本文選題：miRNA　切入點：細(xì)胞吞噬　出處：《浙江大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：MicroRNA (miRNA)是一類長度約21nt的非編碼小RNA,調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄。miRNA在一系列生命活動中起著重要的調(diào)控作用,包括細(xì)胞生長、免疫和腫瘤的發(fā)生和發(fā)展等。細(xì)胞吞噬是一種在動物中保守的免疫方式,一些miRNA從無脊椎動物到高等動物高度保守,因此保守miRNA在動物的細(xì)胞吞噬中可能存在相同調(diào)控機(jī)制。因此,本論文從保守的miRNA入手,研究miRNA在細(xì)胞吞噬調(diào)控中的保守機(jī)制。腫瘤的發(fā)生和發(fā)展是一個復(fù)雜的過程,在此過程中,miRNA不僅參與了調(diào)控免疫細(xì)胞包括巨噬細(xì)胞在內(nèi)的免疫細(xì)胞的活性,同時也參與調(diào)控癌細(xì)胞的生長、遷移等。因此,本論文研究了在癌癥中表達(dá)失調(diào)的miRNA在癌癥中的調(diào)控作用及其作用機(jī)制。細(xì)胞吞噬在免疫反應(yīng)中起重要作用,然而miRNA參與的細(xì)胞吞噬調(diào)控還沒有被廣泛研究。為了解決這個問題,在本實驗室前期研究基礎(chǔ)上,本論文研究了miR-1對細(xì)胞吞噬的調(diào)控作用。結(jié)果顯示,miR-1在對蝦血淋巴細(xì)胞的吞噬調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。分析表明,miR-1是一條從無脊椎動物到哺乳動物高度保守的miRNA,因而本論文進(jìn)一步分析miR-1在哺乳動物巨噬細(xì)胞的吞噬調(diào)控中的功能。試驗結(jié)果表明,miR-1在癌化的巨噬細(xì)胞RAW264.7中的表達(dá)水平與分離的小鼠正常巨噬細(xì)胞和永生化的正常巨噬細(xì)胞ANA-1相比顯著下調(diào)。研究發(fā)現(xiàn),miR-1在蝦血淋巴細(xì)胞和哺乳動物的巨噬細(xì)胞中都能調(diào)控網(wǎng)格蛋白重鏈1(CLTC1)基因的表達(dá),從而抑制細(xì)胞的吞噬活性。因此,本研究揭示了miR-1介導(dǎo)的無脊椎動物和脊椎動物的吞噬調(diào)控機(jī)制。為了進(jìn)一步研究miR-1在腫瘤中的作用,本論文通過定量PCR分析miR-1在胃癌細(xì)胞(MGC-803, HGC-27, MKN45)和乳腺癌細(xì)胞(MDA-MB-231, MDA-MB-435)以及相應(yīng)的正常細(xì)胞中的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與胃正常細(xì)胞(GES-1)或乳腺正常細(xì)胞(MCF-10A)相比,miR-1在癌細(xì)胞中的表達(dá)水平顯著下降。同時,檢測了42對胃癌病人組織樣品(1個病人的癌變組織和正常組織為1對樣品),結(jié)果顯示miR-1在胃癌組織中的表達(dá)量顯著低于正常組織。以上研究表明,miR-1可能在癌癥中發(fā)揮抑癌基因的作用。在癌細(xì)胞和非癌細(xì)胞中過表達(dá)miR-1,結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-1能特異性地抑制癌細(xì)胞的生長,并使癌細(xì)胞周期阻滯在G1期,但對非癌細(xì)胞的生長無明顯影響。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),miR-1作用的靶基因是CDK4。細(xì)胞試驗和動物試驗結(jié)果顯示,過表達(dá)miR-1后,癌細(xì)胞中CDK4含量顯著減少,細(xì)胞周期發(fā)生阻滯,腫瘤生長受到抑制。同時,分析miR-1對癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的影響發(fā)現(xiàn),過表達(dá)miR-1能抑制癌細(xì)胞遷移、入侵和對纖連蛋白粘附的能力。共聚焦熒光顯微鏡觀察結(jié)果表明,miR-1過表達(dá)后F-actin的構(gòu)象發(fā)生了變化,纖維狀actin明顯減少；相差顯微鏡結(jié)果顯示,miR-1過表達(dá)的癌細(xì)胞形態(tài)趨于圓形,表明細(xì)胞的運(yùn)動能力減弱。靶基因研究結(jié)果表明,miR-1通過對靶基因TWF1 (twinfilin actin binding protein 1)、CNN3 (calponin 3, acidic)、CORO1C (coronin, actin binding protein)、WASF2(WAS protein family, member 2)、TMSB4X (thymosin beta 4, X-linked)的表達(dá)調(diào)控抑制癌細(xì)胞的遷移、入侵和粘附。細(xì)胞試驗和動物試驗結(jié)果均顯示,miR-1過表達(dá)后,TWF1、CNN3、CORO1C, WASF2和TMSB4X的mRNA和蛋白水平都顯著下降,miR-1抑制腫瘤轉(zhuǎn)移。體外miR-1介導(dǎo)的靶基因mRNA降解試驗和細(xì)胞內(nèi)RNA熒光原位雜交結(jié)果顯示,miR-1能同時作用于癌細(xì)胞生長和遷移相關(guān)的6個靶基因(CDK4, CNN3, CORO1C, WASF2, TMSB4X, TWF1)。裸鼠試驗結(jié)果顯示,miR-1過表達(dá)對癌細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的生長產(chǎn)生了明顯的抑制作用；同時,miR-1過表達(dá)抑制了癌細(xì)胞在活體內(nèi)的轉(zhuǎn)移。研究結(jié)果說明,miR-1作為腫瘤抑制因子,可同時抑制腫瘤生長和腫瘤轉(zhuǎn)移。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R730.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 Reske SN ,陳紹亮;枯否氏細(xì)胞吞噬功能的體內(nèi)測定[J];國外醫(yī)學(xué)(放射醫(yī)學(xué)分冊);1982年04期

