本文選題：膽管癌　切入點(diǎn)：FBXW7　出處：《山東大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：膽管癌(Cholangiocarcinoma, CCA)起源于膽管上皮細(xì)胞,是肝膽系統(tǒng)中除肝癌以外最為常見的惡性腫瘤。根據(jù)解剖位置的不同膽管癌可分為肝內(nèi)膽管癌(intrahepatic CCA, IHCC)..肝門部膽管癌(perihilar CCA,PHCC)及遠(yuǎn)端膽管癌(distal CCA, DCC).近期研究報(bào)道膽管癌的發(fā)病率及死亡率呈不斷上升趨勢。膽管癌侵襲性強(qiáng)、轉(zhuǎn)移早,多于2／3的患者確診時(shí)已失去手術(shù)機(jī)會,而且,膽管癌輔助治療措施的效果尚需要進(jìn)一步的驗(yàn)證。膽管癌患者總體中位生存時(shí)間僅15個(gè)月。因此,進(jìn)一步明確膽管癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制、尋找膽管癌早期診斷指標(biāo)及有效治療靶點(diǎn)對改善患者預(yù)后具有十分重要的意義。FBXW7 (F-box and WD repeat domain containing 7)是F-box蛋白家族成員之一,Skpl-Cull-F box (SCF)泛素化連接酶復(fù)合體中的識別亞基。前期研究已證實(shí)FBXW7能夠調(diào)節(jié)多種重要腫瘤蛋白的泛素化降解,如Notch、cyclin E1、 mTOR、c-Myc及c-Jun等；且其對諸多重要的細(xì)胞生物學(xué)過程具有調(diào)控作用,主要包括細(xì)胞增殖、分化、DNA損傷反應(yīng)、基因組穩(wěn)定性維持及細(xì)胞周期等。目前,FBXW7被視為一種重要的腫瘤抑制基因及潛在的腫瘤治療靶點(diǎn),但FBXW7在腫瘤轉(zhuǎn)移中的作用研究很少,其在膽管癌中的功能尚需進(jìn)一步明確。腫瘤轉(zhuǎn)移是影響膽管癌患者預(yù)后最為重要的原因。越來越多的證據(jù)表明上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。EMT的具體過程包括細(xì)胞之間粘附性消失、細(xì)胞去極化、細(xì)胞侵襲及遷移能力增強(qiáng)等,間質(zhì)細(xì)胞形態(tài)利于腫瘤細(xì)胞向遠(yuǎn)處器官遷移及干細(xì)胞特性的維持,在腫瘤轉(zhuǎn)移的起始及發(fā)展階段有利于其向其他細(xì)胞類型轉(zhuǎn)化。但EMT在膽管癌中的作用及機(jī)制研究較少。因此,進(jìn)一步明確膽管癌EMT機(jī)制對于探索其轉(zhuǎn)移機(jī)制具有重要價(jià)值。本研究主要探索FBXW7調(diào)控膽管癌EMT、干細(xì)胞特性以及轉(zhuǎn)移的作用,并深入研究可能的分子機(jī)制。該研究不僅進(jìn)一步明確了膽管癌轉(zhuǎn)移的機(jī)制,也為探所膽管癌早期診斷指標(biāo)及治療靶點(diǎn)提供了新的證據(jù)。第一部分E3泛素化連接酶FBXW7與膽管癌臨床病理特征的相關(guān)性研究[目的]檢測膽管癌細(xì)胞株及三種類型的膽管癌標(biāo)本中FBXW7的表達(dá),并分析FBXW7與膽管癌臨床病理特征之間的相關(guān)性,明確FBXW7在膽管癌中的臨床意義,同時(shí)為探索FBXW7在膽管癌中的功能奠定基礎(chǔ)。[方法]1.應(yīng)用膽管正常上皮細(xì)胞、肝內(nèi)膽管癌及肝門部膽管癌細(xì)胞株,經(jīng)qRT-PCR和Western blot檢測各細(xì)胞株中FBXW7 mRNA和蛋白表達(dá)水平。2.收集山東大學(xué)齊魯醫(yī)院普外科手術(shù)切除膽管癌及對應(yīng)癌旁新鮮組織,經(jīng)Western blot檢測膽管癌及癌旁組織中FBXW7蛋白表達(dá)水平。3.收集山東大學(xué)齊魯醫(yī)院普外科手術(shù)切除肝內(nèi)膽管癌及癌旁石蠟組織,并制成石蠟組織切片,經(jīng)免疫組織化學(xué)染色檢測肝內(nèi)膽管癌癌旁組織、無轉(zhuǎn)移的膽管癌組織及有轉(zhuǎn)移的膽管癌組織中的FBXW7蛋白表達(dá)水平,并統(tǒng)計(jì)分析其與腫瘤大小、轉(zhuǎn)移、分化程度及TNM分期之間的關(guān)系。4.收集山東大學(xué)齊魯醫(yī)院普外科手術(shù)切除肝門部膽管癌及癌旁石蠟組織,并制成石蠟組織切片,經(jīng)免疫組織化學(xué)染色檢測肝門部膽管癌癌旁組織、無轉(zhuǎn)移的膽管癌組織及有轉(zhuǎn)移的膽管癌組織中的FBXW7蛋白表達(dá)水平,并統(tǒng)計(jì)分析其與腫瘤大小、轉(zhuǎn)移、分化程度及TNM分期之間的關(guān)系。