發(fā)布時間：2018-03-17 16:32

  本文選題：食管鱗狀細胞癌　切入點：NCOA5　出處：《山東大學》2016年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：研究背景及意義腫瘤因其極高的致死率,一直以來都是世界范圍內(nèi)人們關注的首要的健康問題。隨著現(xiàn)代醫(yī)學的發(fā)展,人們針對腫瘤的斗爭已經(jīng)持續(xù)了幾十年。通過近幾十年的斗爭,雖然未能攻克腫瘤這一難題,但是,人們已經(jīng)對其有了許多極其有益的認識,在研究與實踐中總結出了惡性腫瘤的諸多特性,如自給自足的生長信號通路、不斷地自我復制并逃避凋亡以及生長抑制信號的控制,誘導血管生成,激活侵襲轉移機制向鄰近組織以及遠處播散等。從這些角度出發(fā),有助于我們更好的研究各種不同的惡性腫瘤。食管鱗癌作為食管癌的一個重要亞型,惡性程度極高,且在我國有著極高的發(fā)病率。其旺盛的生長力導致腫瘤發(fā)展速度極快,大多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時已處腫瘤晚期。同時食管鱗癌還有著極強的侵襲性,極易向周圍組織浸潤,并通過淋巴途徑向遠處播散。這些都使得食管鱗癌的治療變得極為棘手。目前為止,能夠提高患者預后的主要方法依然是早期發(fā)現(xiàn)早期針對性的治療。因此,如能通過對影響食管鱗癌進展及預后的分子生物學指標進行研究,發(fā)現(xiàn)一種非侵襲性的檢查方法或者治療靶點,篩查發(fā)現(xiàn)早期食管鱗癌患者,或者對術后預后較差的患者進行篩選,進行有針對性的治療,將有極其重要的臨床價值。NCOA5是一種獨特的核受體共激活因子,能夠特異性的與雌激素受體a(ERa)及雌激素受體p(ERβ)相結合。該共激活因子通過與受體的配體結合域(LBD)結合,調(diào)控核受體激活相應的目的基因,調(diào)節(jié)生殖、生長、發(fā)育等多種重要的信號轉導過程。目前對其研究十分有限,主要集中在其與ERa的相互作用上。然而這已經(jīng)顯示出NCOA5在腫瘤進展中所發(fā)揮的重要作用。對NCOA5表達缺陷的小鼠進行研究,發(fā)現(xiàn)其肝臟中胰島素受體β(IR-β)、胰島素受體底物-1(IRS-1)以及蛋白激酶B(AKT)的磷酸化受到了嚴重的影響,同時有眾多涉及到NF-κB、雄激素以及胰島素通路的基因發(fā)生了表達量的變化。NCOA5通過對IL-6表達量的影響等多種途徑促使了肝細胞癌的發(fā)生。因此,對NCOA5進行更深入的研究,可能有利于加深對包括食管鱗癌在內(nèi)的其他惡性腫瘤進展機制的認識,為食管鱗癌的診治提供新的靶點。SIRT1作為酵母菌沉默信息調(diào)節(jié)因子2(Sir2)在哺乳動物中的同源物,在進化過程中高度保守,是一種NAD+依賴的組蛋白去乙酰化酶,屬于Ⅲ型組蛋白脫乙�；�(HDAC)家族。SIRT1通過其多層次的調(diào)節(jié)作用,參與到諸如細胞代謝、長壽以及壓力應激等多種重要的生物學過程之中。隨著對該分子研究的深入,其在腫瘤發(fā)展中起到的作用越來越受到關注。雖然已經(jīng)發(fā)現(xiàn)SIRT1在多種類型的腫瘤中存在過表達,而且能夠通過去乙�；饔靡种浦T如p53、叉頭(FOXO)轉錄因子家族在內(nèi)的多種重要的腫瘤抑制因子誘導凋亡的能力,但是SIRT1在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用仍然令人迷惑。如SIRT1被激動劑白藜蘆醇激活后不僅沒有起到促進腫瘤生長的效果,反而使某些腫瘤細胞的生長受到抑制。同時還發(fā)現(xiàn),在部分腫瘤中,SIRT1的表達明顯降低。最近有研究顯示,SIRT1還能參與調(diào)控腫瘤中VEGF-C的表達,提示SIRT1可能參與腫瘤的微淋巴管生成。綜上所訴,NCOA5及SIRT1在腫瘤進展及預后中發(fā)揮重要作用,然而他們與食管鱗癌的關系,國內(nèi)外目前仍沒有報道,于是我們將焦點對準其中,進行了以下三個部分的研究：第一部分,檢測NCOA5在食管鱗癌患者腫瘤及鄰近正常組織中的表達,探討NCOA5表達與食管癌鱗癌患者各項臨床病理特征以及預后的關系；第二部分,通過轉染過表達NCOA5,研究NCOA5過表達對食管鱗癌細胞各種惡性生物學行為的影響；第三部分,通過檢測SIRT1等指標在pN0期食管鱗癌患者中的表達,探究SIRT1與腫瘤微淋巴管生成、淋巴管浸潤以及患者各臨床特征間的關系,同時探討SIRT1、腫瘤微淋巴管生成以及淋巴管浸潤對該部分患者預后的影響。第一部分NCOA5蛋白低表達與食管鱗癌患者預后間的關系目的：探究NCOA5在食管鱗癌(ESCC)中的表達及其與食管鱗癌患者生存預后之間的關系。方法：應用免疫組織化學法檢測NCOA5在119名食管鱗癌患者腫瘤組織中的表達。應用Western blot法檢測十對新鮮的腫瘤及鄰近正常組織中NCOA5的表達。應用統(tǒng)計分析分析其表達與各種臨床指標之間的關系,以及對患者預后的影響。