發(fā)布時(shí)間：2018-03-19 03:10

  本文選題：胃癌(gastric　切入點(diǎn)：cancer　出處：《上海交通大學(xué)》2015年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：目的免疫調(diào)節(jié)在胃癌發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。近來(lái),研究發(fā)現(xiàn)一群具有調(diào)節(jié)作用的B淋巴亞群——稱(chēng)為調(diào)節(jié)性B淋巴細(xì)胞(regulatory B cells,Breg)。Breg在自身免疫性疾病中的研究已經(jīng)取得了初步研究結(jié)果,但是Breg在胃癌中的作用并不清楚。本研究以原發(fā)性胃癌(gastric cancer,GC)為研究對(duì)象,檢測(cè)調(diào)節(jié)性B淋巴細(xì)胞(Breg)在胃癌中的百分比變化,探討其在胃癌中的表面標(biāo)志特性,研究Breg細(xì)胞在胃癌中可能的作用及相關(guān)機(jī)制,為調(diào)節(jié)性B淋巴細(xì)胞在胃癌及人類(lèi)腫瘤甚至其在其他疾病中的研究提供研究基礎(chǔ)。方法(1)用流式細(xì)胞儀分析的方法測(cè)定40例健康對(duì)照組(Healthy control,HC)和107例原發(fā)性胃癌患者(gastric cancer,GC)外周血中CD19~+B淋巴的百分比的狀況,研究胃癌患者外周血B淋巴百分比與其腫瘤TNM分期的關(guān)系。免疫組織化學(xué)染色的方法檢測(cè)不同TNM分期胃癌患者腫瘤組織局部CD19~+B淋巴細(xì)胞的分布情況。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)的方法檢測(cè)和分析胃癌患者正常組織、癌旁組織及腫瘤組織中CD19~+B淋巴細(xì)胞(CD45~+CD19~+)在淋巴細(xì)胞中的百分比。(2)ELISA方法檢測(cè)胃癌患者血清中分泌的細(xì)胞因子IL-10的水平。流式細(xì)胞術(shù)分析胃癌患者外周血PBMC及癌旁組織及腫瘤組織B淋巴細(xì)胞中CD19~+IL-10~+B淋巴細(xì)胞的百分比。(3)采用多色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)表面標(biāo)志CD5、CD1d、CD24、CD38、Ig M、CD25、CD10、CD21、CD20各指標(biāo)在IL-10~+B淋巴細(xì)胞和IL-10-B淋巴細(xì)胞表面平均熒光強(qiáng)度(MFI)表達(dá)的不同,確定Breg細(xì)胞合適的表面標(biāo)志為CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi)。(4)流式細(xì)胞術(shù)分析胃癌患者外周血PBMC及腫瘤組織淋巴細(xì)胞中CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi)在CD19~+B淋巴細(xì)胞的百分比變化,分析Breg細(xì)胞百分比與腫瘤TNM分期的可能關(guān)系。(5)通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析胃癌患者體內(nèi)中CD3~+T淋巴細(xì)胞、CD3~+CD4~+Th淋巴細(xì)胞、CD3~+CD8~+Tc淋巴細(xì)胞、CD3-CD19~+B淋巴細(xì)胞、CD3-(CD16~+56)~+NK淋巴細(xì)胞、CD3~+(CD16~+56)~+NKT淋巴細(xì)胞的百分比,詳細(xì)分析胃癌患者中各功能細(xì)胞亞群如CD4~+IFN-γ~+Th1細(xì)胞、CD4~+IL-4~+Th2細(xì)胞和CD4~+Fox P3~+Treg細(xì)胞的百分比變化。(6)進(jìn)一步分析胃癌患者中CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi) Breg細(xì)胞與各細(xì)胞亞群的相關(guān)關(guān)系。(7)采用流式細(xì)胞分選技術(shù)、CFSE染色、細(xì)胞共培養(yǎng)、流式細(xì)胞檢測(cè)等方法研究CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi) Breg細(xì)胞對(duì)CD3~+T淋巴細(xì)胞、CD3~+CD4~+Th淋巴細(xì)胞、CD3~+CD8~+Tc淋巴細(xì)胞亞群增殖的影響,檢測(cè)Breg細(xì)胞對(duì)Th淋巴細(xì)胞、Tc淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響,檢測(cè)Breg細(xì)胞對(duì)Treg細(xì)胞轉(zhuǎn)化生成的影響。