5.收集山東大學(xué)齊魯醫(yī)院普外科手術(shù)切除遠(yuǎn)端膽管癌及癌旁石蠟組織,并制成石蠟組織切片,經(jīng)免疫組織化學(xué)染色檢測遠(yuǎn)端膽管癌癌旁組織、無轉(zhuǎn)移的膽管癌組織及有轉(zhuǎn)移的膽管癌組織中的FBXW7蛋白表達(dá)水平,并統(tǒng)計(jì)分析其與腫瘤大小、轉(zhuǎn)移、分化程度及TNM分期之間的關(guān)系。[結(jié)果]1. qRT-PCR和Western blot結(jié)果顯示正常膽管上皮細(xì)胞(HIBEpic)中FBXW7 mRNA和蛋白水平明顯高于肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞(HuCCT1和RBE)及肝門部膽管癌細(xì)胞(QBC939和FRH0201)。2.收集7例膽管癌及對應(yīng)癌旁新鮮組織,Western blot結(jié)果顯示其中6例膽管癌癌旁組織中FBXW7表達(dá)明顯高于膽管癌組織。3.通過免疫組織化學(xué)染色檢測肝內(nèi)膽管癌癌旁組織、無轉(zhuǎn)移的膽管癌組織及有轉(zhuǎn)移的膽管癌組織中的FBXW7蛋白表達(dá)水平,結(jié)果表明肝內(nèi)膽管癌癌旁組織中FBXW7表達(dá)最高,無轉(zhuǎn)移的膽管癌中表達(dá)較高,而具有轉(zhuǎn)移灶的膽管癌中FBXW7的表達(dá)最低；統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示FBXW7表達(dá)與肝內(nèi)膽管癌腫瘤大小、轉(zhuǎn)移、分化程度及TNM分期明顯相關(guān)。4.通過免疫組織化學(xué)染色檢測肝門部膽管癌癌旁組織、無轉(zhuǎn)移的膽管癌組織及有轉(zhuǎn)移的膽管癌組織中的FBXW7蛋白表達(dá)水平,結(jié)果表明肝門部膽管癌癌旁組織中FBXW7表達(dá)最高,無轉(zhuǎn)移的膽管癌中表達(dá)較高,而具有轉(zhuǎn)移灶的膽管癌中FBXW7的表達(dá)最低；統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示FBXW7表達(dá)與肝門部膽管癌轉(zhuǎn)移、分化程度及TNM分期明顯相關(guān)。5.通過免疫組織化學(xué)染色檢測遠(yuǎn)端膽管癌癌旁組織、無轉(zhuǎn)移的膽管癌組織及有轉(zhuǎn)移的膽管癌組織中的FBXW7蛋白表達(dá)水平,結(jié)果表明各組間FBXW7表達(dá)無明顯差異；統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示FBXW7表達(dá)與遠(yuǎn)端膽管癌腫瘤大小、轉(zhuǎn)移、分化程度及TNM分期無明顯相關(guān)性。[結(jié)論]1.FBXW7在膽管正常上皮細(xì)胞中表達(dá)量明顯高于肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞及肝門部膽管癌細(xì)胞,且FBXW7在膽管癌癌旁組織中表達(dá)明顯高于膽管癌組織,提示FBXW7在膽管癌中為抑癌基因。2. FBXW7可抑制肝內(nèi)膽管癌及肝門部膽管轉(zhuǎn)移,且與腫瘤分化程度及TNM分期明顯相關(guān)。第二部分FBXW7調(diào)控膽管癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化、干細(xì)胞特性及轉(zhuǎn)移的作用研究[目的]上述臨床研究結(jié)果表明FBXW7可抑制膽管癌轉(zhuǎn)移,且與肝內(nèi)膽管癌及肝門部膽管癌分化程度及TNM分期明顯相關(guān)。本部分通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)裸鼠轉(zhuǎn)移模瘤型進(jìn)一步檢測FBXW7在膽管癌EMT、干細(xì)胞特性和轉(zhuǎn)移中的作用。[方法]1.構(gòu)建FBXW7干擾質(zhì)粒(pBabe-shFBXW7.1及pBabe-shFBXW7.2),經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染pBabe-shFBXW7.1、pBabe-shFBXW7.2及其空白對照質(zhì)粒,使用FBXW7基礎(chǔ)表達(dá)水平相對較高的HuCCT1細(xì)胞和RBE細(xì)胞構(gòu)建FBXW7穩(wěn)定低表達(dá)的細(xì)胞株及其對照組細(xì)胞。通過qRT-PCR和Western blot檢測所構(gòu)建的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系中FBXW7 mRNA及蛋白表達(dá)水平。