本文選題：乳腺癌　切入點：HIF-2α　出處：《鄭州大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：研究背景及目的:乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤之一,非特殊型浸潤性癌(Non-specific type of invasive carcinoma),是浸潤性乳腺癌最常見的組織學類型,占40-70%左右。研究發(fā)現(xiàn),缺氧微環(huán)境是實體腫瘤的典型特征,被認為是導致腫瘤進展及預后差的始動因素,為了適應缺氧的微環(huán)境,腫瘤細胞會產(chǎn)生一系列生物學行為的改變,其中缺氧誘導因子(hypoxia induced factors,HIFs)發(fā)揮著重要的調節(jié)作用。目前已發(fā)現(xiàn)HIFs有三個亞型:HIF-1α、HIF-2α以及HIF-3α,以往的研究主要集中在HIF-1α,主要是HIF-1α與乳腺癌血管生成、腫瘤增殖與轉移、耐藥相關蛋白等方面,HIF-2α的研究相對較少。上皮-間質轉化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)指由非移動的、極性排列的上皮細胞向移動的、非極性排列的間質細胞轉變,同時獲得向遠處器官遷移、生長、種植的潛能的過程。在惡性腫瘤可導致腫瘤細胞遷移和侵襲能力增強,腫瘤侵襲性增加。HIF-2α是缺氧應激作用下產(chǎn)生的轉錄因子,其表達可以有效調控靶基因活性打破細胞內(nèi)氧失衡狀態(tài),比如新生血管形成基因(CEGF、PIGF)、增殖轉移基因(MMP、SDF1、CXCR4、LOX)、上皮間質轉化(SNAIL、TWIST、SIP)等,有助于新生血管生成的維持,也可以對腫瘤的浸潤轉移產(chǎn)生影響。研究發(fā)現(xiàn),HIF-2α的異常表達參與腫瘤放化療抵抗,提示HIF-2α與腫瘤的不良預后有關,HIF-2α有可能成為腫瘤治療的靶點。Twist家族是HIF-2α眾多調控基因中的一個,Twist2也稱為Dermo1,是參與調控上皮間質轉化的主要轉錄因子,可以誘導腫瘤細胞EMT的過程進而利于其遷徙、侵襲、轉移。乳腺浸潤性癌發(fā)生上皮間質轉化一定程度上決定了腫瘤轉移,提升了死亡率縮短了生存期,嚴重影響患者預后。目前有關乳腺癌組織中HIF-2α與上皮間質轉化關系的報道較少,本課題以乳腺非特殊型浸潤性癌為研究對象,采用免疫組織化學SP法和原位雜交(ISH)技術分別檢測乳腺浸潤性癌原發(fā)灶、良性纖維腺瘤、癌旁正常組織中HIF-2α蛋白和mRNA的表達情況,同時檢測癌組織中Twist2、E-cadherin以及vimentin的表達,探討HIF-2α與上皮間質轉化是否存在關聯(lián),并分析HIF-2α對乳腺癌預后的影響因素,為HIF-2α是否可以作為乳腺癌臨床治療的靶點提供實驗依據(jù)。方法:1.收集2011年8月-2012年1月乳腺非特殊型浸潤性癌石蠟標本92例、癌旁正常組織30例、纖維腺瘤21例,采用免疫組化SP法檢測各組中HIF-2α、Twist2、E-cadherin、vimentin蛋白的表達,分別分析其表達與臨床病理參數(shù)的相關性以及他們之間的關聯(lián)。2.收集2015-2016年乳腺非特殊型浸潤性癌石蠟標本22例、癌旁正常組織20例、纖維腺瘤20例,采用原位雜交方法檢測組織切片中HIF-2αmRNA的表達情況,從基因水平檢測其表達在乳腺癌中的差異。3.對92例乳腺癌進行隨訪,采用Kapln-Meier法和Log-rank檢驗進行生存分析,多因素Cox比例回歸模型分析乳腺癌預后的影響因素。結果:1.HIF-2α蛋白在92例乳腺癌、21例纖維腺瘤和30例癌旁正常組織中陽性率分別為71.73%(66/92)、42.85%(9/21)和36.66%(11/30),HIF-2αmRNA在22例乳腺癌、20例纖維腺瘤和20例癌旁正常組織中陽性率分別為77.27%(17/22)、25.00%(5/20)和15.00%(3/20),HIF-2α蛋白以及mRNA在這三組中的表達均呈現(xiàn)一致性,很明顯看出,陽性表達較高的是乳腺癌組(P均0.05)。HIF-2α蛋白陽性表達與腫瘤大小、淋巴結轉移、分子分型有關(P0.05),與患者年齡(P=0.921)、組織學分級(P=0.566)、TNM分期(P=0.209)均無關。2.Twist2蛋白在92例乳腺癌、21例纖維腺瘤和30例癌旁正常組織中陽性率分別為57.60%(53/92)、19.04%(4/21)和16.66%(5/30),且三組之間的不同表達有統(tǒng)計學意義(P0.05);Twist2蛋白的表達與腫瘤的組織學分級、淋巴結轉移和分子分型有關(P0.05),與患者年齡(P=0.915)、腫瘤大小(P=0.736)、TNM分期(P=0.757)均無關。3.上皮標志物E-cadherin在乳腺癌組陽性率58.69%(54/92)低于腺瘤組85.71%(18/21)和癌旁正常組93.33%(28/30),其表達與腫瘤的大小、組織學分級、淋巴結轉移和分子分型有關(P0.05),與患者年齡(P=0.615)、TNM分期(P=1.000)均無關。間質標志物vimentin在乳腺癌組陽性率46.73%(43/92)高于腺瘤組23.83%(5/21)和正常組13.33%(4/30),其表達與腫瘤的淋巴結轉移、TNM分期和分子分型有關(P0.05),與患者年齡(P=0.724)、腫瘤大小(P=0.970)、組織學分級(P=0.129)均無關。4.對乳腺癌組織進行檢測后發(fā)現(xiàn),蛋白HIF-2α和Twist2的表達是存在正相關的(r=0.452,P=0.000),而上皮以及間質兩標志物之間的表達存在顯著負相關(r=-0.570,P=0.000),HIF-2α和Twist2蛋白的表達均與E-cadherin負相關,與vimentin正相關(P均0.05)。5.HIF-2α陰性組、Twist2陰性組、E-cadherin陽性組和vimentin陰性組分別比其另一組擁有更高的總生存率和更長的平均生存時間,但只有HIF-2α組和E-cadherin組K-M生存曲線差異存在統(tǒng)計學意義(P0.05),Twist2組和vimentin組K-M生存曲線不存在統(tǒng)計學差異(P0.05)。6.多因素生存分析顯示只有淋巴結轉移(RR=6.022,95%CI 2.852~12.717,P=0.000)、腫瘤大小(RR=2.621,95%CI 1.123~6.117,P=0.026)和HIF-2α狀態(tài)(RR=3.821,95%CI 1.092~13.372,P=0.036)可以作為乳腺癌患者生存預后的獨立影響因素(P0.05),而其他預后指標,比如年齡、組織學分級、TNM分期、分子分型等均為乳腺癌的非獨立預后因素(P0.05)。結論:HIF-2α在乳腺癌中異常表達,可能通過介導Twist2參與到乳腺癌EMT過程中,引起了腫瘤的浸潤轉移并影響生存預后。
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【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9
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本文編號：1644956