2 張煒;蘇敬澤;強(qiáng)能賢;;組織細(xì)胞吞噬性脂膜炎[J];國外醫(yī)學(xué).皮膚病學(xué)分冊;1988年04期

3 ;組織學(xué)[J];中國醫(yī)學(xué)文摘(基礎(chǔ)醫(yī)學(xué));1992年02期

4 孫鸝,劉雅明,黃先玫;不同劑量維生素D_3對吞噬細(xì)胞吞噬功能的影響[J];杭州醫(yī)學(xué)高等�？茖W(xué)校學(xué)報;1998年02期

5 劉春娜;劉新宇;楊菁;吳國強(qiáng);王洪新;;婦炎康寧片對細(xì)胞吞噬功能及炎癥介質(zhì)影響[J];中成藥;2009年12期

6 李銳,鐘光漢,左聲鶴;實驗性阻塞性黃疸時枯否氏細(xì)胞吞噬功能及病理學(xué)變化的研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;1990年02期

7 陳瓊芳;曹澤群;胡有長;莊文華;吳忠華;;鑭對小鼠肝臟枯否氏細(xì)胞吞噬功能的影響[J];江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1989年02期

8 邢新麗;何曉曉;王柯敏;彭姣鳳;譚蔚泓;;細(xì)胞吞噬表面電荷不同的硅納米顆粒的研究[J];高等學(xué)�；瘜W(xué)學(xué)報;2006年11期

9 馬振亞;柳莉;;“止痢丸”對吞噬細(xì)胞吞噬功能的影響[J];陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1983年01期

10 徐瑛,郭峰;紅細(xì)胞對吞噬細(xì)胞吞噬功能影響的觀察[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;1987年03期

相關(guān)重要報紙文章 前2條

1 高書明;防癌守則[N];民族醫(yī)藥報;2004年

2 劉波;生吃蔬菜有哪些好處[N];中國鄉(xiāng)鎮(zhèn)企業(yè)報;2002年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 劉翠蓮;miR-1在吞噬活性調(diào)控以及腫瘤生長和轉(zhuǎn)移中的作用[D];浙江大學(xué);2016年

2 葉婷;小G蛋白Rab6和Ran在對蝦和果蠅細(xì)胞吞噬及抗病毒中的作用[D];浙江大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前4條

1 張紅;聚合物短纖維控釋抗腫瘤藥物的研究[D];西南交通大學(xué);2015年

2 孫U，

本文編號：1655511