2.構(gòu)建FBXW7高表達(dá)質(zhì)粒(pBabe-FBXW7),經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染pBabe-FBXW7及其空白對照質(zhì)粒,使用FBXW7基礎(chǔ)表達(dá)水平相對較低的QBC939細(xì)胞和FRH0201細(xì)胞構(gòu)建FBXW7穩(wěn)定過表達(dá)的細(xì)胞株及其對照組細(xì)胞。通過qRT-PCR和Western blot檢測所構(gòu)建的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系中FBXW7 mRNA及蛋白表達(dá)水平。3.應(yīng)用FBXW7穩(wěn)定低表達(dá)及高表達(dá)細(xì)胞株,普通光學(xué)顯微鏡觀察FBXW7表達(dá)改變對細(xì)胞表型的影響；經(jīng)Western blot檢測EMT相關(guān)標(biāo)志分子(E-cadherin、 α-catenin、Fibronectin及Vimentin)的表達(dá)水平改變,驗(yàn)證FBXW7對膽管癌EMT的調(diào)控作用。4.應(yīng)用FBXW7穩(wěn)定低表達(dá)及高表達(dá)細(xì)胞株,通過Western blot檢測其干細(xì)胞特性標(biāo)志分子(Nanog、OCT4)的表達(dá)；經(jīng)Primary sphere formation及Secondary sphere formation實(shí)驗(yàn)檢測干細(xì)胞自我更新能力,驗(yàn)證FBXW7對膽管癌干細(xì)胞特性的調(diào)控作用。5.應(yīng)用FBXW7穩(wěn)定低表達(dá)及高表達(dá)細(xì)胞株,通過細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell小室細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)檢測FBXW7在調(diào)控膽管癌細(xì)胞遷移能力中的作用；經(jīng)Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)檢測FBXW7在調(diào)控膽管癌細(xì)胞侵襲能力中的作用。6.收集山東大學(xué)齊魯醫(yī)院普外科手術(shù)切除肝內(nèi)膽管癌及癌旁石蠟組織,并制成石蠟組織切片,經(jīng)免疫組織化學(xué)染色檢測肝內(nèi)膽管癌癌旁組織、無轉(zhuǎn)移的膽管癌組織及有轉(zhuǎn)移的膽管癌組織中的E-cadherin蛋白表達(dá)水平,并統(tǒng)計(jì)分析其與對應(yīng)標(biāo)本中FBXW7表達(dá)之間的相關(guān)性。7.收集山東大學(xué)齊魯醫(yī)院普外科手術(shù)切除肝門部膽管癌及癌旁石蠟組織,并制成石蠟組織切片,經(jīng)免疫組織化學(xué)染色檢測肝門部膽管癌癌旁組織、無轉(zhuǎn)移的膽管癌組織及有轉(zhuǎn)移的膽管癌組織中的E-cadherin蛋白表達(dá)水平,并統(tǒng)計(jì)分析其與對應(yīng)標(biāo)本中FBXW7表達(dá)之間的相關(guān)性。8.應(yīng)用FBXW7穩(wěn)定低表達(dá)和高表達(dá)的細(xì)胞及其對照組細(xì)胞建立裸鼠轉(zhuǎn)移瘤模型,觀察腫瘤轉(zhuǎn)移情況；通過HE染色檢測肺臟及肝臟組織中轉(zhuǎn)移灶數(shù)量,經(jīng)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證FBXW7能否抑制膽管癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移。9.經(jīng)免疫組織化學(xué)染色方法檢測各組裸鼠肺臟及肝臟轉(zhuǎn)移灶中FBXW7及E-cadherin表達(dá)情況,經(jīng)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證FBXW7在膽管癌EMT中的調(diào)控作用。[結(jié)果]1.成功構(gòu)建pBabe-shFBXW7.1及pBabe-shFBXW7.2質(zhì)粒,并穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HuCCTl細(xì)胞和RBE細(xì)胞(分別命名為HuCCT1-Vector、HuCCT1-shFBXW7.1、 HuCCT1-shFBXW7.2; RBE-Vector、RBE-shFBXW7.1、RBE-shFBXW7.2)。