本文關(guān)鍵詞：化療聯(lián)合CIK細(xì)胞治療惡性腫瘤的相關(guān)研究及在卵巢癌臨床治療中的觀察，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《蘇州大學(xué)》 2014年

化療聯(lián)合CIK細(xì)胞治療惡性腫瘤的相關(guān)研究及在卵巢癌臨床治療中的觀察

徐梅  

【摘要】：卵巢癌發(fā)病隱匿，大部分患者就診時(shí)已經(jīng)是晚期，位居?jì)D科腫瘤患者致死首位。結(jié)腸癌的發(fā)病率和死亡率也位居消化系統(tǒng)腫瘤首位。因此，它們都迫切需要尋找更有效的治療手段。隨著腫瘤免疫學(xué)和分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，腫瘤免疫治療已成為腫瘤的第四大治療模式。細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（cytokine induced killer cells，CIK）兼具有強(qiáng)大的抗瘤活性和增殖活性，又具有非MHC限制性殺瘤的優(yōu)點(diǎn)，近些年已經(jīng)得到廣泛關(guān)注并應(yīng)用于多種實(shí)體瘤的臨床治療，但對(duì)卵巢癌治療報(bào)道少見。 本文首先通過體外實(shí)驗(yàn)研究順鉑（cis-Dichloro diamine in platinum，CDDP或DDP）、CIK細(xì)胞及其聯(lián)合對(duì)卵巢癌細(xì)胞株SKOV-3的殺傷效應(yīng)，接著通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究氟尿嘧啶（5-FU）、CIK細(xì)胞及其聯(lián)合對(duì)小鼠結(jié)腸癌移植瘤生長(zhǎng)的作用，初步探討其作用機(jī)制。最后，回顧分析本中心6例CIK細(xì)胞治療的卵巢癌患者臨床資料，初步探討CIK細(xì)胞治療卵巢癌的安全性及有效性，為卵巢癌探尋生物治療策略。 第一部分DDP聯(lián)合CIK細(xì)胞對(duì)卵巢癌細(xì)胞株SKOV-3的殺傷效應(yīng) 目的：探討DDP、CIK細(xì)胞及其聯(lián)合對(duì)卵巢癌細(xì)胞株SKOV-3的殺傷效應(yīng)并初步探討其機(jī)制。 方法：利用人外周血單核細(xì)胞（Peripheral Blood Mononuclear Cell，PBMC）在體外用多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)生成CIK細(xì)胞，于培養(yǎng)第0、7、14、21、28及35天進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)及流式細(xì)胞術(shù)分析CD3+CD56+雙陽(yáng)性細(xì)胞百分比；于培養(yǎng)14天收獲CIK細(xì)胞作為效應(yīng)細(xì)胞，用含有CIK細(xì)胞培養(yǎng)液上清的培養(yǎng)液培養(yǎng)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SKOV-3細(xì)胞，于培養(yǎng)24及48小時(shí)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)SKOV-3細(xì)胞的凋亡情況，同時(shí)設(shè)正常培養(yǎng)的SKOV-3細(xì)胞作對(duì)照組；殺傷實(shí)驗(yàn)分為Ａ1~4CIK細(xì)胞作用組（效靶比分別為5:1、10:1、20:1、40:1）、B1~7DDP作用組（DDP濃度分別為0.625、1.25、2.5、5、10、20、40μg/ml）及C1~2CIK聯(lián)合DDP作用組（DDP濃度均為2.5μg/ml，效靶比分別為5:1和10:1）。同時(shí)設(shè)效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞作對(duì)照孔。于24h和48h采用MTT法檢測(cè)各組對(duì)SKOV-3的生長(zhǎng)抑制效應(yīng)。 結(jié)果：CIK細(xì)胞體外培養(yǎng)第0、7、14、21、28及35天細(xì)胞計(jì)數(shù)依次為（1.8±0.2）×107、（14.67±1.53）×107、（230.0±20.0）×107、（225.0±22.91）×107及（220.0±17.32）×107，細(xì)胞數(shù)于培養(yǎng)第2l天時(shí)約增加127.78倍，達(dá)到增殖高峰；CD3+CD56+雙陽(yáng)性細(xì)胞的百分含量依次為（0.47±0.17）%、（11.30±1.96）%、（35.50±2.30）%、（38.23±1.92）%、（31.40±3.91）%和（28.61±3.45）%，到21天也達(dá)到增殖高峰；SKOV-3與CIK細(xì)胞培養(yǎng)液上清共培養(yǎng)24h及48h后凋亡率分別為（12.30±1.47）%和（27.13±2.03）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 0.05）。