結果：通過免疫組織化學法檢測發(fā)現(xiàn),NCOA5表達與腫瘤分化程度(P=0.039),T分期(P=0.047)以及腫瘤分期(P=0.036)顯著相關。此外,我們通過Western blot法檢測發(fā)現(xiàn)NCOA5在正常組織中表達高于相應腫瘤組織中。單因素分析顯示較差的分化程度(P=0.035,P=0.027),淋巴結轉移(P0.001,P0.001),較高的T分期(P=0.010,P=0.012),較晚的腫瘤分期(P0.001,P0.001)以及NCOA5低表達(P0.001,P0.001)與不良的無病生存期(DFS)以及總生存期(OS)都顯著相關。多因素分析顯示NCOA5低表達(P=0.019,P=0.047),較高的T分期(P=0.015,P=0.012),淋巴結轉移(P=0.040,P=0.021)以及較晚的腫瘤分期(P=0.017,P=0.046)都是較差DFS和OS預后的獨立危險因素。結論：該研究顯示NCOA5低表達與ESCC進展具有相關性,同時,NCOA5低表達還是預測ESCC患者較差預后的潛在性生物指標。對NCOA5進一步的研究有可能幫助找出新的、更加有效的針對ESCC的診療策略。第二部分NCOA5蛋白表達與食管鱗癌細胞惡性生物學行為的相關性研究目的：探究NCOA5在食管鱗癌細胞中的表達,并研究NCOA5過表達對食管鱗癌增殖、凋亡、遷移以及侵襲等惡性生物學行為的影響,明確NCOA5在食管鱗癌細胞中發(fā)揮的作用。方法：應用Western blot檢測NCOA5在多種食管鱗癌細胞中的表達。通過轉染pcDNA3.1-NCOA5促使細胞中過表達NCOA5,并進一步探究其對食管鱗癌細胞增殖的影響。應用流式細胞學技術,檢測NCOA5過表達后食管鱗癌細胞凋亡情況,并應用Western blot檢測Bcl-2、Bax表達量的變化。應用細胞劃痕實驗、Transwell小室遷移侵襲實驗,以及Western blot檢測E-cadherin表達量,探究NCOA5對食管鱗癌細胞遷移以及侵襲能力的影響。結果：NCOA5表達量在EC109、TE-13、TE-8三種細胞系中均較少。轉染]pcDNA3.1-NCOA5后48h,Western blot檢測到NCOA5蛋白表達量顯著增高(P0.05)。MTT實驗檢測發(fā)現(xiàn),過表達NCOA5的食管鱗癌細胞系EC109、TE-13增殖能力明顯減弱(P0.05)。流式細胞學檢測發(fā)現(xiàn),EC109、TE-13在NCOA5表達上調(diào)之后,腫瘤細胞凋亡率均明顯增高(P0.05),同時Bcl-2表達下降(P0.05),Bax表達增高(P0.05)。細胞劃痕實驗以及Transwell小室遷移侵襲實驗發(fā)現(xiàn),NCOA5過表達的食管鱗癌細胞,遷移和侵襲能力都被削弱(P0.05),并伴有E-cadherin表達量的升高(P0.05)。結論：NCOA5的表達對食管鱗癌增殖、凋亡、遷移以及侵襲等多種惡性生物學行為均有顯著影響,NCOA5表達缺失可能是食管鱗癌疾病的進展中重要的一環(huán),對NCOA5更加深入的研究將有助我們更好的了解該疾病,并將會對其治療起到有益的作用。第三部分SIRT1蛋白表達與淋巴管生成、淋巴管侵襲及pN0期食管鱗狀細胞癌患者預后間關系的研究目的：探究SIRT1在pN0期食管鱗狀細胞癌中的表達,在淋巴管生成、淋巴管侵襲(LVI)中的作用以及對pN0期ESCC患者預后的影響。方法：共有206例患者被納入到該回顧性研究中。應用免疫組織化學法測定SIRT1以及VEGF-C的表達。癌旁微淋巴管密度(LVD)以及LVI應用免疫組織化學法染色D2-40來進行標記、評估。應用相關統(tǒng)計學方法來探究SIRT1表達與各種臨床病理學特征之間的關系以及SIRT1對腫瘤誘導的微淋巴管生成、LVI以及ESCC患者預后的影響。結果：SIRT1被發(fā)現(xiàn)主要表達于細胞核中。SIRT1在95例患者腫瘤標本中呈現(xiàn)高表達并與T分期(P0.001),腫瘤分期(P=0.001),VEGF-C陽性表達(P=0.015),高LVD(P=0.013)以及陽性LVI(P=0.015)顯著相關。腫瘤組織標本中SIRT1高表達,高LVD以及LVI陽性的患者五年無病生存期(P0.001,P=0.030,P0.001)以及總生存期(P0.001,P=0.017,P0.001)較差,結果具有統(tǒng)計學意義。然而,通過多因素Cox回歸分析,只有SIRT1高表達以及LVI陽性是影響患者五年無病生存期(P=0.029,0.018)以及總生存期(P=0.045,0.031)的獨立危險因素。結論：SIRT1高表達與腫瘤的發(fā)展、微淋巴管生成、LVI以及pN0期ESCC患者較差的預后間顯著相關。我們的研究顯示了SIRT1在預測患者不良預后方面的價值,并且提供了一種潛在的新的治療ESCC的靶點。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.1

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