發(fā)布時(shí)間：2018-03-23 05:25

  本文選題：RASSF1A基因　切入點(diǎn)：SGC-7901　出處：《南華大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:研究RASSF1A基因?qū)θ宋赴㎝GC-803細(xì)胞和SGC-7901細(xì)胞的JNK磷酸化水平的影響,初步探討RASSF1A對(duì)JNK信號(hào)通路的調(diào)控在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用。方法:1.體外培養(yǎng)2種不同分化程度的人胃癌細(xì)胞(MGC-803細(xì)胞和SGC-7901細(xì)胞),采用穩(wěn)定轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染RASSF1A基因后,利用Western Blotting分別檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后RASSF1A基因在人胃癌細(xì)胞中的表達(dá),驗(yàn)證穩(wěn)定轉(zhuǎn)染效果;Western Blotting分別檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后RASSF1A基因人胃癌細(xì)胞JNK磷酸化水平。2.分別建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染RASSF1A基因高表達(dá)組、未轉(zhuǎn)染組及空質(zhì)粒對(duì)照組人胃癌細(xì)胞裸鼠皮下成瘤模型,4-6w后提取瘤體組織,Western-blotting檢測(cè)JNK磷酸化水平。結(jié)果:1.人胃癌MGC-803和SGC-7901細(xì)胞通過穩(wěn)定轉(zhuǎn)染RASSF1A基因后,通過Western Blotting檢測(cè)發(fā)現(xiàn),與未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒組及pcDNA3.1(+)空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組相比,轉(zhuǎn)染pcDNA3.1(+)-RASSF1A質(zhì)粒組RASSF1A基因蛋白呈高表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),提示RASSF1A基因被成功轉(zhuǎn)染至人胃癌MGC-803和SGC-7901細(xì)胞,穩(wěn)定高表達(dá)RASSF1A基因2.人胃癌MGC-803細(xì)胞系和SGC-7901細(xì)胞系成功建立;Western Blotting結(jié)果顯示:人胃癌MGC-803細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染前后,轉(zhuǎn)染pcDNA3.1(+)-RASSF1A質(zhì)粒組與未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒組及pcDNA3.1(+)空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組相比,轉(zhuǎn)染pcDNA3.1(+)-RASSF1A質(zhì)粒組中P-JNK及JNK表達(dá)呈明顯下調(diào)趨勢(shì)(P0.05),而未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒組與pcDNA3.1(+)空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.通過裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn),建立穩(wěn)定高表達(dá)、未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒組和pcDNA3.1(+)空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組的不同分化程度的胃癌細(xì)胞(MGC-803和SGC-7901)裸鼠皮下成瘤模型,觀察皮下腫瘤生長(zhǎng),4-6w后提取瘤體組織,Western-blotting檢測(cè)JNK磷酸化水平,Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒組及pcDNA3.1(+)空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組相比,轉(zhuǎn)染pcDNA3.1(+)-RASSF1A質(zhì)粒組(穩(wěn)定高表達(dá))所形成的裸鼠瘤體組織中P-JNK及JNK表達(dá)呈下降趨勢(shì)(P0.05),而未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒組與pcDNA3.1(+)空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),以上均提示RASSF1A基因可調(diào)控胃癌細(xì)胞MGC-803和SGC-7901的JNK磷酸化表達(dá)水平。結(jié)論:RASSF1A基因可以下調(diào)人胃癌MGC-803細(xì)胞和SGC-7901細(xì)胞JNK磷酸化水平的表達(dá)。
[Abstract]:Objective: To study the effect of RASSF1A gene on the phosphorylation of JNK in human gastric cancer MGC-803 cells and SGC-7901 cells, to explore the effect of RASSF1A on the regulation of JNK signaling pathway in gastric carcinogenesis. Methods: Cultured in 2 different differentiation of human gastric cancer cells in vitro (1. MGC-803 cells and SGC-7901 cells), with stable transfection the transfection of RASSF1A gene, were used to detect the expression of RASSF1A gene in human gastric cancer cells before and after transfection with Western Blotting, Western Blotting to verify the stable transfection effect; detection of.2. RASSF1A gene in human gastric cancer cells JNK phosphorylation level before and after transfection were established stable transfection of RASSF1A gene high expression group and non transfection group and empty plasmid control of gastric cancer cells in nude mice subcutaneous tumor model group, extraction of tumor tissue after 4-6w, Western-blotting to detect the phosphorylation of JNK. Results: 1. human gastric carcinoma MGC-803 and SGC- 7901 cells by stable transfection of RASSF1A gene by Western, Blotting detection, and without transfection and pcDNA3.1 (+) compared with empty plasmid transfection group, transfected with pcDNA3.1 (+) -RASSF1A high expression plasmid group RASSF1A gene was, the difference was statistically significant (P0.05), suggesting that the RASSF1A gene was successfully transfected into human gastric cancer MGC-803 SGC-7901 and RASSF1A gene in 2. human gastric cancer cells, MGC-803 cells and SGC-7901 cells with high and stable expression was successfully established; Western Blotting showed that after transfection of human gastric cancer MGC-803 cells stable transfected pcDNA3.1 (+) -RASSF1A plasmid group and untransfected plasmid group and pcDNA3.1 (+) compared with empty plasmid transfection group, transfected with pcDNA3.1 (+) the expression of -RASSF1A P-JNK and JNK plasmid group was significantly decreased (P0.05), and non transfected plasmid group and pcDNA3.1 (+) compared with empty plasmid transfection group, the difference was not statistically significant (P0.05.2.) by naked Mouse xenograft experiments, to establish a stable high expression, without transfection and pcDNA3.1 (+) of different degree of differentiation of gastric cancer cells in the empty plasmid group (MGC-803 and SGC-7901) in nude mice subcutaneous tumor model of subcutaneous tumor growth, tumor tissue 4-6w extraction, Western-blotting detection of JNK phosphorylation, Western Blot results display, and without transfection and pcDNA3.1 (+) compared with empty plasmid transfection group, transfected with pcDNA3.1 (+) -RASSF1A plasmid group (high expression) decreased P-JNK and JNK expression in the tumor tissue formed in (P0.05), and non transfected plasmid group and pcDNA3.1 (+) compared with empty plasmid transfection group, the difference was not statistically significant (P0.05), all suggest that the RASSF1A gene MGC-803 and SGC-7901 regulate gastric cancer cells JNK phosphorylation expression levels. Conclusion: RASSF1A gene can downregulate human gastric cancer MGC-803 cells and SGC-7901 cells, the phosphorylation of JNK in water A flat expression.

【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.2

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本文編號(hào)：1652081