本文選題：miR-664　切入點(diǎn)：骨肉瘤細(xì)胞　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：研究背景：骨肉瘤(Osteosarcoma, OS)是主要發(fā)病于兒童和青少年且發(fā)病率最高的原發(fā)性惡性骨腫瘤。目前應(yīng)用手術(shù)、化療以及放療等傳統(tǒng)治療仍有很多病例會(huì)出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,以肺轉(zhuǎn)移最常見,轉(zhuǎn)移患者存活率仍然較低,骨肉瘤的轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā)是影響患者存活率的主要影響因素。因此有必要深入探究骨肉瘤發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移的機(jī)制,通過發(fā)現(xiàn)新的治療手段抑制腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移以提高骨肉瘤患者的存活率。但骨肉瘤轉(zhuǎn)移是涉及腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲為主的多因素、多階段的復(fù)雜環(huán)節(jié),受到多個(gè)促腫瘤轉(zhuǎn)移癌基因的調(diào)控,目前其轉(zhuǎn)移相關(guān)的分子機(jī)制仍未闡明。miRNA是一類主要存在真核生物中長約18-25個(gè)堿基的的非編碼的RNA分子,通過與靶基因的3'UTR堿基互補(bǔ)配對(duì)直接抑制mRNA的轉(zhuǎn)錄或蛋白質(zhì)翻譯,在基因轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控中發(fā)揮著重要的作用。目前研究發(fā)現(xiàn)miRNA與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),通過調(diào)控不同的靶基因促進(jìn)或抑制腫瘤發(fā)生、增殖、轉(zhuǎn)移、分化、凋亡以及血管生成的過程。越來越多的研究表明,一些miRNA在骨肉瘤患者中表達(dá)異常,調(diào)控著骨肉瘤細(xì)胞的發(fā)生、增殖、轉(zhuǎn)移、凋亡等生物學(xué)行為�；蛐酒Y查發(fā)現(xiàn)miR-664在骨肉瘤中過表達(dá)并與骨肉瘤患者的存活率相關(guān),但在骨肉瘤的轉(zhuǎn)移和侵襲中miR-664是否發(fā)揮著某種作用以及相應(yīng)的靶基目前尚不清楚。研究目的：一、選取不同株的人骨肉瘤細(xì)胞株以及骨肉瘤組織標(biāo)本,探究：1、骨肉瘤細(xì)胞株相對(duì)于正常人成骨細(xì)胞株miR-664的表達(dá)水平；2、骨肉瘤組織相對(duì)于癌旁組織miR-664的表達(dá)水平。二、構(gòu)建miR-664 mimic、miR-664 inhibitor、miR-664 negative control質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染進(jìn)入MG-63骨肉瘤細(xì)胞株,建立穩(wěn)定過表達(dá)或低表達(dá)miR-664的細(xì)胞株,利用Transwell趨化、侵襲實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)探究：1、轉(zhuǎn)染miR-664 mimic質(zhì)粒相對(duì)于miR-664 negative control質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的MG-63骨肉瘤細(xì)胞株中骨肉瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力；2、轉(zhuǎn)染miR-664 inhibitor質(zhì)粒相對(duì)于miR-664 negative control質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的MG-63骨肉瘤細(xì)胞株中骨肉瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力。三、利用生物信息學(xué)方法預(yù)測：1、miR-664作用的靶基因；2、檢測所篩選的miR-664靶基因的生物學(xué)功能及可能的作用信號(hào)通道。