本文選題：口腔鱗狀細(xì)胞癌　切入點(diǎn)：前列腺素E2　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：口腔鱗狀細(xì)胞癌(Oral Squamous Cell Carcinoma,OSCC)是臨床上常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率在全球呈現(xiàn)逐年上升的趨勢。在過去的20年中,盡管針對(duì)OSCC的治療方法不斷發(fā)展,但OSCC的五年生存率無明顯改善,因此發(fā)病機(jī)制、診斷及治療仍是OSCC的研究熱點(diǎn)。近年來,腫瘤微環(huán)境中炎癥與惡性腫瘤關(guān)系的研究備受關(guān)注,尤其是環(huán)氧化酶(Cyclooxygenase,COX)通路在介導(dǎo)炎癥和癌癥關(guān)系中的作用值得深入探究。研究表明,COX-2過表達(dá)與口腔癌的發(fā)生、侵襲以及化療藥物的耐藥性相關(guān),而針對(duì)COX-2的非類固醇消炎藥(Nonsteroidal anti-inflammatory drugs,NSAIDs)可以抑制惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展,但它的長期使用會(huì)產(chǎn)生諸多副作用如胃潰瘍和心肌梗死等,臨床應(yīng)用受限。前列腺素E2(Prostaglandin E2,PGE2)是COX-2通路的下游產(chǎn)物。研究表明,PGE2能促進(jìn)多種惡性腫瘤的增殖及侵襲,其機(jī)制可能為抑制局部免疫反應(yīng)。然而,PGE2及其受體4亞型(E-prostaglandin,EP4)對(duì)OSCC生物學(xué)特性的影響及機(jī)制尚未完全明了。為此,我們通過在OSCC細(xì)胞株中外源性添加PGE2及相應(yīng)的拮抗劑來研究PGE2對(duì)OSCC細(xì)胞增殖及凋亡的影響并探討其可能的機(jī)制,從而尋找OSCC治療的潛在靶點(diǎn)。(1)我們采用cellcounting kit 8(CCK8)法檢測外源源性PGE2對(duì)OSCC細(xì)胞株Tca8113增殖活性的影響,發(fā)現(xiàn)在作用48 h時(shí),PGE2能顯著地促進(jìn)細(xì)胞增殖,效應(yīng)呈現(xiàn)劑量依賴趨勢,且在PGE2濃度為1.0μmol/L時(shí)出現(xiàn)峰值。(2)采取Western-blot(WB)的方法研究PGE2促Tca8113細(xì)胞增殖的作用機(jī)制,我們發(fā)現(xiàn),外源性添加PGE2可激活ERK的磷酸化,而磷酸化過程可被MEK的抑制劑U0126拮抗;通過CCK8檢測Tca8113細(xì)胞增殖,我們發(fā)現(xiàn),外源性的U0126能拮抗PGE2對(duì)Tca8113細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用;上述結(jié)果表明PGE2可通過激活ERK的磷酸化促進(jìn)Tca8113細(xì)胞的增殖。(3)WB法檢測顯示,4種類型的EP受體在Tca8113細(xì)胞中均有表達(dá)。(4)為確定與PGE2結(jié)合的EP受體類型,我們分別加入EP1、EP2及EP4受體拮抗劑,結(jié)果表明,EP4拮抗劑L-161,982可拮抗PGE2對(duì)Tca8113細(xì)胞的增殖作用,并呈現(xiàn)劑量和時(shí)間依賴性;進(jìn)一步采用WB法檢測,我們發(fā)現(xiàn),L-161,982通過抑制PGE2對(duì)ERK磷酸化的促進(jìn)作用,從而發(fā)揮拮抗作用,這也同樣驗(yàn)證了 PGE2是通過激活ERK的磷酸化來促進(jìn)細(xì)胞增殖。(5)為了進(jìn)一步驗(yàn)證PGE 2是否通過結(jié)合受體EP4而起作用,我們在細(xì)胞中加入3種類型的EP受體激動(dòng)劑,結(jié)果發(fā)現(xiàn),僅有EP4激動(dòng)劑PGE1-OH可以恢復(fù)被塞來昔布預(yù)處理的Tca8113細(xì)胞的增殖,并具有濃度依賴性趨勢;進(jìn)一步采用WB法,我們發(fā)現(xiàn),PGE1-OH通過激活ERK磷酸化來促進(jìn)細(xì)胞增殖,而MEK的抑制劑U0126可抑制此作用,提示PGE2可能通過結(jié)合受體EP4來促進(jìn)細(xì)胞增殖的。(6)流式細(xì)胞儀檢測顯示,L-161,982可以誘導(dǎo)Tca8113細(xì)胞凋亡,并通過阻斷s期來影響細(xì)胞周期,其作用具有濃度依賴趨勢;WB法進(jìn)一步檢測發(fā)現(xiàn),L-161,982通過上調(diào)Bax和下調(diào)Bcl-2蛋白水平來誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,同時(shí)通過上調(diào)P21和下調(diào)CDK2及CyclinA2的蛋白表達(dá)影響細(xì)胞周期。綜上所述,本研究發(fā)現(xiàn)PGE2可通過結(jié)合受體EP4來介導(dǎo)ERK磷酸化誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖,并影響細(xì)胞凋亡及周期,因此,EP4受體可能成為OSCC的治療靶點(diǎn)。
[Abstract]:Oral squamous cell carcinoma (Oral Squamous Cell Carcinoma, OSCC) is one of the common malignant tumor, its incidence shows a rising trend in the world. In the past 20 years, although the treatment method for the continuous development of OSCC, but the five year survival rate of OSCC without obvious improvement, so the pathogenesis. Study on the diagnosis and treatment of OSCC is still hot. In recent years, the research of inflammation and tumor in the tumor microenvironment has attracted much attention, especially cyclooxygenase (Cyclooxygenase, COX) pathway mediated role in the relationship between inflammation and cancer in the intermediate value to explore. The research results show that the overexpression of COX-2 and oral cancer development, invasion the related and drug resistance, and for non steroidal anti-inflammatory drugs (COX-2 Nonsteroidal anti-inflammatory drugs, NSAIDs) can inhibit the occurrence and development of malignant tumors, but