(8)通過(guò)功能抗體中和阻斷實(shí)驗(yàn)評(píng)估IL-10及TGF-β在Treg細(xì)胞轉(zhuǎn)化過(guò)程中是否起到作用。研究中統(tǒng)計(jì)分析采用Graph Pad Prism 5.0軟件分析。結(jié)果(1)40例健康對(duì)照和107例胃癌患者外周血標(biāo)本中B淋巴細(xì)胞的百分比無(wú)明顯差異(14.03%±4.39%vs 15.06%±7.47%,P0.05)。(2)胃癌患者不同TNM分期(Ⅰ期18例、Ⅱ期40例、Ⅲ期46例和Ⅳ期3例),分析其外周血中B淋巴細(xì)胞百分比與TNM分期的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)不同TNM分期其外周血中B淋巴細(xì)胞百分比不同,Ⅰ期Ⅱ期Ⅲ期,但Ⅳ期例外:TNM III期胃癌患者外周血CD19~+B淋巴細(xì)胞的百分比顯著低于TNM I期患者(P0.001),而且低于TNM II期患者(P0.05),而TNM IV患者外周血B淋巴細(xì)胞百分比增高,高于TNM III期患者,兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(3)流式細(xì)胞術(shù)及免疫組織化學(xué)染色都檢測(cè)到大量B淋巴細(xì)胞在腫瘤組織局部的聚集。(4)ELISA檢測(cè)發(fā)現(xiàn)胃癌患者外周血中細(xì)胞因子IL-10明顯高于健康對(duì)照組(P0.001)。流式細(xì)胞術(shù)的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)胃癌患者外周血中CD19~+IL-10~+B細(xì)胞百分比顯著高于健康對(duì)照組(P0.001)。采用流式細(xì)胞術(shù)的檢測(cè)方法,檢測(cè)胃癌患者外周血PBMC及癌旁組織、腫瘤組織B淋巴細(xì)胞中CD19~+IL-10~+B淋巴細(xì)胞的百分比,發(fā)現(xiàn)胃癌患者腫瘤組織中CD19~+IL-10~+B細(xì)胞百分比高于癌旁組織(P0.05),顯著高于外周血PBMC(P0.01)。(5)多色流式細(xì)胞術(shù)分析IL-10~+B淋巴細(xì)胞表面的特征發(fā)現(xiàn),IL-10~+B淋巴細(xì)胞上CD5、CD38、CD24和CD25的熒光強(qiáng)度明顯高于IL-10-B淋巴細(xì)胞(P0.001),IL-10~+B淋巴細(xì)胞上CD1d、Ig M和CD10的熒光強(qiáng)度高于IL-10-B淋巴細(xì)胞(P0.01),IL-10~+B淋巴細(xì)胞上CD21的熒光強(qiáng)度高于IL-10-B淋巴細(xì)胞(P0.05),而CD20的表達(dá)在IL-10~+B淋巴細(xì)胞和IL-10-B淋巴細(xì)胞兩群細(xì)胞之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。分析發(fā)現(xiàn)CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi) B細(xì)胞分泌大量IL-10,以此表面標(biāo)記作為胃癌中Breg細(xì)胞的表面特征,用于后續(xù)的功能研究。(6)統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn),胃癌患者組外周血中CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi) Breg細(xì)胞百分比顯著高于健康對(duì)照組(P0.001),將胃癌早期(即TNM I期和TNM II期)與胃癌晚期(即TNM III期和TNM IV期)比較分析,統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi) Breg細(xì)胞百分比隨著TNM分期的增加而有增高的趨勢(shì),但兩組間并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。