本文選題：LncRNA　切入點(diǎn)：肝細(xì)胞癌　出處：《中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：肝癌是我國(guó)最常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)生和發(fā)展是一個(gè)多因素參與的復(fù)雜調(diào)控過程；長(zhǎng)鏈非編碼RNAs (Long non-coding RNA, LncRNAs)是指不具備蛋白編碼能力的,長(zhǎng)度大于200個(gè)核苷酸的RNA轉(zhuǎn)錄本。LncRNA參與調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、凋亡、遷移、基因組穩(wěn)定性等多種生理過程,其異常表達(dá)與多種疾病密切相關(guān),包括腫瘤。因此,尋找到肝癌中異常表達(dá)的LncRNA,揭示其在肝癌中的生物學(xué)功能及調(diào)節(jié)的信號(hào)通路,對(duì)闡明肝癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制、發(fā)現(xiàn)潛在的診斷和治療靶點(diǎn)具有重要意義。方法：采用晶芯(?)lncRNA芯片檢測(cè)16對(duì)肝癌及癌旁組織中LncRNA的表達(dá),篩選表達(dá)差異的LncRNA 。通過實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)LncTSG1在肝癌組織與癌旁組織中的表達(dá)水平,進(jìn)一步驗(yàn)證芯片結(jié)果。通過RACE技術(shù)鑒定LncTSG1的5’和3’序列,進(jìn)行數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)并擴(kuò)增LncTSG1全長(zhǎng)。通過在肝癌細(xì)胞中上調(diào)/下調(diào)LncTSG1的表達(dá)水平,檢測(cè)對(duì)肝癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響。通過生物信息學(xué)分析技術(shù)及RNA Pull Down聯(lián)合質(zhì)譜分析、RIP等實(shí)驗(yàn)方法尋找LncTSG1相互作用蛋白及調(diào)節(jié)的信號(hào)網(wǎng)絡(luò)。結(jié)果：采用晶芯(?)lncRNA芯片對(duì)16對(duì)肝癌及對(duì)應(yīng)癌旁組織中的LncRNA表達(dá)進(jìn)行檢測(cè),分析發(fā)現(xiàn)和癌旁組織相比,LncTSG1在肝癌組織中表達(dá)顯著下降。通過實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)對(duì)43對(duì)肝癌組織及相應(yīng)癌旁組織中LncTSG1的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè),發(fā)現(xiàn)相對(duì)于癌旁組織LncTSG1在肝癌組織中的表達(dá)水平顯著下調(diào),與芯片結(jié)果一致。通過RACE技術(shù)鑒定出LncTSG1的5’端和3’端序列,并成功擴(kuò)增出LncTSG1的全長(zhǎng),與數(shù)據(jù)庫(kù)中的序列比對(duì),結(jié)果顯示5’端序列與數(shù)據(jù)庫(kù)中注釋的序列一致,3’端序列較數(shù)據(jù)庫(kù)中注釋的序列少約100bp。對(duì)表達(dá)譜芯片結(jié)果進(jìn)行生物信息學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)LncTSG1與參與EMT及細(xì)胞遷移相關(guān)的信號(hào)通路關(guān)系密切。通過在肝癌細(xì)胞中上調(diào)/下調(diào)LncTSG1的表達(dá),進(jìn)行相應(yīng)的細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示,通過轉(zhuǎn)染LncTSG1的重組質(zhì)粒上調(diào)LncTSGl表達(dá)后,肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力降低;通過siRNA干擾下調(diào)LncTSG1的表達(dá)后,肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力增強(qiáng),而增殖能力無明顯變化。同時(shí),下調(diào)LncTSG1可促進(jìn)肝癌細(xì)胞發(fā)生EMT轉(zhuǎn)變。熒光原位雜交及細(xì)胞組分分離技術(shù)證實(shí)LncTSG1主要定位于細(xì)胞漿。采用生物信息學(xué)方法分析并通過RIP實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)LncTSG1可與AG02結(jié)合,提示LncTSG1在胞漿中可作為ceRNA發(fā)揮作用。通過預(yù)測(cè)軟件分析可能與LncTSG1結(jié)合的micoRNA,并通過文獻(xiàn)檢索,發(fā)現(xiàn)has-miR-372和has-miR-10b與腫瘤的轉(zhuǎn)移相關(guān),是LncTSG1潛在調(diào)控靶點(diǎn)。通過實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)二者下游靶基因的表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)抑制LncTSG1的表達(dá)能夠顯著下調(diào)腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因ARHGAP6、CELF2、MAPK10、TNS1、SYNPO2的表達(dá),表明LncTSG1可能通過干擾has-miR-372和has-miR-10b對(duì)下游mRNA的調(diào)控來發(fā)揮ceRNA的功能。同時(shí),通過RNA Pull Down聯(lián)合質(zhì)譜分析發(fā)現(xiàn)LncTSG1可與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白hnRNP H結(jié)合。結(jié)論：與正常肝組織相比LncTSG1在肝癌組織標(biāo)本中表達(dá)量顯著下調(diào)。LncTSG1能夠顯著抑制肝癌細(xì)胞的遷移、侵襲能力及EMT轉(zhuǎn)變,表明LncTSG1是肝癌中重要的抑癌基因,是潛在的治療靶點(diǎn)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7

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本文編號(hào)：1650579