對(duì)照組24h及48h凋亡率分別為（0.62±0.35）%和（0.65±0.38）%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；Ａ1~4CIK作用組24h抑制率分別為（16.52±2.52）%、（24.18±4.05）%、（35.98±5.19）%及（53.98±5.02）%，48h抑制率分別為（24.20±5.59）%、（41.23±3.64）%、（57.27±6.68）%及（74.74±6.87）%。在相同時(shí)間各組間細(xì)胞抑制率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 0.05），相同效靶比24h和48h抑制率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 0.05）；CIK細(xì)胞對(duì)SKOV-3細(xì)胞的抑制率隨著效靶比的提高及作用時(shí)間的延長(zhǎng)而提高；B1~7DDP作用組24h抑制率分別為（15.09±4.03）%、（25.95±3.36）%、（37.11±3.05）%、（50.07±5.21）%、（62.93±5.85）%、（77.93±3.28）%及（92.55±1.39）%，48h抑制率分別增為（23.42±5.63）%、（32.39±1.47）%、（46.04±2.76）%、（60.46±3.26）%、（72.77±2.38）%、（86.42±1.46）%及（96.24±0.59）%。除外DDP0.625μg/ml組24h和48h抑制率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.102），其余各組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。DDP對(duì)SKOV-3細(xì)胞的抑制率也隨著藥物濃度的提高及作用時(shí)間的延長(zhǎng)而提高；C1~2CIK聯(lián)合DDP作用組24h抑制率分別為（50.50±3.69）%和（68.19±2.07）%，48h抑制率分別為（69.87±2.67）%和（80.11±6.87）%。CIK細(xì)胞聯(lián)合DDP與單一處理因素相比，對(duì)SKOV-3的生長(zhǎng)抑制率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但析因分析結(jié)果顯示，低劑量組（效靶比為5:1）24h和48h抑制率未見到協(xié)同效應(yīng)（P值分別為0.171和0.895），而高劑量組（效靶比為10:1）24h和48h抑制率見到協(xié)同效應(yīng)（P 0.05）。 結(jié)論：PBMC在體外經(jīng)多種細(xì)胞因子刺激誘導(dǎo)下可大量擴(kuò)增獲得CIK細(xì)胞，其主要效應(yīng)細(xì)胞（CD3+CD56+CIK）在第14~21天為高表達(dá)平臺(tái)期，在此期間可獲得較為理想的效應(yīng)細(xì)胞；CIK細(xì)胞可通過分泌細(xì)胞因子并誘導(dǎo)卵巢癌SKOV-3細(xì)胞凋亡發(fā)揮較強(qiáng)的殺傷作用；聯(lián)合CIK細(xì)胞治療可明顯增強(qiáng)DDP對(duì)卵巢癌SKOV-3細(xì)胞的殺傷作用。 第二部分氟尿嘧啶聯(lián)合CIK細(xì)胞在小鼠結(jié)腸癌模型體內(nèi)抗腫瘤效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究 目的：探討氟尿嘧啶（fluorouracil，5-FU）、CIK細(xì)胞以及5-FU聯(lián)合CIK細(xì)胞對(duì)小鼠結(jié)腸癌移植瘤生長(zhǎng)的作用。 方法：建立BALB/C小鼠結(jié)腸癌模型，在體外誘導(dǎo)培養(yǎng)小鼠CIK細(xì)胞，于第0和7天進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)CIK主要效應(yīng)細(xì)胞表型分析。10只荷瘤鼠隨機(jī)分兩組，一組給5-FU（12.5mg/kg）當(dāng)天腹腔注射，另一組給予NS（0.2ml/只）腹腔注射作對(duì)照，第十天采用流式細(xì)胞儀分析荷瘤鼠腫瘤組織中淋巴細(xì)胞細(xì)胞毒性T細(xì)胞活化抗原-4（cytotoxic T lymphocyte-activation antigen4，CTLA-4）和非淋巴細(xì)胞CD80、CD86表達(dá)。