(7)流式細(xì)胞術(shù)分析胃癌患者中各功能細(xì)胞亞群如CD4~+IFN-γ~+Th1細(xì)胞、CD4~+IL-4~+Th2細(xì)胞和CD4~+Fox P3~+Treg細(xì)胞的表達(dá),發(fā)現(xiàn)胃癌患者外周血CD4~+IFN-γ~+Th1細(xì)胞的百分比明顯低于健康對(duì)照組(P0.01),Th2細(xì)胞的百分比在健康對(duì)照組和胃癌患者組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,發(fā)現(xiàn)胃癌患者外周血中Treg細(xì)胞的百分比明顯高于健康對(duì)照組(P0.01)。(8)進(jìn)一步分析胃癌患者中CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi) Breg細(xì)胞與各細(xì)胞亞群的相關(guān)關(guān)系。統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn),Breg細(xì)胞與CD3~+T淋巴細(xì)胞(R=0.3917,P0.05)、CD3~+CD8~+Tc淋巴細(xì)胞(R=0.5100,P0.01)具有直線相關(guān)性,而且Breg細(xì)胞與CD4~+Fox P3~+Treg細(xì)胞具有較好的直線相關(guān)性(R=0.4252,P0.01)。(9)研究CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi) Breg細(xì)胞功能發(fā)現(xiàn),Breg細(xì)胞對(duì)CD3~+T細(xì)胞、Th細(xì)胞、Tc細(xì)胞增殖無(wú)明顯影響(P0.05),但對(duì)CD4~+Th細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IFN-γ和TNF-a均具有明顯抑制作用(P0.01)。(10)進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi) Breg細(xì)胞可以誘導(dǎo)CD4~+CD25-效應(yīng)性T細(xì)胞表達(dá)Fox P3水平顯著增高(P0.01)。而且研究發(fā)現(xiàn),胃癌患者體內(nèi)的CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi) Breg細(xì)胞可以誘導(dǎo)CD4~+CD25-效應(yīng)性T細(xì)胞表達(dá)Fox P3水平高于健康對(duì)照組(P0.05)。不僅Real-Time PCR在m RNA水平上證實(shí),流式細(xì)胞術(shù)也檢測(cè)到CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi) Breg細(xì)胞除了可以分泌大量IL-10以外,也可以分泌大量TGF-β。通過(guò)中和實(shí)驗(yàn)證實(shí),在CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi) Breg細(xì)胞誘導(dǎo)CD4~+CD25-效應(yīng)性T細(xì)胞表達(dá)Fox P3的過(guò)程中,此功能的發(fā)揮不是依賴(lài)IL-10,而是依賴(lài)TGF-β。結(jié)論胃癌外周血中CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi) Breg細(xì)胞百分比的增高,而且隨著TNM分期增加存在著增高的趨勢(shì),提示Breg細(xì)胞可能與腫瘤的發(fā)展相關(guān)。CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi) Breg可以抑制Th細(xì)胞因子的分泌,而且同時(shí)以TGF-β依賴(lài)的途徑誘導(dǎo)Treg細(xì)胞的增多,Breg細(xì)胞可能打破了機(jī)體的抗腫瘤免疫,參與了胃癌的免疫逃逸,參與了胃癌的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移�？紤]到Breg細(xì)胞在腫瘤中可能發(fā)揮的抑制腫瘤的效應(yīng),特異性去除減少或降低胃癌患者體內(nèi)的Breg細(xì)胞的水平,或許可以提高機(jī)體的抗腫瘤免疫應(yīng)答,提高腫瘤的免疫治療效果。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 龍文;;胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)19例臨床研究[J];現(xiàn)代診斷與治療;2013年02期