經(jīng)qRT-PCR和Western blot險(xiǎn)測證實(shí)FBXW7低表達(dá)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系構(gòu)建成功。2.成功構(gòu)建pBabe-FBXW7質(zhì)粒,并穩(wěn)定轉(zhuǎn)染QBC939細(xì)胞和FRH0201細(xì)胞(分別命名為QBC939-Vector、QBC939-FBXW7; FRH0201-Vector、FRH0201-FBXW7)。經(jīng)qRT-PCR和Western blot檢測證實(shí)FBXW7高表達(dá)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系構(gòu)建成功。3.普通光學(xué)顯微鏡觀察顯示FBXW7能夠抑制膽管癌細(xì)胞由上皮細(xì)胞形態(tài)向間質(zhì)細(xì)胞形態(tài)轉(zhuǎn)化。Western blot證實(shí)FBXW7能夠促進(jìn)上皮細(xì)胞標(biāo)志分子E-cadherin和α-catenin的表達(dá),同時(shí)抑制間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志分子Fibronectin和Vimentin的表達(dá)。4. Western blot證實(shí)FBXW7能夠抑制干細(xì)胞特性標(biāo)志分子Nanog和OCT4的表達(dá)；Primary sphere formation及Secondary sphere formation實(shí)驗(yàn)證實(shí)FBXW7能夠抑制膽管癌干細(xì)胞自我更新能力。5.經(jīng)劃痕實(shí)驗(yàn)、 Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)及Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)證實(shí)FBXW7能夠抑制膽管癌細(xì)胞體外遷移和侵襲能力。6.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析提示在肝內(nèi)膽管癌中E-cadherin表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移呈明顯負(fù)相關(guān),且其表達(dá)量與FBXW7呈正相關(guān)。7.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析提示在肝門部膽管癌中E-cadherin表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移呈明顯負(fù)相關(guān),且其表達(dá)量與FBXW7呈正相關(guān)。8.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)FBXW7可抑制膽管癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力。9.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)FBXW7可抑制膽管癌EMT。[結(jié)論]1.體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)FBXW7可抑制膽管癌EMT。2.體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)FBXW7可抑制膽管癌細(xì)胞干細(xì)胞特性。3.體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)FBXW7能夠抑制膽管癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。第三部分FBXW7抑制膽管癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化、干細(xì)胞特性及轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制研究[目的]上述研究經(jīng)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)FBXW7能夠通過抑制膽管癌EMT及干細(xì)胞特性進(jìn)而抑制其轉(zhuǎn)移。本部分將對FBXW7抑制膽管癌EMT的具體分子機(jī)制進(jìn)行進(jìn)一步探索。[方法]1.