研究方法：1、骨肉瘤細(xì)胞培養(yǎng)人骨肉瘤細(xì)胞株SOSP-9607、U2-OS、SAOS-2、HOS、MG-63采用含100U/ml青霉素和1 00U/ml鏈霉素的10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng),人成骨細(xì)胞株hFOB1.19采用DMEM/F12培養(yǎng)基,在37℃、5%CO2、飽和濕度的條件下傳代培養(yǎng),細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)用于實(shí)驗(yàn),2-3天換液一次,根據(jù)細(xì)胞的密度傳代。2、骨肉瘤組織標(biāo)本收集8例骨肉瘤癌組織和對(duì)應(yīng)癌旁組織(adjacent noncancerous tissues, TAT)均來源于湖南省郴州市第一人民醫(yī)院及廣東省韶關(guān)市粵北人民醫(yī)院標(biāo)本庫,所有標(biāo)本均為活體組織取下后即放于液氮中保存直至使用。所有患者均經(jīng)病理學(xué)檢查確診為骨肉瘤,尚未接受放化療治療。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),所有患者均簽署知情同意書。3、RNA抽提與熒光定量PCR分別利用mirVana miRNA抽提試劑盒從培養(yǎng)的細(xì)胞和新鮮切除的骨肉瘤組織中抽提RNA,利用Taqman miRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA, miR-664的表達(dá)水平通過miRNA特異性的TaqMan MicroRNA試劑盒,使用ABI公司的7500 Real-time PCR儀進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng),檢測各模板的Ct值(C為cycle,T為threshold),每個(gè)樣品重復(fù)3次,陰性對(duì)照采用DNase/RNase-free water為模板,通過相對(duì)定量以Folds=2-ΔΔCt值代表基因的相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度,公式如下：-ΔΔCt=2-lCt(miR-664)-Ct(U6)]4、Western blot提取細(xì)胞內(nèi)總蛋白,采用考馬斯亮藍(lán)法對(duì)蛋白進(jìn)行濃度測定。采用SDS-PAGE對(duì)蛋白電泳、轉(zhuǎn)膜后,用5%脫脂牛奶封閉,加入SOX7一抗、相應(yīng)的二抗,顯影和定影。使用a-tubulin作為內(nèi)參。5、細(xì)胞的轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)染前24h,將MG-63細(xì)胞用0.25%胰酶消化離心計(jì)數(shù)后,將細(xì)胞密度調(diào)整至5×105/ml,將各組(miR-664 mimic、miR-664 inhibitor、miR-664 negative control)5μg重組質(zhì)粒與lipofectamine 2000混合,輕輕混勻后室溫孵育20min,加入到已經(jīng)接種細(xì)胞的6孔板內(nèi),37℃、5%CO2飽和濕度下的培養(yǎng)箱中孵育6h,將培養(yǎng)基更換為含10%胎牛血清的完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)。培養(yǎng)48h后抽提細(xì)胞總RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,熒光定量PCR檢測瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后各組miR-664的表達(dá),6、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)劃痕實(shí)驗(yàn)前48h,將細(xì)胞密度調(diào)整至5×105/ml,接種單細(xì)胞懸液于六孔板中培養(yǎng)24h,使細(xì)胞的密度達(dá)到約90-95%后將細(xì)胞培養(yǎng)上清吸出,再更換無血清的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞24h,使用20μl無菌的加樣槍頭在每孔中長滿細(xì)胞的單細(xì)胞層中輕輕并迅速地劃1-2道痕,用新鮮的無菌PBS沖洗板1次除去上清中漂浮的細(xì)胞并更換新鮮的完全培養(yǎng)基。分別在0h與24h時(shí)間點(diǎn)在顯微鏡下拍照。測量劃痕兩側(cè)細(xì)胞之間的距離,每組設(shè)平行3個(gè)孔,計(jì)算0h的最大劃痕與24h測劃痕距離,計(jì)算不同組細(xì)胞劃痕修復(fù)的速度,計(jì)算三個(gè)孔的平均值。7、ELISA試劑盒說明書的說明,將標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水稀釋到指定的濃度,將待檢測的上清樣品用sample diluent稀釋。