體內(nèi)治療胃癌MKN45皮下瘤模型,觀察其抑瘤活性以及對(duì)腫瘤組織的靶向穿透作用。[方法]運(yùn)用MTT和流式細(xì)胞儀檢測(cè)KLA-iRGD融合蛋白對(duì)胃癌細(xì)胞株凋亡的影響;建立胃癌細(xì)胞株mKN45皮下瘤模型,腹腔注射KLA-iRGD融合蛋白治療;免疫熒光方法檢測(cè)融合蛋白在腫瘤組織的分布及腫瘤組織細(xì)胞凋亡情況;檢測(cè)其他器官細(xì)胞凋亡情況。[結(jié)果]KLA-iRGD融合蛋白對(duì)胃癌細(xì)胞呈現(xiàn)明顯的促凋亡作用;在胃癌細(xì)胞MKN45皮下瘤模型中,KLA-iRGD融合蛋白經(jīng)尾靜脈注射后呈現(xiàn)明顯的靶向性及穿透性,同時(shí)表現(xiàn)出明顯的抗腫瘤作用,KLA-iRGD融合蛋白治療組與對(duì)照組相比腫瘤直徑存在顯著性差異。[結(jié)論]KLA-iRGD融合蛋白對(duì)胃癌MKN45腫瘤細(xì)胞具有明顯的促凋亡作用,且其在體內(nèi)也有明顯靶向抗腫瘤作用,體內(nèi)可抑制腫瘤生長(zhǎng),且對(duì)其他器官?zèng)]有明顯影響。第二部分sTRAIL-iRGD融合蛋白的表達(dá)純化及靶向抗腫瘤作用的研究[目的]利用原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)純化sTRAIL-iRGD融合蛋白,研究其對(duì)胃癌細(xì)胞凋亡的影響,體內(nèi)治療胃癌MKN45皮下瘤模型,觀察其抑瘤活性以及對(duì)腫瘤組織的靶向穿透作用。[方法]使用原核表達(dá)技術(shù)表達(dá)純化蛋白;使用考馬斯亮藍(lán)染色以及Western Blot法測(cè)定相應(yīng)蛋白的表達(dá)量;使用流式細(xì)胞儀以及MTT法測(cè)定相應(yīng)蛋白作用于胃癌細(xì)胞株凋亡的影響;建立胃癌細(xì)胞株MKN45皮下瘤模型,腹腔注射sTRAIL-iRGD融合蛋白治療;使用免疫熒光方法測(cè)定蛋白在腫瘤組織內(nèi)的分布情況以及腫瘤組織的凋亡。[結(jié)果]sTRAIL-iRGD融合蛋白在細(xì)胞內(nèi)、三維細(xì)胞培養(yǎng)模型及腫瘤組織內(nèi)呈現(xiàn)明顯的抗腫瘤作用;在胃癌細(xì)胞MKN45皮下瘤模型中,sTRAIL-iRGD融合蛋白經(jīng)尾靜脈注射后呈現(xiàn)明顯的靶向性及穿透性,同時(shí)表現(xiàn)出明顯的抗腫瘤作用,sTRAIL-iRGD融合蛋白治療組與對(duì)照組相比腫瘤直徑存在顯著性差異。[結(jié)論]融合蛋白sTRAIL-iRGD可以通過(guò)原核表達(dá)系統(tǒng)來(lái)表達(dá)純化,融合蛋白sTRAIL-iRGD可明顯促進(jìn)胃癌細(xì)胞的凋亡,并且其在機(jī)體內(nèi)具有明顯的靶向作用,其可有效抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng),且不作用于其他組織器官。
[Abstract]:Part one: construction and penetrability of KLA-iRGD fusion protein and its antitumor effect. [objective] to study the effect of KLA-iRGD fusion protein on apoptosis of gastric cancer cells, and to treat MKN45 subcutaneous tumor model of gastric cancer in vivo. [methods] the effect of KLA-iRGD fusion protein on apoptosis of gastric cancer cell line was detected by MTT and flow cytometry, and the subcutaneous tumor model of gastric cancer cell line mKN45 was established. KLA-iRGD fusion protein was injected intraperitoneally and the distribution of fusion protein in tumor tissue and apoptosis of tumor tissue were detected by immunofluorescence. The apoptosis of other organs was detected. [results] KLA-iRGD fusion protein could promote apoptosis in gastric cancer cells, and KLA-iRGD fusion protein showed obvious targeting and penetration in MKN45 subcutaneous tumor model. There was significant difference in tumor diameter between the KLA-iRGD fusion protein group and the control group. [conclusion] KLA-iRGD fusion protein has obvious apoptotic effect on gastric cancer MKN45 tumor cells. And it also has obvious anti-tumor effect in vivo, which can inhibit tumor growth in vivo. The second part was the expression and purification of sTRAIL-iRGD fusion protein and its targeted antitumor effect. [objective] to study the effect of sTRAIL-iRGD fusion protein on apoptosis of gastric cancer cells by using prokaryotic expression system. The MKN45 subcutaneous tumor model of gastric cancer was treated in vivo to observe its inhibitory activity and its targeted penetration to tumor tissue. [methods] the purified protein was expressed by prokaryotic expression technique. Coomassie brilliant blue staining and Western Blot method were used to determine the expression of corresponding proteins; flow cytometry and MTT methods were used to determine the effect of corresponding proteins on apoptosis of gastric cancer cell line. Intraperitoneal injection of sTRAIL-iRGD fusion protein was used to determine the distribution of sTRAIL-iRGD fusion protein in tumor tissue and apoptosis of tumor tissue. [results] sTRAIL-iRGD fusion protein was expressed in cells. Three-dimensional cell culture model and tumor tissue showed obvious anti-tumor effect, in gastric cancer cell MKN45 subcutaneous tumor model, the fusion protein of STRAIL-iRGD showed obvious targeting and penetration after injection through tail vein. There was significant difference in tumor diameter between the treatment group and the control group. [conclusion] the fusion protein sTRAIL-iRGD can be expressed and purified by prokaryotic expression system. The fusion protein sTRAIL-iRGD can significantly promote the apoptosis of gastric cancer cells, and it has obvious targeting effect in the body, it can effectively inhibit the growth of tumor cells, and does not affect other tissues and organs.
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R735.2

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