檢測FBXW7高表達(dá)和低表達(dá)的細(xì)胞中mTOR及p-mTOR表達(dá)量,結(jié)合前期文獻(xiàn)報(bào)道,明確FBXW7在膽管癌細(xì)胞中是否能夠泛素化降解mTOR。2.應(yīng)用mTOR特異性抑制劑rapamycin處理FBXW7低表達(dá)的細(xì)胞,經(jīng)Western blot檢測EMT標(biāo)志分子(E-cadherin、Vimentin)表達(dá)變化：經(jīng)Primary sphere formation及Secondary sphere formation實(shí)驗(yàn)檢測膽管癌干細(xì)胞自我更新能力改變；經(jīng)劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移能力變化,細(xì)胞侵襲能力變化經(jīng)Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)檢測驗(yàn)證。3.應(yīng)用]mTOR特異性抑制劑rapamycin處理FBXW7低表達(dá)的細(xì)胞,經(jīng)qRT-PCR及Western blot檢測EMT轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子(Snail、Slug及ZEB1) mRNA水平及蛋白水平改變,進(jìn)一步分析FBXW7調(diào)控膽管癌EMT的分子機(jī)制。4.篩選最有意義的EMT轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,首先檢測其在膽管癌細(xì)胞中的表達(dá)情況；應(yīng)用膽管癌細(xì)胞及FBXW7低表達(dá)的膽管癌細(xì)胞,shRNA干擾技術(shù)沉默所篩選EMT轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,經(jīng)Western blot檢測EMT標(biāo)志分子(E-cadherin、Vimentin)表達(dá)變化；同時(shí)經(jīng)劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移能力變化,細(xì)胞侵襲能力變化經(jīng)Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)檢測驗(yàn)證。5.收集山東大學(xué)齊魯醫(yī)院普外科手術(shù)切除肝內(nèi)膽管癌及癌旁石蠟組織,并制成石蠟組織切片,經(jīng)免疫組織化學(xué)染色檢測肝內(nèi)膽管癌癌旁組織、無轉(zhuǎn)移的膽管癌組織及有轉(zhuǎn)移的膽管癌組織中所篩選EMT轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子蛋白表達(dá)水平,并統(tǒng)計(jì)分析其與對應(yīng)標(biāo)本中E-cadherin及FBXW7表達(dá)之間的相關(guān)性。6.收集山東大學(xué)齊魯醫(yī)院普外科手術(shù)切除肝門部膽管癌及癌旁石蠟組織,并制成石蠟組織切片,經(jīng)免疫組織化學(xué)染色檢測肝門部膽管癌癌旁組織、無轉(zhuǎn)移的膽管癌組織及有轉(zhuǎn)移的膽管癌組織中的所篩選EMT轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子蛋白表達(dá)水平,并統(tǒng)計(jì)分析其與對應(yīng)標(biāo)本中E-cadherin及FBXW7表達(dá)之間的相關(guān)性。7.對FBXW7穩(wěn)定低表達(dá)細(xì)胞建立的裸鼠轉(zhuǎn)移瘤模型腹腔注射rapamycin,觀察腫瘤轉(zhuǎn)移情況；HE染色檢測肺臟及肝臟組織中轉(zhuǎn)移灶數(shù)量,并與未用藥組比較,經(jīng)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證mTOR能否介導(dǎo)FBXW7調(diào)控膽管癌轉(zhuǎn)移。8.對FBXW7穩(wěn)定低表達(dá)細(xì)胞建立的裸鼠轉(zhuǎn)移瘤模型腹腔注射rapamycin,免疫組織化學(xué)染色檢測肝臟及肺臟轉(zhuǎn)移灶中FBXW7及E-cadherin表達(dá)水平,并與未用藥組比較,經(jīng)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證mTOR能否介導(dǎo)FBXW7調(diào)控膽管癌EMT。[結(jié)果]1.經(jīng)Western blot檢測證實(shí)膽管癌細(xì)胞中FBXW7表達(dá)量與mTOR及p-mTOR呈負(fù)相關(guān),結(jié)合前期報(bào)道,證實(shí)FBXW7在膽管癌細(xì)胞中可泛素化降解mTOR。