另取40只荷瘤鼠隨機(jī)分成四組，A組（正常對(duì)照組）：NS（0.2ml腹腔灌注，d0）+NS（0.2ml尾靜脈注射，d3）；B組（5-FU組）：5-FU（12.5mg/kg腹腔灌注，d0）+NS（0.2ml尾靜脈注射，d3）；C組（CIK組）：NS（0.2ml腹腔灌注，d0）+CIK（1×107尾靜脈注射，，d3）；D組（5-FU+CIK組）：5-FU（12.5mg/kg腹腔灌注，d0）+CIK（1×107尾靜脈注射，d3）。觀察腫瘤生長(zhǎng)并繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線，生存分析采用Kaplan-Meier法及l(fā)og-rank檢驗(yàn)。用藥第10天各組處死5只小鼠，采用RT-PCR法檢測(cè)四組腫瘤組織中IFN-γ和TNF-表達(dá)量。 結(jié)果：小鼠CIK主要效應(yīng)細(xì)胞在體外擴(kuò)增第7天達(dá)到（18.4±6.8）%。與對(duì)照組相比，5-FU處理后小鼠移植瘤組織中CD45+細(xì)胞表面CTLA-4表達(dá)量提高，且CD45-細(xì)胞CD80和CD86表達(dá)量增加；5-FU聯(lián)合CIK細(xì)胞治療組小鼠腫瘤生長(zhǎng)速度明顯慢于單因素治療組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 0.05）；5-FU聯(lián)合CIK細(xì)胞治療可提高腫瘤組織IFN-γ與TNF-表達(dá)量，且聯(lián)合治療組與單治療組中IFN-γ的表達(dá)量之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 0.05）。 結(jié)論：5-FU聯(lián)合CIK細(xì)胞治療對(duì)結(jié)腸癌移植瘤生長(zhǎng)的抑制作用大于單獨(dú)應(yīng)用，且可提高BALB/C小鼠結(jié)腸癌模型的免疫功能。 第三部分化療聯(lián)合CIK細(xì)胞治療卵巢癌的臨床觀察 目的：初步探討CIK細(xì)胞治療卵巢癌的安全性和有效性，為卵巢癌探尋生物治療策略。 方法：利用接受常規(guī)手術(shù)和化療結(jié)束后卵巢癌患者外周血分離出單個(gè)核細(xì)胞，在體外經(jīng)多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)培養(yǎng)出CIK細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)分析其表型特征。將體外培養(yǎng)第14~21天的CIK細(xì)胞通過靜脈回輸給患者，流式細(xì)胞儀檢測(cè)患者外周血淋巴細(xì)胞表型變化，回顧性觀察6例接受CIK細(xì)胞治療的卵巢癌患者資料，觀察患者治療前后卡式評(píng)分（Karnofsky performance score，KPS）差異、腫瘤指標(biāo)差異、外周血T細(xì)胞亞群分布及治療后相關(guān)毒副反應(yīng)。 結(jié)果：有5例治療后KPS較治療前明顯提升，另外1例治療后KPS保持不變。所有接受CIK細(xì)胞治療的患者均未出現(xiàn)明顯毒副作用。1例III期EOC患者手術(shù)聯(lián)合化療治療后CA199升高，在接受CIK細(xì)胞治療3個(gè)療程后，CA199逐漸下降至正常。目前狀況良好，腫瘤標(biāo)記物和影像學(xué)隨訪沒有腫瘤復(fù)發(fā)跡象，無(wú)瘤生存期（progression free survival，PFS）已達(dá)到3年。1例II期透明細(xì)胞癌合并漿液性癌患者，接受CIK細(xì)胞治療2個(gè)療程，PFS已接近4年，隨訪瘤標(biāo)和影像學(xué)檢查無(wú)腫瘤復(fù)發(fā)跡象。另外1例II期EOC患者接受8個(gè)療程CIK細(xì)胞治療后，PFS已達(dá)5年，目前狀況良好，也沒有腫瘤復(fù)發(fā)跡象。 結(jié)論：CIK細(xì)胞治療卵巢癌可改善患者的生存質(zhì)量，是一種有希望的治療方法。 綜上所述，本文通過對(duì)化療聯(lián)合CIK細(xì)胞治療腫瘤的基礎(chǔ)研究和治療卵巢癌病例的回顧分析，我們認(rèn)為，CIK細(xì)胞可在體外經(jīng)多種細(xì)胞因子刺激下誘導(dǎo)擴(kuò)增，第14~21天可獲得較為理想的效應(yīng)細(xì)胞；CIK細(xì)胞可通過分泌細(xì)胞因子并誘導(dǎo)卵巢癌SKOV-3細(xì)胞凋亡發(fā)揮較強(qiáng)的殺傷作用；聯(lián)合CIK細(xì)胞治療可增強(qiáng)DDP對(duì)卵巢癌SKOV-3細(xì)胞的殺傷作用；5-FU聯(lián)合CIK細(xì)胞治療對(duì)BALB/C小鼠結(jié)腸癌移植瘤生長(zhǎng)的抑制作用大于單獨(dú)應(yīng)用5-FU或CIK細(xì)胞，且可提高小鼠結(jié)腸癌模型的細(xì)胞免疫功能。CIK細(xì)胞治療卵巢癌可改善患者的生活質(zhì)量，是一種有希望的治療方法。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R737.31
【目錄】：

