本文選題：RASSF1A基因　切入點：SGC-7901　出處：《南華大學》2015年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的:研究RASSF1A基因對人胃癌MGC-803細胞和SGC-7901細胞的JNK磷酸化水平的影響,初步探討RASSF1A對JNK信號通路的調控在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用。方法:1.體外培養(yǎng)2種不同分化程度的人胃癌細胞(MGC-803細胞和SGC-7901細胞),采用穩(wěn)定轉染法轉染RASSF1A基因后,利用Western Blotting分別檢測轉染前后RASSF1A基因在人胃癌細胞中的表達,驗證穩(wěn)定轉染效果;Western Blotting分別檢測轉染前后RASSF1A基因人胃癌細胞JNK磷酸化水平。2.分別建立穩(wěn)定轉染RASSF1A基因高表達組、未轉染組及空質粒對照組人胃癌細胞裸鼠皮下成瘤模型,4-6w后提取瘤體組織,Western-blotting檢測JNK磷酸化水平。結果:1.人胃癌MGC-803和SGC-7901細胞通過穩(wěn)定轉染RASSF1A基因后,通過Western Blotting檢測發(fā)現,與未轉染質粒組及pcDNA3.1(+)空質粒轉染組相比,轉染pcDNA3.1(+)-RASSF1A質粒組RASSF1A基因蛋白呈高表達,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),提示RASSF1A基因被成功轉染至人胃癌MGC-803和SGC-7901細胞,穩(wěn)定高表達RASSF1A基因2.人胃癌MGC-803細胞系和SGC-7901細胞系成功建立;Western Blotting結果顯示:人胃癌MGC-803細胞穩(wěn)定轉染前后,轉染pcDNA3.1(+)-RASSF1A質粒組與未轉染質粒組及pcDNA3.1(+)空質粒轉染組相比,轉染pcDNA3.1(+)-RASSF1A質粒組中P-JNK及JNK表達呈明顯下調趨勢(P0.05),而未轉染質粒組與pcDNA3.1(+)空質粒轉染組相比,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.通過裸鼠成瘤實驗,建立穩(wěn)定高表達、未轉染質粒組和pcDNA3.1(+)空質粒轉染組的不同分化程度的胃癌細胞(MGC-803和SGC-7901)裸鼠皮下成瘤模型,觀察皮下腫瘤生長,4-6w后提取瘤體組織,Western-blotting檢測JNK磷酸化水平,Western Blot實驗結果顯示,與未轉染質粒組及pcDNA3.1(+)空質粒轉染組相比,轉染pcDNA3.1(+)-RASSF1A質粒組(穩(wěn)定高表達)所形成的裸鼠瘤體組織中P-JNK及JNK表達呈下降趨勢(P0.05),而未轉染質粒組與pcDNA3.1(+)空質粒轉染組相比,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),以上均提示RASSF1A基因可調控胃癌細胞MGC-803和SGC-7901的JNK磷酸化表達水平。結論:RASSF1A基因可以下調人胃癌MGC-803細胞和SGC-7901細胞JNK磷酸化水平的表達。
[Abstract]:Objective: To study the effect of RASSF1A gene on the phosphorylation of JNK in human gastric cancer MGC-803 cells and SGC-7901 cells, to explore the effect of RASSF1A on the regulation of JNK signaling pathway in gastric carcinogenesis. Methods: Cultured in 2 different differentiation of human gastric cancer cells in vitro (1. MGC-803 cells and SGC-7901 cells), with stable transfection the transfection of RASSF1A gene, were used to detect the expression of RASSF1A gene in human gastric cancer cells before and after transfection with Western Blotting, Western Blotting to verify the stable transfection effect; detection of.2. RASSF1A gene in human gastric cancer cells JNK phosphorylation level before and after transfection were established stable transfection of RASSF1A gene high expression group and non transfection group and empty plasmid control of gastric cancer cells in nude mice subcutaneous tumor model group, extraction of tumor tissue after 4-6w, Western-blotting to detect the phosphorylation of JNK. Results: 1. human gastric carcinoma MGC-803 and SGC- 7901 cells by stable transfection of RASSF1A gene by Western, Blotting detection, and without transfection and pcDNA3.1 (+) compared with empty plasmid transfection group, transfected with pcDNA3.1 (+) -RASSF1A high expression plasmid group RASSF1A gene was, the difference was statistically significant (P0.05), suggesting that the RASSF1A gene was successfully transfected into human gastric cancer MGC-803 SGC-7901 and RASSF1A gene in 2. human gastric cancer cells, MGC-803 cells and SGC-7901 cells with high and stable expression was successfully established; Western Blotting showed that after transfection of human gastric cancer MGC-803 cells stable transfected pcDNA3.1 (+) -RASSF1A plasmid group and untransfected plasmid group and pcDNA3.1 (+) compared with empty plasmid transfection group, transfected with pcDNA3.1 (+) the expression of -RASSF1A P-JNK and JNK plasmid group was significantly decreased (P0.05), and non transfected plasmid group and pcDNA3.1 (+) compared with empty plasmid transfection group, the difference was not statistically significant (P0.05.2.) by naked Mouse xenograft experiments, to establish a stable high expression, without transfection and pcDNA3.1 (+) of different degree of differentiation of gastric cancer cells in the empty plasmid group (MGC-803 and SGC-7901) in nude mice subcutaneous tumor model of subcutaneous tumor growth, tumor tissue 4-6w extraction, Western-blotting detection of JNK phosphorylation, Western Blot results display, and without transfection and pcDNA3.1 (+) compared with empty plasmid transfection group, transfected with pcDNA3.1 (+) -RASSF1A plasmid group (high expression) decreased P-JNK and JNK expression in the tumor tissue formed in (P0.05), and non transfected plasmid group and pcDNA3.1 (+) compared with empty plasmid transfection group, the difference was not statistically significant (P0.05), all suggest that the RASSF1A gene MGC-803 and SGC-7901 regulate gastric cancer cells JNK phosphorylation expression levels. Conclusion: RASSF1A gene can downregulate human gastric cancer MGC-803 cells and SGC-7901 cells, the phosphorylation of JNK in water A flat expression.

【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2

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本文編號：1652081