2.經(jīng)Western blot檢測證實(shí)rapamycin可逆轉(zhuǎn)FBXW7沉默引起的上皮細(xì)胞標(biāo)志分子(E-cadherin)表達(dá)降低及間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志分子(Vimentin)表達(dá)升高；經(jīng)Primary sphere formation及Secondary sphere formation實(shí)驗(yàn)證實(shí)rapamycin能夠逆轉(zhuǎn)FBXW7沉默引起的膽管癌干細(xì)胞自我更新能力增強(qiáng)；經(jīng)劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)及Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)證實(shí)rapamycin能夠逆轉(zhuǎn)FBXW7沉默引起的膽管癌細(xì)胞體外遷移和侵襲能力增強(qiáng)。3.經(jīng)qRT-PCR及Western blot檢測證實(shí)rapamycin能夠逆轉(zhuǎn)FBXW7沉默引起的EMT轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子Snail、Slug及ZEB1的表達(dá)增強(qiáng)。4.ZEB1在膽管癌中的功能尚未見報(bào)道,本研究中首先檢測了ZEB1在膽管癌中的表達(dá)水平及在膽管癌轉(zhuǎn)移、EMT中的作用,并進(jìn)一步檢測了ZEB1在FBXW7/mTOR信號通路調(diào)控膽管癌EMT及轉(zhuǎn)移中的作用。RT-PCR及Western blot證實(shí)在膽管癌細(xì)胞中ZEB1 mRNA及蛋白表達(dá)水平明顯高于正常膽管上皮細(xì)胞。在膽管癌細(xì)胞及FBXW7低表達(dá)的膽管癌細(xì)胞中轉(zhuǎn)染pSingle-shZEB1.1、 pSingle-shZEB1.2及pSingle-Vector質(zhì)粒,經(jīng)Western blot檢測證實(shí)ZEB1干擾后可逆轉(zhuǎn)FBXW7沉默引起的上皮細(xì)胞標(biāo)志分子(E-cadherin)表達(dá)降低及間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志分子(Vimentin)表達(dá)升高；經(jīng)劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)及Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)證實(shí)ZEB1干擾能夠逆轉(zhuǎn)FBXW7沉默引起的膽管癌細(xì)胞體外遷移和侵襲能力增強(qiáng)。5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析提示在肝內(nèi)膽管癌中ZEB1表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移明顯相關(guān),且其表達(dá)量與E-cadherin及FBXW7呈負(fù)相關(guān)。6.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析提示在肝門部膽管癌中ZEB1表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移明顯相關(guān),且其表達(dá)量與E-cadherin及FBXW7呈負(fù)相關(guān)。7.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)rapamycin能夠明顯逆轉(zhuǎn)FBXW7沉默引起膽管癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)。8.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)rapamycin能夠明顯逆轉(zhuǎn)FBXW7沉默引起的EMT。[結(jié)論]1.mTOR可介導(dǎo)FBXW7抑制膽管癌細(xì)胞EMT、干細(xì)胞特性及轉(zhuǎn)移的作用。2.ZEB1可介導(dǎo)FBXW7/mTOR通路對膽管癌細(xì)胞EMT和轉(zhuǎn)移的調(diào)控作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.8