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2 張雪峰,任祖淵,方福德,左瑾,蘇長(zhǎng)保,王任直,馬文斌;全反式維甲酸與單純皰疹病毒胸苷激酶基因?qū)δz質(zhì)瘤的協(xié)同殺傷作用[J];癌癥;2002年05期

3 陳復(fù)興,劉軍權(quán),張南征,鞏新建,張國(guó)龍,徐永茂,周忠海,王濤,黃健;自身細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞過繼性免疫治療惡性腫瘤的臨床觀察[J];癌癥;2002年07期

4 楊文鋒,王善政;食管癌組織及其區(qū)域淋巴結(jié)中樹突細(xì)胞CD1a、CD80、CD86的表達(dá)[J];癌癥;2004年02期

5 張麗麗;邵淑麗;武燕;;OPN和B7-H4在上皮性卵巢腫瘤中的表達(dá)及意義[J];癌癥;2010年01期

6 段秀梅;譚巖;宋燕;王曉祺;劉力華;方艷秋;許淑芬;;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CIK的免疫表型和體外殺傷活性[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年04期

7 楊永紅;細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];白血病.淋巴瘤;2003年02期

8 蔣耀光;食管癌外科的治療進(jìn)展[J];重慶醫(yī)學(xué);2004年02期

9 文欽;張曦;陳幸華;高蕾;張誠(chéng);高力;王慶余;;父供女HLA半相合造血干細(xì)胞移植后供者DC-CIK細(xì)胞輸注治療兒童難治復(fù)發(fā)性急性髓細(xì)胞白血病1例并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[J];重慶醫(yī)學(xué);2010年14期

10 羅順文,葉鋼,張榮貴,江永浩,劉為池;全反式維甲酸增強(qiáng)HSV-TK/GCV對(duì)BIU-87細(xì)胞旁觀者效應(yīng)的觀察[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2005年05期

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 楊曉鳳;;新興�？埔l(fā)醫(yī)院活力——解放軍第463醫(yī)院細(xì)胞治療研究中心創(chuàng)建實(shí)錄[J];中國(guó)醫(yī)院院長(zhǎng);2006年03期

2 韓平;解慧琪;羅靜聰;楊志明;;細(xì)胞治療臨床應(yīng)用新進(jìn)展[J];中國(guó)修復(fù)重建外科雜志;2008年02期

3 黃琳;吳士堯;;基因及細(xì)胞治療家族性擴(kuò)張型心肌病的實(shí)驗(yàn)研究[J];國(guó)際心血管病雜志;2009年01期

4 吳祖澤;;對(duì)規(guī)范細(xì)胞治療臨床研究和應(yīng)用的建議[J];中國(guó)實(shí)用內(nèi)科雜志;2011年11期

5 薛毅;李晉濤;;過繼細(xì)胞治療在癌癥臨床治療中的進(jìn)展[J];局解手術(shù)學(xué)雜志;2012年01期

6 ;2014細(xì)胞治療國(guó)際研討會(huì)在上海成功舉辦[J];轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)雜志;2014年04期

7 ;2012細(xì)胞治療技術(shù)研討會(huì)通知[J];中華細(xì)胞與干細(xì)胞雜志(電子版);2012年01期

8 劉承宜;朱玲;韋恩秀;鄧凌云;李方暉;劉延瑩;;光子的冗余功能及其在細(xì)胞治療中的應(yīng)用[J];中國(guó)激光醫(yī)學(xué)雜志;2012年05期