計(jì)算好總的樣本數(shù)(包括標(biāo)準(zhǔn)品孔、空白孔、以及樣品孔,其中樣品孔每個(gè)樣品做相應(yīng)的復(fù)孔),取出已經(jīng)包被好MMP9的96孔板,分別每孔加入100μl標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,空白孔加入相應(yīng)量的樣品稀釋液,而后加入50μl稀釋好的一抗,37℃孵育2h,用washing buffer洗5次,每次1-2min；分別每孔加入100μl稀釋好的二抗,室溫孵育30min后用washing buffer洗三次,每次3min。加入底物TMB,每孔100μl,顯色15min后,每孔加入100μl終止液；450nm吸收波長測吸光值,計(jì)算細(xì)胞因子的相對(duì)濃度。8、骨肉瘤3D培養(yǎng)模型將細(xì)胞濃度調(diào)整至2×105/ml。將Matrigel膠完全覆蓋24孔板底時(shí),將24孔培養(yǎng)板置于37℃培養(yǎng)箱中約1h,待Matrigel膠重新凝固；將細(xì)胞懸液加入其中,置于37℃,5%CO2飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10天,10天內(nèi)每隔2天在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài),并拍攝相應(yīng)的照片。9、Transwell小室趨化和侵襲實(shí)驗(yàn)接種1.0×104個(gè)細(xì)胞于Transwell小室中,將50μl稀釋好的Matrigel基質(zhì)膠均勻鋪于Transwell小室底部,37℃培養(yǎng)箱中放置3h。將各組MG-63骨肉瘤細(xì)胞接種前12h用無血清DMEM培養(yǎng)以去除血清對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。小室內(nèi)加入200μl的無血清的DMEM培養(yǎng)基,于transwell小室下腔加入500gl含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)24h。然后從24孔板中取出Transwell、室,1×PBS輕輕沖洗3次,用棉簽擦盡小室內(nèi)的細(xì)胞,然后將小室置于1%多聚甲醛中固定10min,取出小室放入蘇木精中浸泡,染色5min。沿小室底部邊緣剪下濾膜,顯微鏡下觀察穿透濾膜或Matrigel膠的細(xì)胞,于200倍光學(xué)顯微鏡下計(jì)數(shù)5個(gè)視野的細(xì)胞,取平均值,重復(fù)計(jì)數(shù)3次。10、生物信息學(xué)預(yù)測利用TargetScan (http://www.targetscan.org) miRNA靶基因預(yù)測的生物信息學(xué)網(wǎng)站中對(duì)miR-664的靶基因進(jìn)行分析預(yù)測,分析顯示SOX7可能是miR-664潛在作用的靶基因。11、熒光素報(bào)告酶系統(tǒng)檢測由廣州復(fù)能基因有限公司合成重組質(zhì)粒pGL3-SOX73'UTR,將miR-664mimic、inhibitor、negative control、mut與pGL3-SOX73'UTR共同轉(zhuǎn)染進(jìn)入MG-63骨肉瘤細(xì)胞。轉(zhuǎn)染48h后吸去上清中的培養(yǎng)基,用PBS清洗2次,每孔加入100μl Passive Lysis Buffer,室溫輕輕振蕩,裂解15min,先用GloMax生物發(fā)光檢測儀讀取細(xì)胞裂解后的背景值,每孔加入100μl luciferase底物,渦旋振蕩混勻,讀取相應(yīng)的值,每孔加入100μlStop Reagent,振蕩混勻后,測定各組熒光值。12、siNRA轉(zhuǎn)染為進(jìn)一步明確miR-664是否通過SOX7進(jìn)行調(diào)控骨肉瘤MG-63細(xì)胞侵襲遷移能力,我們利用SOX7 siRNA干擾SOX7的表達(dá)并進(jìn)一步利用Transwell趨化、侵襲實(shí)驗(yàn)觀察低表達(dá)SOX7對(duì)MG-63骨肉瘤侵襲遷移能力的影響。SOX7siRNA#1及SOX7 siRNA#2由廣州銳博生物科技有限公司合成并純化,序列如下：SOX7 siRNA#1:TCTTGCTACAAAGCCTAAGTG SOX7 siRNA#2:TTGTCCATCCGACAGCTCGGC選MG-63 inhibitor組進(jìn)行轉(zhuǎn)染,方法如步驟5所述,分為MG-63 miR-664 inhibitor+NC、MG-63-miR-664 inhibitor+SOX7 siRNA#1、MG-63-miR-664 inhibitor+SOX7 siRNA#2三組。13、Western blot檢測SOX7 siRNA干擾后SOX7表達(dá)轉(zhuǎn)染48小時(shí)后收集各組細(xì)胞并應(yīng)用Western blot檢測SOX7蛋白水平,方法如步驟4所述。