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2 李蓉,蔡中起,張靜;膽管癌診治進(jìn)展[J];臨床肝膽病雜志;2002年04期

3 黎靖,馮春紅,張旭,雷正明;膽管癌病理誤診一例[J];中華肝膽外科雜志;2003年09期

4 吳高松,羅先文,吳劍宏,鄒聲泉,裘法祖;先天性膽總管囊腫膽汁對膽管癌細(xì)胞系的作用[J];中華消化雜志;2004年01期

5 孔琦,黃強(qiáng);膽管癌分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J];肝膽外科雜志;2004年05期

6 彭創(chuàng);湯恢煥;;膽管癌的分子生物學(xué)進(jìn)展[J];國際病理科學(xué)與臨床雜志;2007年02期

7 李惠珍;Aqeel ahmed;傅華群;;膽管癌的早期診斷[J];江西醫(yī)藥;2008年12期

8 王健東;全志偉;;膽管癌基礎(chǔ)研究現(xiàn)狀[J];中國實(shí)用外科雜志;2008年04期

9 鄒聲泉;鄭順貞;;膽管癌分子生物學(xué)的研究現(xiàn)狀及其意義[J];腹部外科;2008年02期

10 顧勁揚(yáng);仇毓東;周建新;丁義濤;;膽管癌發(fā)病機(jī)制及治療進(jìn)展[J];肝膽外科雜志;2010年05期

相關(guān)會議論文 前10條

1 周娉婷;房萌;高春芳;;膽管癌N糖標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)及其機(jī)制研究[A];第一次全國中西醫(yī)結(jié)合檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會成立大會論文匯編[C];2014年

2 張豐深;馬寬生;何振平;董家鴻;;細(xì)胞凋亡相關(guān)基因與膽管癌臨床病理的關(guān)系[A];2001'全國腫瘤外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2001年

3 張豐深;馬寬生;何振平;董家鴻;;CCK、Gastrin對bcl-2基因家族的調(diào)節(jié)作用[A];2001'全國腫瘤外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2001年

4 余建華;崔云甫;;膽管癌發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展[A];中國抗癌協(xié)會膽道腫瘤專業(yè)委員會成立大會暨第一屆全國膽道腫瘤學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

5 張豐深;馬寬生;何振平;董家鴻;;CCK,Gastrin對凋亡基因的調(diào)節(jié)作用[A];第七屆全國腫瘤生物治療學(xué)術(shù)會議論文集[C];2001年

6 馬寬生;張豐深;何振平;董家鴻;;CCK,Gastrin對膽管癌細(xì)胞凋亡的作用[A];第七屆全國腫瘤生物治療學(xué)術(shù)會議論文集[C];2001年

7 韓鵬;邱乒乒;戴燕燕;練惠輝;李文崗;陳清西;;河蜆活性物質(zhì)對肝癌、膽管癌細(xì)胞生長的影響[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會2008年學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2008年