its long-term use will have many Side effects such as gastric ulcer and myocardial infarction, clinical application of prostaglandin E2 (Prostaglandin E2 limited., PGE2) is the downstream products of the COX-2 pathway. The results show that PGE2 can promote the proliferation and invasion of malignant tumors, the possible mechanism is inhibiting the local immune response. However, PGE2 and its receptor subtype 4 (E-prostaglandin, EP4) influence on the biological characteristics of OSCC and the mechanism is not yet fully understood. Therefore, we passed in OSCC cells by exogenous addition of PGE2 antagonists and corresponding to the effects of PGE2 on proliferation and apoptosis of OSCC cells and to explore its possible mechanism, in order to find a potential target for the treatment of OSCC. (1) we use cellcounting kit 8 (CCK8) effect analysis of exogenous derived PGE2 on proliferation of Tca8113 OSCC cells, found in 48 h, PGE2 can significantly promote cell proliferation, the effect showed a dose dependent trend, and concentrated in PGE2 As the peak of 1 mol/L. (2) to Western-blot (WB) mechanism, study the method of PGE2 to promote the proliferation of Tca8113 cells we found that exogenous addition of PGE2 can activate the phosphorylation of ERK and phosphorylation by MEK inhibitor U0126 antagonized by CCK8; proliferation of Tca8113 cells was detected, we found that exogenous U0126 can promote the role of antagonist PGE2 on the proliferation of Tca8113 cells; the results show that PGE2 can be activated by phosphorylation of ERK promote the proliferation of Tca8113 cells. (3) WB assay showed that the 4 types of EP receptors were expressed in Tca8113 cells. (4) to determine the binding of EP and PGE2 receptor types, we added EP1, EP2 and EP4 receptor antagonist, the results show that the EP4 antagonist L-161982 can antagonize the effect of PGE2 on proliferation of Tca8113 cells, and showed a dose and time dependent; further with WB assay, we found that L-161982 PGE2 inhibition of ERK phosphorylation promotes, and thus play antagonism, it also proves that PGE2 is to promote cell proliferation by activating the phosphorylation of ERK. (5) in order to verify whether PGE 2 act by binding to the receptor EP4 in the cell, we added 3 types of EP receptor agonists the results, found that only EP4 agonist PGE1-OH can be recovered by celecoxib pretreatment of the proliferation of Tca8113 cells in a concentration dependent manner; further using WB method, we found that PGE1-OH through activation of ERK phosphorylation to promote cell proliferation, while MEK inhibitor U0126 inhibited this effect, suggesting that PGE2 might to promote cell proliferation by binding to a receptor of EP4. (6) flow cytometry showed that L-161982 could induce apoptosis of Tca8113 cells, and by blocking s can influence the cell cycle, and its effect is concentration dependent trend; WB method Found a step detection, L-161982 through upregulation of Bax and downregulation of Bcl-2 protein levels to induce cell apoptosis, and expression of cell cycle effects through upregulation of P21 and downregulation of CDK2 and CyclinA2 protein. In summary, this study found that PGE2 by combining the receptor EP4 mediated ERK phosphorylation induced cell proliferation, apoptosis and cell cycle and influence therefore, the EP4 receptor may become a therapeutic target for OSCC.