14、siRNA干擾后transwell趨化、侵襲實(shí)驗(yàn)取NC組、SOX7 siRNA#1組及SOX7 siRNA#2組MG-63骨肉瘤細(xì)胞進(jìn)行Transwell趨化、侵襲實(shí)驗(yàn),方法如步驟9所述。15、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法各骨肉瘤細(xì)胞株與人成骨細(xì)胞株hFOB1.19 miR-664的表達(dá),mimic組與NC組、inhibitor組與NC組SOX7、β-catenin及MMP7蛋白的表達(dá),NC組與mimic組、NC組與inhibitor組,NC組與mut組熒光酶活性涉及的兩組數(shù)據(jù)之間的比較采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn),P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；mimic組與NC組、inhibitor組與NC組、mut組與NC組的MMP9表達(dá)涉及的兩組數(shù)據(jù)之間的比較采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn),P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；siRNA#1組與NC組、siRNA#2組與NC組的SOX7蛋白表達(dá)、Transwell趨化實(shí)驗(yàn)、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)中涉及的兩組數(shù)據(jù)之間的比較采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn),P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。利用雙變量分析組織中miR-664與SOX7表達(dá)的相關(guān)性。研究結(jié)果：1、miR-664在骨肉瘤細(xì)胞株和骨肉瘤組織中的表達(dá)水平顯著上調(diào)相較于對(duì)照組人成骨細(xì)胞株hFOB1.19細(xì)胞株,miR-664在5種骨肉瘤細(xì)胞株中(HOS、SAOS-2、SOSP-9607、MG-63和U2-OS)均顯著表達(dá)上調(diào)(P0.05),8例骨肉瘤組織標(biāo)本中的miR-664表達(dá)顯著高于對(duì)應(yīng)的癌旁組織(P0.05)。2、miR-664過表達(dá)可提高M(jìn)G-63骨肉瘤細(xì)胞在體外的遷移和侵襲能力轉(zhuǎn)染miR-664 mimic后MG-63骨肉瘤細(xì)胞miR-664的表達(dá)增高了17.998倍(P0.05)。Transwell小室遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)顯示無論上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜或Matrigel膠相隔,mimic組穿透濾膜或Matrigel膠的染色細(xì)胞均較NC組顯著增加(P0.05)。利用Matrigel膠建立骨肉瘤細(xì)胞3D培養(yǎng)的結(jié)果顯示mimic組MG-63骨肉瘤細(xì)胞在10天的培養(yǎng)過程中逐漸生成無極性球狀細(xì)胞克隆,隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長細(xì)胞克隆表面開始伸出絲狀偽足,而NC組的細(xì)胞3D培養(yǎng)下的形態(tài)生成較小的球狀克隆及形成較少的絲狀偽足。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示mimic組的MG-63骨肉瘤細(xì)胞劃痕修復(fù)速度顯著快于NC組(P0.05)。3、下調(diào)miR-664可以降低MG-63骨肉瘤細(xì)胞在體外的遷移和侵襲能力轉(zhuǎn)染miR-664 inhibitor后MG-63骨肉瘤細(xì)胞miR-664的表達(dá)降低了78.7%(P0.05)。Transwell小室遷移和侵襲的實(shí)驗(yàn)顯示無論上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜或Matrigel膠相隔,inhibitor組穿透濾膜或Matrigel膠的染色細(xì)胞較NC組顯著減少(P0.05)。利用Matrigel膠建立骨肉瘤細(xì)胞3D培養(yǎng)的結(jié)果顯示inhibitor組MG-63骨肉瘤細(xì)胞在10天的培養(yǎng)過程中生成無極性球狀細(xì)胞克隆較NC組小且無明顯絲狀偽足。