8 李薇;曾祥元;李昆;;膽管癌QBC939細(xì)胞株對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞VEGF和b-FGF表達(dá)的影響[A];中國微循環(huán)學(xué)會2014年全國學(xué)術(shù)會議大會匯編[C];2014年

9 張昆松;梁力建;殷曉煜;;Wnt通路相關(guān)因子在膽管癌細(xì)胞系中的表達(dá)及其siRNA干擾實(shí)驗(yàn)[A];中國抗癌協(xié)會膽道腫瘤專業(yè)委員會成立大會暨第一屆全國膽道腫瘤學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

10 馬寬生;張豐深;何振平;董家鴻;;CCK、Gastrin在beauvericin誘導(dǎo)膽管癌細(xì)胞凋亡中的作用[A];2001'全國腫瘤外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2001年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前2條

1 陳漢橋;大連醫(yī)科大學(xué)附屬一院膽管癌基因治療研究獲重要進(jìn)展[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

2 陳漢橋;基因治膽管癌研究有進(jìn)展[N];健康報(bào);2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 楊輝;FBXW7抑制膽管癌上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化、干細(xì)胞特性及轉(zhuǎn)移的作用及機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2016年

2 韓鵬;膽管癌藥物的篩選及作用機(jī)理的研究[D];廈門大學(xué);2009年

3 陳紹勤;膽管癌蛋白組學(xué)研究[D];華中科技大學(xué);2009年

4 錢振宇;膽管癌與乙型和丙型肝炎病毒感染的相關(guān)性研究[D];復(fù)旦大學(xué);2003年

5 塔西烏（Elh.Issoufou Mahaman Tassiou）;膽管癌術(shù)前診斷技術(shù)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2003年

6 鄭秀海;膽囊收縮素在膽管癌神經(jīng)周圍浸潤轉(zhuǎn)移中的作用及其分子機(jī)制[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2005年

7 羅劍;重組腺病毒載體介導(dǎo)的人P27～（kip1）基因治療膽管癌的實(shí)驗(yàn)性研究[D];華中科技大學(xué);2006年

8 任延剛;不可切除的膽管癌非外科治療療效系統(tǒng)評價(jià)[D];中國醫(yī)科大學(xué);2007年

9 司麗娟;膽管癌術(shù)前定性診斷方法的研究[D];吉林大學(xué);2008年

10 舒藝;膽管癌差異甲基化位點(diǎn)初步篩選的研究[D];華中科技大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 董陽民;SENP1對膽管癌細(xì)胞增殖與徖移能力的影響以及SENP1在膽管癌標(biāo)本中的表達(dá)情況[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 樸鶴云;矢車菊素-3-葡萄糖苷對人膽管癌QBC939細(xì)胞的影響[D];延邊大學(xué);2015年

3 李志鋒;骨橋蛋白與CD44v6在膽管癌中的表達(dá)及臨床意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 黃朝君;γ-氨基丁酸在膽管癌細(xì)胞中的作用機(jī)制及相關(guān)效應(yīng)基因的探討[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

5 薛立新;Hedgehog信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在膽管癌中作用機(jī)制初步研究[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2011年

6 趙殿堂;siRNA沉默Wip1基因?qū)θ四懝馨㏎BC939細(xì)胞的影響[D];山東大學(xué);2015年

7 劉暢;醛酮還原酶家族1的C1亞型在膽管癌發(fā)生發(fā)展中作用及機(jī)制[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

8 周娉婷;惡性膽胰腫瘤N糖組標(biāo)志物和相關(guān)機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

9 路健;煙堿型乙酰膽堿α7受體對膽管癌神經(jīng)浸潤的影響[D];青島大學(xué);2015年

10 譚永輝;ErbB4在膽管癌中的表達(dá)變化及作用研究[D];湖南師范大學(xué);2015年

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本文編號：1656309