【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R739.8

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李羽安,郭傳tx;口腔鱗狀細(xì)胞癌患者患源性診斷延誤相關(guān)因素的回顧性研究[J];現(xiàn)代口腔醫(yī)學(xué)雜志;2003年04期

2 王新勇;口腔鱗狀細(xì)胞癌18例病理分析[J];山東醫(yī)藥;2004年26期

3 王雷;高文信;馬寧;;血管內(nèi)皮生長因子在口腔鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)[J];實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志;2008年03期

4 吳修胤;佟冬冬;張風(fēng)河;;微小RNA與口腔鱗狀細(xì)胞癌[J];生物醫(yī)學(xué)工程研究;2011年01期

5 馬開宇;馬開陽;黎明;代曉明;李逸松;;基于形態(tài)學(xué)特征提取的人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)在口腔鱗狀細(xì)胞癌診斷中的應(yīng)用[J];昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2012年01期

6 �；刍�;劉洋;周晶琳;;口腔鱗狀細(xì)胞癌機(jī)制研究[J];微量元素與健康研究;2013年01期

7 楊成;新生血管在口腔鱗狀細(xì)胞癌擴(kuò)散中的作用[J];國外醫(yī)學(xué).口腔醫(yī)學(xué)分冊;1996年06期

8 簡衛(wèi)國,李凌,武培敬;表皮生長因子受體在口腔鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義[J];臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志;1998年01期

9 趙世祿;程福強(qiáng);史繁華;;口腔鱗狀細(xì)胞癌臨床流行病學(xué)研究現(xiàn)狀[J];中國保健營養(yǎng);2013年07期

10 葉平,蔣澤先,張永福;口腔鱗狀細(xì)胞癌不同區(qū)域P~(53)和P~(21)表達(dá)差異[J];實(shí)用臨床醫(yī)學(xué);2001年04期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 高巍;郭傳tx;;口腔鱗狀細(xì)胞癌延誤診斷相關(guān)因素的前瞻性研究[A];第四屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

2 吳衍昌;李芳;;熱休克蛋白60在口腔鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義[A];第八次全國口腔頜面—頭頸腫瘤會(huì)議論文匯編[C];2009年

3 張強(qiáng);張永福;卓夏陽;賈云香;;口腔鱗狀細(xì)胞癌不同區(qū)域病理分級(jí)及增殖活性的差異[A];第一屆全國口腔頜面部腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

4 僗承翰;林美灄;戴鑓;_5正琪;;發(fā)展奈米金結(jié)合傳統(tǒng)化療藥物以抑制口腔鱗狀細(xì)胞癌之協(xié)同療法(英文)[A];2013第七屆海峽兩岸毒理學(xué)研討會(huì)大會(huì)手冊[C];2013年

5 吳洪儒;劉曉勇;王鳳光;汪育苗;;口腔鱗狀細(xì)胞癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移危險(xiǎn)因素的Logistic回歸分析[A];中華口腔醫(yī)學(xué)會(huì)第七屆全國口腔病理學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2006年

6 劉曉勇;吳洪儒;汪育苗;王鳳光;;口腔鱗狀細(xì)胞癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)因素的單因素分析[A];中華口腔醫(yī)學(xué)會(huì)第七屆全國口腔病理學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2006年