細(xì)胞劃痕的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示inhibitor組MG-63骨肉瘤細(xì)胞劃痕修復(fù)速度顯著慢于NC組(P0.05)。4、SOX7基因是miR-664直接作用的靶基因我們利用TargetScan (http://www.targetscan.org) miRNA靶基因預(yù)測的生物信息學(xué)網(wǎng)站對(duì)miR-664的靶基因進(jìn)行分析預(yù)測,根據(jù)miRNA與靶基因3’UTR不完全配對(duì)的原則分析顯示SOX7可能是miR-664潛在作用的靶基因。分別檢測mimic組、inhibitor組及NC組MG-63骨肉瘤細(xì)胞中SOX7、β-catenin及MMP7蛋白的表達(dá)水平。Western blot結(jié)果顯示,與NC組相比mimic組中的SOX7蛋白表達(dá)顯著下降(P0.05),而β-catenin、MMP7蛋白表達(dá)顯著上升(P0.05)；inhibitor組SOX7蛋白表達(dá)量顯著上升(P0.05),而β-catenin、MMP7蛋白表達(dá)顯著下降(P0.05)。為進(jìn)一步驗(yàn)證SOX7的3'UTR是否具有miR-664結(jié)合的位點(diǎn),構(gòu)建SOX7蛋白的3’UTR部分序列表達(dá)載體pGL3-SOX73'UTR,將其分別與miR-664 mimic、inhibitor negative control及mut共同轉(zhuǎn)染到MG-63骨肉瘤細(xì)胞中,利用pGL3熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)監(jiān)測miR-664是否與SOX7蛋白相結(jié)合。與NC組相比,將pGL3-SOX73'UTR與miR-664 mimic共轉(zhuǎn)染可顯著降低熒光素酶的活性(P0.05),將pGL3-SOX73'UTR與miR-664 inhibitor共轉(zhuǎn)染可顯著增強(qiáng)熒光素酶的活性(P0.05),而將pGL3-SOX73'UTR與miR-664 mut或miR-664 negative control共轉(zhuǎn)染均不能改變熒光素酶的活性(P0.05),提示miR-664與SOX7'3UTR可特異性結(jié)合,即SOX7是miR-664的靶基因。ELISA結(jié)果顯示與NC組相比mimic組中的MMP9表達(dá)顯著上升(P0.05),而inhibitor組MMP9表達(dá)顯著下降(P0.05)。5、抑制SOX7表達(dá)促進(jìn)MG-63骨肉瘤細(xì)胞在體外的遷移和侵襲為了進(jìn)一步驗(yàn)證SOX7在骨肉瘤體外的遷移和侵襲中的功能,我們?cè)趇nhibitor組MG-63骨肉瘤細(xì)胞株中利用siRNA干擾SOX7的表達(dá),Transwell小室趨化、侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,相對(duì)于NC組,siRNA干擾后骨肉瘤細(xì)胞MG-63的遷移和侵襲能力顯著增強(qiáng)(P0.05),兩種siRNA均對(duì)骨肉瘤細(xì)胞的遷移和侵襲具有顯著的促進(jìn)作用。6、miR-664與SOX7基因表達(dá)在骨肉瘤病人組織中的相關(guān)性分析熒光定量PCR的結(jié)果顯示,6例骨肉瘤病人組織中miR-664相對(duì)于癌旁組織的表達(dá)顯著上調(diào)。相對(duì)于癌旁組織中,SOX7在骨肉瘤病人組織中的含量顯著下調(diào)。接下來我們對(duì)6例骨肉瘤組織和2例癌旁組織中miR-664表達(dá)水平與SOX7作相關(guān)性分析,統(tǒng)計(jì)學(xué)的結(jié)果顯示miR-664的表達(dá)水平與SOX7呈負(fù)相關(guān)的線性關(guān)系(r=-0.91,P0.05)。結(jié)論：1、miR-664在骨肉瘤細(xì)胞株和組織中表達(dá)水平顯著上調(diào)；2、過表達(dá)miR-664顯著促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞株的遷移和侵襲；3、SOX7是miR-664作用的一個(gè)靶基因,抑制SOX7可顯著促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞在體外的遷移和侵襲；4、miR-664和SOX7在骨肉瘤病人組織中的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)性；5、SOX7可能通過調(diào)控Wnt/β-catenin信號(hào)通路影響骨肉瘤細(xì)胞在體外的遷移和侵襲能力。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R738.1