2 呂承福;一例胃癌晚期患者因意外傷害而痊愈的啟示[J];針灸臨床雜志;1996年04期

3 王璦萍,田衛(wèi)衛(wèi);胃癌并心包轉(zhuǎn)移1例[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志;2000年13期

4 王健,鄒義壯,唐麗麗,李杰,張東,金山,劉娟;胃癌患者的生存期與個(gè)性特征、應(yīng)付方式及免疫功能的相關(guān)性研究[J];中華精神科雜志;2001年03期

5 王博文,楊波,趙淑琴;青年胃癌33例臨床分析[J];寧夏醫(yī)學(xué)雜志;2002年10期

6 劉步珍,張海芳;以胃外表現(xiàn)為首發(fā)癥狀的胃癌26例誤診分析[J];山東醫(yī)藥;2003年18期

7 任剛,蔡嶸,陳強(qiáng),許幼如,程普選,陳惠芳;女性胃癌[J];上海醫(yī)學(xué);2003年03期

8 王盛根,王壽九,吳楠,潘桂紅,焦霞;母子同時(shí)患胃癌報(bào)告[J];臨床腫瘤學(xué)雜志;2004年01期

9 徐開(kāi),陳連珠;1例胃癌晚期術(shù)后使用苦草治療[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2004年24期

10 唐建榮;;胃癌患者192例首診漏誤診分析[J];中國(guó)臨床醫(yī)生;2007年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前4條

1 張恩寧;;胃癌[A];山東省第四屆“CSCO——山東”首屆腫瘤化療學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2009年

2 徐智民;周丹;張萬(wàn)岱;何燕萍;智發(fā)朝;朱建新;王莉慧;肖冰;潘德壽;宋姍;趙永玲;;幽門(mén)螺桿菌感染及其免疫型與胃癌的關(guān)系研究[A];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)第十四次全國(guó)消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2002年

3 魏品康;;胃癌非手術(shù)療法治療研究與策略[A];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)第十六次全國(guó)消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2004年

4 郭新海;毛芙敏;吳旭輝;許敬;凌志強(qiáng);李繼承;;舟山海島地區(qū)胃癌D17S396基因遺傳不穩(wěn)定性與胃癌的淋巴轉(zhuǎn)移[A];2009年浙江省腫瘤學(xué)術(shù)年會(huì)暨腫瘤診治新進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2009年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 天津市腫瘤醫(yī)院 梁寒;五類(lèi)人警惕胃癌[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2007年

2 本報(bào)記者 項(xiàng)煜虹;胃癌正襲向習(xí)慣不良的年輕人群[N];大眾科技報(bào);2008年

3 天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院胃部腫瘤科教授 梁寒　整理 李運(yùn)紅 胡顏;胃癌盯上中堅(jiān)力量[N];健康報(bào);2008年

4 本報(bào)記者 劉學(xué)美;警惕胃癌[N];中國(guó)消費(fèi)者報(bào);2000年

5 ;胃癌晚期能活多久[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2010年

6 本報(bào)記者　朱勤;三代教授破解“莊河之謎”[N];遼寧日?qǐng)?bào);2006年

7 ;胃癌:隱蔽的殺手[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

8 健康時(shí)報(bào)記者 劉永曉　特約記者 施敏;胃癌新晉青年殺手[N];健康時(shí)報(bào);2011年

9 趙迎 任勇;胃癌襲向年輕人[N];天津日?qǐng)?bào);2006年

10 北京天壇醫(yī)院外科主任 宋茂民;預(yù)防胃癌牢記九點(diǎn)[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 秦云植;NQO1及其抑制劑在胃癌預(yù)后評(píng)估及靶向治療中的作用研究[D];延邊大學(xué);2015年

2 宋宗昌;PRR11在胃癌細(xì)胞增殖與體內(nèi)生長(zhǎng)中的作用及其機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 石s，

本文編號(hào)：1632552