本文選題：非小細(xì)胞肺癌　切入點(diǎn)：吉非替尼　出處：《浙江大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的明確自噬與非小細(xì)胞肺癌吉非替尼獲得性耐藥的相關(guān)性,同時(shí)闡明調(diào)控靶點(diǎn)HMGB1在自噬介導(dǎo)的吉非替尼NSCLC獲得性耐藥中的關(guān)鍵作用,以及Bcl-2和Beclin-1信號(hào)通路與HMGB1及吉非替尼NSCLC獲得性耐藥的關(guān)系。研究方法1.在吉非替尼敏感NSCLC細(xì)胞系PC9 (EGFR 19外顯子缺失)上,經(jīng)吉非替尼處理不同時(shí)間,構(gòu)建吉非替尼獲得性耐藥細(xì)胞株P(guān)C9-R(EGFR T790M、Met擴(kuò)增均為陰性)。通過AO染色檢測酸性囊泡、Western blot檢測耐藥過程不同階段自噬標(biāo)志蛋白LC3 Ⅰ、Ⅱ、p62 (SQSTM)表達(dá),明確在吉非替尼獲得性耐藥與自噬的相關(guān)性。2.采用小分子RNA干擾技術(shù)/脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù),構(gòu)建沉默/過表達(dá)HMGB1的PC9細(xì)胞,以不同濃度吉非替尼處理后,MTT法檢測考察抗腫瘤活性,Western blot檢測自噬標(biāo)志蛋白LC3 Ⅰ/Ⅱ、p62表達(dá),免疫組化法檢測LC3 Ⅰ/Ⅱ的分布,明確HMGB1對自噬調(diào)控及吉非替尼獲得性耐藥的影響。3.針對信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路HMGB1/Beclin和MAPK/Bcl2/HMGB1,以Western blot為檢測吉非替尼獲得性耐藥中Beclin-1、Bcl2、pJNK、pERK和p38表達(dá)的變化,考察自噬誘導(dǎo)的吉非替尼獲得性耐藥中]HMGB1與Beclin-1和Bcl2的相互作用和結(jié)合情況。結(jié)果1.吉非替尼耐藥過程中,自噬標(biāo)志蛋白LC3發(fā)生Ⅰ型向Ⅱ型的轉(zhuǎn)化、p62表達(dá)下降,表明吉非替尼獲得性耐藥過程中出現(xiàn)自噬。采用自噬抑制劑氯喹以及RNA干擾阻斷技術(shù)調(diào)控自噬水平,通過MTT法檢測發(fā)現(xiàn)抑制自噬的發(fā)生可以明顯增加吉非替尼的抗腫瘤活性,證明自噬介導(dǎo)吉非替尼獲得性耐藥的發(fā)生。2.在構(gòu)建的吉非替尼獲得性耐藥細(xì)胞株P(guān)C9/R中,耐藥過程中HMGB1的表達(dá)明顯上調(diào)；沉默HMGB1的表達(dá),吉非替尼的抗腫瘤活性明顯增強(qiáng),表明HMGB1參與吉非替尼獲得性耐藥的發(fā)生。另外,在沉默HMGB1表達(dá)后自噬標(biāo)志蛋白LC3 Ⅰ型向Ⅱ型轉(zhuǎn)變減少、p62的下調(diào)被逆轉(zhuǎn),證明HMGB1通過介導(dǎo)自噬過程發(fā)揮調(diào)控吉非替尼獲得性耐藥。3.吉非替尼獲得性耐藥中Beclin-1以及pBcl2表達(dá)上調(diào),Bcl2表達(dá)減少；抑制Beclin-1能明顯增強(qiáng)吉非替尼的抗腫瘤效果,說明Beclin-1參與吉非替尼獲得性耐藥的發(fā)生。在自噬誘導(dǎo)的吉非替尼獲得性耐藥中HMGB1與Beclin-1的結(jié)合明顯增多,促進(jìn)自噬介導(dǎo)的吉非替尼獲得性耐藥的發(fā)生。結(jié)論自噬是吉非替尼NSCLC獲得性耐藥的重要原因,]HMGB1作為關(guān)鍵靶點(diǎn)介導(dǎo)自噬調(diào)控的吉非替尼獲得性耐藥。而Bcl2/Beclin-1作為重要角色參與了HMGB1介導(dǎo)的吉非替尼獲得性耐藥。
[Abstract]:Objective to investigate the correlation between autophagy and gifitinib acquired drug resistance in non-small cell lung cancer, and to elucidate the key role of target HMGB1 in autophagy mediated gifitinib NSCLC acquired resistance. The relationship between Bcl-2 and Beclin-1 signaling pathway and acquired drug resistance of HMGB1 and gefitinib NSCLC. Methods 1. In Gifitini-sensitive NSCLC cell line PC9, the exon deletion of EGFR19 was treated at different times by gefitinib. The amplification of PC9-R(EGFR T790Met was negative. The expression of autophagy marker protein (LC3 鈪，

本文編號(hào)：1652010