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4 鄭進(jìn)佑;;骨肉瘤的現(xiàn)代外科治療概況[A];全國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)骨傷科專業(yè)委員會(huì)第十二次學(xué)術(shù)年會(huì)浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)骨傷科專業(yè)委員會(huì)第十次學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2004年

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6 汪偉;陳文直;周潔敏;白玲;劉文英;葉慧義;;高強(qiáng)度聚焦超聲治療骨肉瘤的臨床應(yīng)用研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)超聲醫(yī)學(xué)新進(jìn)展學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

7 曹慶選;李文華;曹來賓;夏寶樞;;中藥治愈骨肉瘤的中醫(yī)研究與影像學(xué)對(duì)照[A];第十次全國中西醫(yī)結(jié)合影像學(xué)術(shù)研討會(huì)暨全國中西醫(yī)結(jié)合影像學(xué)研究與診斷學(xué)習(xí)班資料匯編[C];2009年

8 王英;肖艦;陳曉華;;骨肉瘤病人癌性疼痛的護(hù)理體會(huì)[A];全國腫瘤護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會(huì)議論文匯編[C];2003年

9 陳秋;王達(dá)輝;閔若良;馬巍;;大段異體骨治療兒童骨肉瘤的初步應(yīng)用[A];2005'中國修復(fù)重建外科論壇論文匯編[C];2005年

10 劉巧慧;韓莎莎;;骨肉瘤保肢患者的心理護(hù)理[A];全國外科、神經(jīng)內(nèi)外科護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會(huì)議論文匯編[C];2006年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前1條

1 張中橋;骨肉瘤病理基礎(chǔ)與其MRI表現(xiàn)[N];中國醫(yī)藥報(bào);2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 劉義慶;雄烯二酮衍生物DSTD誘導(dǎo)骨肉瘤細(xì)胞自噬和減輕其耐藥性的研究[D];山東大學(xué);2015年

2 尚永軍;TIM-3在骨肉瘤侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及機(jī)制研究[D];延邊大學(xué);2015年

3 禚文昆;MiR-20a調(diào)節(jié)EGR2對(duì)骨肉瘤的影響[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

4 高琰;CD44在卵巢癌/骨肉瘤進(jìn)展中的作用及上轉(zhuǎn)換納米逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥的研究[D];鄭州大學(xué);2016年

5 趙加力;B7-H3在骨肉瘤微環(huán)境中的表達(dá)及其作用機(jī)制[D];蘇州大學(xué);2016年

6 林博川;MicroRNA-184在骨肉瘤阿霉素耐藥中的功能與機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

7 包擁政;miR-664調(diào)控靶基因SOX7促進(jìn)MG-63骨肉瘤細(xì)胞體外侵襲和遷移機(jī)理研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

8 陳斌;miR-664下調(diào)靶基因FOXO4促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞惡性增殖及機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

9 閆廣寧;骨肉瘤干細(xì)胞自我更新的調(diào)控機(jī)制及意義[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2016年

10 程思;S100A9在骨肉瘤中的表達(dá)和對(duì)骨肉瘤功能作用的影響及相關(guān)機(jī)制的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 關(guān)國鋒;CXCR4靶點(diǎn)近紅外光學(xué)分子成像檢測骨肉瘤原位及肺轉(zhuǎn)移腫瘤病灶的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 王志濤;CD44s、CD44v6及CD44v9在骨肉瘤、骨巨細(xì)胞瘤及骨軟骨瘤標(biāo)本的表達(dá)及臨床意義[D];吉林大學(xué);2016年

3 榮小麗;LIMK1基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染骨肉瘤耐藥細(xì)胞系的建立及其增殖侵襲能力的研究[D];吉林大學(xué);2016年

4 關(guān)紅亞;miR-192靶向TCF7基因?qū)侨饬黾?xì)胞增殖和侵襲的抑制作用[D];鄭州大學(xué);2016年

5 閆紅衛(wèi);骨肉瘤臨床診治的影像學(xué)檢查優(yōu)化探討[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2016年

6 劉京偉;小兒長管骨骨毮炎與骨肉瘤影像學(xué)對(duì)比研究[D];山東大學(xué);2016年

7 王坤;GRM4基因多態(tài)性與骨肉瘤的遺傳易感性及臨床病理特征的相關(guān)性研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2016年

8 王汀;骨肉瘤治療研究進(jìn)展[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

9 杜飛舟;骨肉瘤~（31）P磁共振波譜研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2008年

10 張波;43例骨肉瘤患者預(yù)后的多因素分析[D];浙江大學(xué);2010年

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本文編號(hào)：1677613