9 馬潔;;“細(xì)胞治療癌癥”的喜與憂[J];首都醫(yī)藥;2012年05期

10 王遠(yuǎn)華;;CIK細(xì)胞治療腫瘤患者的護(hù)理[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2011年01期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 蔡昌蘭;李瓊;溫居一;張俊莉;譚敬華;韓雪;護(hù)理部;黃葉莉;;CIK細(xì)胞治療惡性腫瘤的護(hù)理[A];中華護(hù)理學(xué)會(huì)全國(guó)腫瘤護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會(huì)議論文匯編[C];2009年

2 張和平;;CIK細(xì)胞治療消化道惡性腫瘤的護(hù)理[A];2011年河南省內(nèi)科護(hù)理新業(yè)務(wù)、新技術(shù)及康復(fù)護(hù)理新進(jìn)展研討會(huì)論文集[C];2011年

3 于寶丹;何臣;王君麗;徐軍;;CIK細(xì)胞治療對(duì)肺癌患者的免疫調(diào)節(jié)作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)年會(huì)——2013第十四次全國(guó)呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

4 ;人體細(xì)胞治療申報(bào)指導(dǎo)原則[A];第三屆“分子核醫(yī)學(xué)在腫瘤診斷與治療中的應(yīng)用與研究進(jìn)展”全國(guó)腫瘤分子標(biāo)志的研究與方法學(xué)進(jìn)展學(xué)術(shù)交流會(huì)資料匯編[C];2006年

5 李寧;候麗娟;;自體CIK細(xì)胞治療肝癌患者的護(hù)理[A];全國(guó)內(nèi)科護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會(huì)議、全國(guó)心臟內(nèi)、外科�？谱o(hù)理學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

6 張曉紅;;成人急性淋巴細(xì)胞白細(xì)胞治療的幾個(gè)問題[A];第七屆全國(guó)血液免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)暨2008年浙江省血液病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

7 黃秋雨;;口腔癌患者CIK細(xì)胞治療的護(hù)理體會(huì)[A];全國(guó)口腔護(hù)理新進(jìn)展研討會(huì)論文匯編[C];2011年

8 李健;張和平;;CIK細(xì)胞治療消化道腫瘤的護(hù)理措施[A];2013年河南省呼吸危重癥護(hù)理新進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文集[C];2013年

9 閻石;焦淑賢;孫福軍;楊叢林;王薇;姚錫美;張新德;陸榮;張薇;;去除白細(xì)胞治療高白細(xì)胞性白血病[A];中國(guó)輸血1999年年會(huì)暨紀(jì)念A(yù)BO血型發(fā)現(xiàn)100周年學(xué)術(shù)交流論文專輯[C];1999年

10 陳錳;劉興會(huì);;孕產(chǎn)婦圍產(chǎn)期輸注紅細(xì)胞治療的危險(xiǎn)因素分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國(guó)婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會(huì)議產(chǎn)科會(huì)場(chǎng)（產(chǎn)科學(xué)組、妊高癥學(xué)組）論文匯編[C];2012年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 記者 宦璐;[N];上海證券報(bào);2014年

2 劉濤;[N];太原日?qǐng)?bào);2011年

3 本報(bào)記者 何建昆;[N];科技日?qǐng)?bào);2013年

4 李偉;[N];科技日?qǐng)?bào);2013年

5 記者 王瀟雨 王丹;[N];健康報(bào);2014年

6 彭曉蘭 王萍;[N];健康報(bào);2005年

7 段曉宏　任偉鋒 記者 張哲浩;[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

8 健康時(shí)報(bào)記者 馬海偉;[N];健康時(shí)報(bào);2012年

9 鄭屠 編譯;[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

10 新金融記者 柴剛;[N];新金融觀察;2012年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 徐梅;化療聯(lián)合CIK細(xì)胞治療惡性腫瘤的相關(guān)研究及在卵巢癌臨床治療中的觀察[D];蘇州大學(xué);2014年

2 陳立國(guó);微囊化轉(zhuǎn)心房肽基因細(xì)胞治療高血壓的實(shí)驗(yàn)研究[D];四川大學(xué);2003年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 張暉;纖維連接蛋白誘導(dǎo)的CIK細(xì)胞治療晚期惡性腫瘤患者的安全性及療效的系統(tǒng)評(píng)價(jià)[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2009年

2 劉劍;缺氧誘導(dǎo)因子1α基因克隆及HIF-1α-pcDNA3.1表達(dá)研究[D];中南大學(xué);2007年

  本文關(guān)鍵詞：化療聯(lián)合CIK細(xì)胞治療惡性腫瘤的相關(guān)研究及在卵巢癌臨床治療中的觀察，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：167330