7 李明賀;張茹慧;吳國民;;CD44 podoplanin在口腔鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及其意義[A];第八次全國口腔頜面—頭頸腫瘤會(huì)議論文匯編[C];2009年

8 張曄;郭傳tx;俞光巖;;口腔鱗狀細(xì)胞癌脂肪酸代謝的初步研究[A];第一屆全國口腔頜面部腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

9 郭傳tx;李羽安;高巖;;口腔鱗狀細(xì)胞癌頸淋巴轉(zhuǎn)移特征再探討[A];海峽兩岸2008口腔癌診治與修復(fù)重建新進(jìn)展研討會(huì)論文集[C];2008年

10 張偉偉;熊學(xué)鵬;何三綱;張文峰;;≤40歲年輕女性口腔鱗狀細(xì)胞癌的臨床特點(diǎn)分析[A];第八次全國口腔頜面—頭頸腫瘤會(huì)議論文匯編[C];2009年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前1條

1 衣曉峰　喬蕤琳;哈醫(yī)大二院揭示口腔鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生機(jī)理[N];中國醫(yī)藥報(bào);2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 賴金火;Id1和NF-κB亞單位p65在口腔鱗狀細(xì)胞癌發(fā)病機(jī)制中的協(xié)同作用研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2014年

2 鄭建偉;口腔鱗狀細(xì)胞癌差異基因的篩選驗(yàn)證及相互作用的生物信息學(xué)分析[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

3 李怡寧;HIF-1α抑制劑PX-478在自噬介導(dǎo)的口腔鱗狀細(xì)胞癌糖基化中的研究[D];浙江大學(xué);2016年

4 李文鹿;Bit-1在口腔鱗狀細(xì)胞癌侵襲、轉(zhuǎn)移及凋亡中作用的初步研究[D];鄭州大學(xué);2016年

5 李曉暉;COX-2通路中PGE2-EP4對(duì)口腔鱗狀細(xì)胞癌生物學(xué)特性的作用及機(jī)制[D];南方醫(yī)科大學(xué);2017年

6 崔婧;口腔鱗狀細(xì)胞癌的生物信息學(xué)分析[D];山東大學(xué);2014年

7 孫曉菊;環(huán)氧合酶-2與口腔鱗狀細(xì)胞癌關(guān)系的初步研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2005年

8 吳國民;口腔鱗狀細(xì)胞癌腫瘤干細(xì)胞的分選和鑒定[D];吉林大學(xué);2011年

9 董作青;Id-1基因沉默抑制口腔鱗狀細(xì)胞癌生長轉(zhuǎn)移的研究[D];山東大學(xué);2010年

10 張曉英;Gadd45a在口腔鱗狀細(xì)胞癌預(yù)后及治療中的作用研究[D];山東大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 劉璽章;P-gp、HIF-1α在口腔鱗狀細(xì)胞癌癌組織中的表達(dá)和臨床意義[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2015年

2 馬賁;HPV感染對(duì)口腔鱗狀細(xì)胞癌朗格漢斯細(xì)胞數(shù)量的影響[D];佳木斯大學(xué);2015年

3 儲(chǔ)偉明;Neuropilin-1誘導(dǎo)口腔鱗狀細(xì)胞癌上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化及其機(jī)制的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

4 李姣;YAP、p53蛋白在口腔鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及其與細(xì)胞凋亡間相互關(guān)系[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

5 高前嵩;環(huán)氧合酶-2在口腔鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生過程中的表達(dá)和意義[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2016年

6 王潤;口腔鱗狀細(xì)胞癌及癌前病變中鉀離子通道Kv3.4的表達(dá)研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2016年

7 寧毅;Transformer 2β、RGS16蛋白在口腔鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

8 馬猛;谷胱甘肽在口腔鱗狀細(xì)胞癌Cal-27細(xì)胞系ROS抗化療機(jī)制中作用的研究[D];山東大學(xué);2016年

9 李瑾;Beclin1、LC3和P62在口腔鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義[D];鄭州大學(xué);2016年

10 萬瀟瀟;PIK3CA基因表達(dá)及SNPs在口腔鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的意義[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

，

本文編號(hào)：1675614